沉淀技術(shù)ppt課件-資料下載頁
2025-05-01 05:36本頁面
【正文】 因為無毒，不可燃性且對大多數(shù)蛋白質(zhì)有保護作用。 PEG沉淀法能在室溫下進行，得到的沉淀顆粒較大，收集容易。 ? PEG的分子量需大于 4000，最常用的是 6000和 20 000。所用的PEG濃度通常為 20％，濃度再高，會使粘度增大，造成沉淀的回收比較困難。 PEG對后續(xù)分離步驟，影響較少，因此可以不必除去。但它的存在會干擾 A280和 Lowry法測定蛋白質(zhì)． Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Department of Biochemical Engineering 43 第三章 沉淀技術(shù) 優(yōu)點：室溫條件下操作；沉淀的顆粒往往比較大；不容易破壞蛋白質(zhì)活性 。 缺點：所得的沉淀中含有大量的 PEG Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Department of Biochemical Engineering 44 第三章 沉淀技術(shù) ? 其他沉析技術(shù) 一、成鹽沉淀法 ：蛋白質(zhì)在堿性溶液中帶負電荷，能與金屬離子形成金屬復合鹽沉淀。常用的金屬離子 Zn2+ 、 Ca2+ 、 Pb2＋ ：含氮有機酸如苦味酸和鞣酸等能夠與有機分子的堿性功能團形成復合物而沉淀析出。 ：磷鎢酸、磷鉬酸等能與陽離子形式的蛋白質(zhì)形成溶解度極低的復合鹽，從而使蛋白質(zhì)沉淀析出 特點： 常使蛋白質(zhì)發(fā)生不可逆的沉淀，應用時必須謹慎。 Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Department of Biochemical Engineering 45 第三章 沉淀技術(shù) 二、選擇性變性沉淀法 選擇變性沉析法原理是利用蛋白質(zhì)、酶與核酸等生物大分子對某些物理或化學因素敏感性不同，而有選擇地使之變性沉析，以達到目的物與雜蛋白分離的技術(shù)，稱為選擇變性沉淀。 選擇性熱變性 選擇性酸堿變性 選擇性變性劑 Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Department of Biochemical Engineering 46 第三章 沉淀技術(shù) 熱沉淀 定義 在較高溫度下，熱穩(wěn)定性差的蛋白質(zhì)將發(fā)生變性沉淀，利用這一現(xiàn)象，可根據(jù)蛋白質(zhì)間的熱穩(wěn)定性的差別進行蛋白質(zhì)的熱沉淀，分離純化熱穩(wěn)定性高的目標產(chǎn)物。 適用對象 ：熱穩(wěn)定性高的蛋白質(zhì) Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Department of Biochemical Engineering 47 第三章 沉淀技術(shù) 實例 酵母干粉中加入 mol/L磷酸氫二鈉溶液， 37℃水浴保溫 2 h，室溫攪拌 3 h，離心收集上清液，升溫至 55℃ ，保溫 20 min后迅速冷卻離心去除熱變性蛋白，上清液中多為熱穩(wěn)定性較高的醇脫氫酶。 Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Department of Biochemical Engineering 48 第三章 沉淀技術(shù) 第三節(jié) 沉淀技術(shù)的應用 蛋白質(zhì) 蛋白質(zhì)（酶）的純化在粗分離階段常用到沉淀技術(shù)，以鹽析、有機溶劑沉淀、多聚物沉淀的應用最廣泛。 Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Department of Biochemical Engineering 49 第三章 沉淀技術(shù) 棉鈴蟲谷胱甘肽 S轉(zhuǎn)移酶（ glutathione Stransferase， GST）的純化 聚乙烯亞胺（ PEI） +硫酸銨 +PEG+親和層析，棉鈴蟲幼蟲中的 GST PEG10000PEG20220(NH4)2SO4 ? 多種沉淀技術(shù)的結(jié)合使用 Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Department of Biochemical Engineering 50 第三章 沉淀技術(shù) β 甘露聚糖酶（ β mannanase） 枯草芽孢桿菌發(fā)酵 丙酮沉淀 /(NH4)2SO4/PEG 比較后丙酮最佳 ? 不同沉淀技術(shù)的比較 Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Department of Biochemical Engineering 51 第三章 沉淀技術(shù) 核酸 ? 核酸的高電荷磷酸骨架（ 3）比蛋白質(zhì)，多糖等更具親水性 ? PEG應用于 DNA沉淀已普遍（ 磷酸緩沖液中 PEG濃度 10%） ? 酚、氯仿抽提后（變性蛋白質(zhì)），乙酸鈉中和磷酸骨架負電荷（降低其親水性，促聚集），乙醇可有效沉淀 DAN（有機溶劑沉淀） ? 分子克隆第三版 Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Department of Biochemical Engineering 52 第三章 沉淀技術(shù) 多糖 多糖提取的初級階段多用到乙醇沉淀或乙醇分級沉淀，選擇性沉淀（ TCA）去除多糖中的蛋白質(zhì)雜質(zhì)。 教材例子
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