蛋白質(zhì)化學(xué)ppt課件(2)-資料下載頁
2025-05-04 12:08本頁面
【正文】 丹磺酰氯法（ dansyl chloride） N ( C H3)2S O2C lH2N C H CR OH N C H CR OS O2N ( C H3)2+水解N ( C H3)2S O2 H N C H CR OO H+ 氨基酸丹磺酰氯多肽 N 端丹磺酰 N 端氨基酸丹磺酰氨基酸pH 8,9 H+, 2. 蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的測定 ? 此法是多肽鏈 C端氨基酸分析法。多肽與肼在無水條件下加熱， C端氨基酸即從肽鏈上解離出來，其余的氨基酸則變成肼化物。肼化物能夠與苯甲醛縮合成不溶于水的物質(zhì)而與 C端氨基酸分離。 末端基氨基酸測定 ? 肼解法 H 2 N C H CR OH N C H CR O OR nCC HH N O Hn 1N 端氨基酸 C 端氨基酸OR nCC HH 2 N O HH 2 N C H CR ON H N H 2 +H+N H 2 N H 2氨基酸酰肼 C 端氨基酸2. 蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的測定 (6)多肽鏈斷裂成多個肽段 ? 可采用兩種或多種不同的斷裂方法將多肽樣品斷裂成兩套或多套肽段或肽碎片，并將其分離開來。 (7)測定每個肽段的氨基酸順序 1 2 3 4 5 ? Edman(苯異硫氰酸酯法）氨基酸順序分析法 ? 實際上也是一種 N端分析法。此法的特點是能夠丌斷重復(fù)循環(huán)，將肽鏈 N端氨基酸殘基逐一迚行標記和解離。 (8)確定肽段在多肽鏈中的次序 利用兩套或多套肽段的氨基酸順序彼此間的交錯重疊，拼湊出整條多肽鏈的氨基酸順序。 (9)確定原多肽鏈中二硫鍵的位置 例題： ? 第一套肽段： QGS PS EQVE RLA HQWT； ? 第二套肽段： SEQ WTQG VERL APS HQ； ? N末端 H肽段， C末端為 S肽段； ? 則多肽鏈的順序： HQWT QGS EQVE RLA PS； 層析法 是利用被分離樣品中各組分的化學(xué)性質(zhì)的差別，使各組分以不同 比例 分布在兩個 物質(zhì)相 中 ； 其中一個相固定在一定的支持介質(zhì)上，稱為 固定相 ；另一個是移動的，稱為 移動相； 移動相 攜帶樣品流過 固定相 時，在流動過程中由于各組分在 兩相中分配比例 不同，從而以不同速度前進，達到分離的目的（產(chǎn)生分離效果）； 氨基酸的分離技術(shù) 層析法的原理 ? 原理： 此方法以濾紙為支持物，以濾紙纖維所吸附的水為固定相，以水飽和的有機溶劑為移動相 .將氨基酸的混合樣品點于濾紙上。 ? 分配定律： 當溶質(zhì)在兩種互丌相溶的溶劑中分配，并在一定溫度下達到平衡時，溶質(zhì)在兩相中的濃度 Cx（及溶解度）的比值為一常數(shù) 分配系數(shù)（ Kd） （ Kd） = Ca （溶質(zhì)在溶劑 A中的溶解度） Cb （溶質(zhì)在溶劑 B中的溶解度） 濾紙層析法 樣品混合液 濾紙 以水飽和的有機溶劑 非極性氨基酸 極性氨基酸 酸堿性氨基酸 故分離規(guī)律如下：濾紙從上至下 氨基酸的分離制備 作 業(yè) 題 ? 列舉幾個根據(jù) 分子大小丌同 的蛋白質(zhì)分離方法 ? 列舉幾個根據(jù) 溶解度差別 的蛋白質(zhì)分離方法 ? 簡述 層析技術(shù) 的原理；凝膠過濾、離子交換層析、親和層析的原理分別是什么？ ? 蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)測序的關(guān)鍵步驟
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