戴安hplc基礎(chǔ)知識ppt課件-展示頁
2025-01-23 17:47本頁面
【正文】 SC)和氣液色譜法 (GLC)，其中以 GLC應(yīng)用最廣。 LC同樣可分為液固色譜法 (LSC)和液液色譜法 (LLC)。 按原理分： 吸附色譜法 (AC)、 分配色譜法 (DC)、 離子交換色譜法(IEC)、 排阻色譜法 (EC， 又稱分子篩 ) 、 凝膠過濾 (GFC)、 凝膠滲透色譜法 ( G P C ） 和親和色譜法 , 此外還有電泳 。 高速：流速為 ～ mL/min。在一根柱中同時分離成份可達(dá) 100種。同時消耗樣品少。 分辨率高：可選擇固定相和流動相以達(dá)到最佳分離效果。 樣品量少，容易回收：樣品經(jīng)過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。 廣泛應(yīng)用于各個領(lǐng)域： 醫(yī)藥 / 環(huán)保 / 石化 / 生命科學(xué) / 食品及農(nóng)業(yè) …… 在技術(shù)，理論及應(yīng)用上仍處于發(fā)展階段 HPLC在藥學(xué)中的應(yīng)用 含量測定 （最普遍應(yīng)用） 還包括有關(guān)物質(zhì)檢測，雜質(zhì) /有害物質(zhì)限量檢測。 鑒別 與薄層鑒別類似，被測物質(zhì)與對照品具有相同保留時間相當(dāng)于具有相同 Rf值，即初步認(rèn)為同一物質(zhì)。 分離純化樣品或制備對照品 （僅限制備型色譜） 高效液相色譜儀器介紹 HPLC的儀器配置 色譜泵 自動進(jìn)樣器 柱溫箱及色譜柱 檢測器 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 溶劑 液相 色譜的基本流程圖 流動相 泵 色 譜 柱 檢測 器 輸 液 系統(tǒng) 分離 系統(tǒng) 檢測 系統(tǒng) 記錄 系統(tǒng) A E G B C D F 進(jìn)樣閥 進(jìn)樣 系統(tǒng) P680A色譜泵前面板 屏 幕 光 標(biāo) 鍵 高 低 壓 極 限 顯 示 直 接 操 作 鍵 泵 開 關(guān) 鍵 功 能 鍵 遙 控 狀 態(tài) 顯 示 流速顯示 壓力顯示 P680A色譜泵內(nèi)部結(jié)構(gòu) 混合腔 真空脫氣泵 ( 在線脫氣 ) 壓力傳感器 蠕動泵 清洗瓶 一般為 50％甲醇，每周更換一次 清洗閥 比例閥 進(jìn)口單向閥 出口單向閥 泵 工作泵頭 平衡泵頭 壓力傳感器 混合腔 清洗閥 真空脫氣泵 比例閥 廢液 P680A LPG流路圖 低壓四元剃度泵（只有一個泵，四個通道，溶液泵前混合） 需配在線脫氣機，因為容易形成氣泡 P680 HPG流路圖 工作泵頭 平衡泵頭 壓力傳感器 混合腔 清 洗 閥 高壓二 /四元剃度泵（有二個泵，二 /四個通道，溶液泵后混合） 無需配在線脫氣機，因為不容易形成氣泡 溶劑選擇閥 六通閥 結(jié)構(gòu) 六通閥進(jìn)樣器是高效液相色譜系統(tǒng)中最理想的進(jìn)樣器，它是由圓形密封墊 (轉(zhuǎn)子 )和固定底座 (定子 )組成。 工作原理 手柄位進(jìn)樣 (Load)位置時，樣品經(jīng)微量進(jìn)樣針從進(jìn)樣孔注射進(jìn)定量環(huán)，定量環(huán)充滿后，多余樣品從放空孔排出； 將手柄轉(zhuǎn)動至進(jìn)樣 (Inject)位置時，閥與液相流路接通，由泵輸送的流動相沖洗定量環(huán)，推動樣品進(jìn)入液相分析柱進(jìn)行分析。 ← 色譜峰 保留時間（ min） 峰高 峰面積 基線 ↓ 液相色譜圖相關(guān)術(shù)語 色譜峰 － Peak 色譜柱流出組分通過檢測器時產(chǎn)生的響應(yīng)信號的微分曲線 峰底 － Peak Base 峰的起點與終點之間連接的直線 峰高 － Peak Height 峰最大值到峰底的距離 峰寬 － Peak Width 在峰兩側(cè)拐點處所作切線與峰底相交兩點之間的距離 半（高）峰寬 － Peak Width at Half Height 通過峰高的中點作平行于峰底的直線，其與峰兩側(cè)相交兩點之間的距離 液相色譜圖相關(guān)術(shù)語 峰面積 － Peak Area 峰與峰底之間的面積 ,又稱響應(yīng)值 標(biāo)準(zhǔn)偏差； σ － Standard Error 拖尾峰 － Tailing Peak 后沿較前沿平緩的不對稱峰 前伸峰 － Leading Peak 前沿較后沿平緩的不對稱峰 鬼峰 － Ghost Peak 并非由試樣所產(chǎn)生的峰 ； 亦稱假峰 液相色譜圖相關(guān)術(shù)語 基線 － Baseline 在正常操作條件下 ， 僅由流動相所產(chǎn)生的響應(yīng)信號的曲線 基線飄移 － Baseline Drift 基線隨時間定向的緩慢變化 基線噪聲； N － Baseline Noise 由各種因素所引起的基線波動 譜帶擴(kuò)展 － Band Broadening 由于縱向擴(kuò)散 ,傳質(zhì)阻力等因素的影響 ,使組分在色譜柱內(nèi)移動過程中譜帶寬度增加的現(xiàn)象 液相色譜圖相關(guān)術(shù)語 死時間， t0 － Dead time 不被固定相滯留的組分，從進(jìn)樣到出現(xiàn)峰最大值所需的時間 保留時間， tR － Retention time 組分從進(jìn)樣到出現(xiàn)峰最大值所需的時間 死體積 ， V0 － Dead volume 不被固定相滯留的組分，從進(jìn)樣到出現(xiàn)峰最大值所需的流動相體積 保留體積， VR － Retention volume 組分從進(jìn)樣到出現(xiàn)峰最大值所需的流動相體積 液相色譜的基本參數(shù)（色譜條件） 流動相：種類及配比，等度或梯度
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