沉淀技術(shù)ppt課件-文庫(kù)吧資料
2025-05-07 05:36本頁(yè)面
【正文】 淀蛋白質(zhì) 。 Department of Biochemical Engineering 31 第三章 沉淀技術(shù) （三） pH值 選擇在樣品穩(wěn)定的 pH值范圍內(nèi)，通常是選在等電點(diǎn)附近，從而提高此沉淀法的分辨能力。 ?一般認(rèn)為蛋白質(zhì)的初濃度以 ～ 2%（ 5 ~20mg/mL）為好，多糖則以 1～ 2％起始較合適。 Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Department of Biochemical Engineering 29 第三章 沉淀技術(shù) 影響有機(jī)溶劑沉析的因素 （一）溫度 多數(shù)生物大分子如蛋白質(zhì)、酶和核酸在有機(jī)溶劑中對(duì)溫度特別敏感，溫度稍高就會(huì)引起變性，且有機(jī)溶劑與水混合時(shí)產(chǎn)生放熱反應(yīng)，因此必須 預(yù)冷 ，操作要在冰鹽浴中進(jìn)行，加入有機(jī)溶劑時(shí)必須 緩慢且不斷攪拌 以免局部過(guò)濃。 較靜電作用占更主要的地位。 原理 Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Department of Biochemical Engineering 25 第三章 沉淀技術(shù) 脫鹽 透析 超濾 凝膠過(guò)濾層析 over Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Department of Biochemical Engineering 24 第三章 沉淀技術(shù) 沉淀的再溶解 ?1～ 2倍沉淀體積的下一步所用緩沖液溶解 ?不溶時(shí)可能是變性蛋白質(zhì)或雜質(zhì)，離心除去。但對(duì)于某些對(duì)溫度敏感的酶，要求在 0℃ ～ 4℃ 下操作，以避免活力喪失。 ? 在低離子強(qiáng)度溶液或純水中蛋白質(zhì)的溶解度大多數(shù)還是隨濃度升高而增加的。 Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section 蛋白質(zhì)的濃度 Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section 2) 低濃度的蛋白質(zhì)，共沉淀作用小，但回收率降低。 Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section 將其研成細(xì)粉，在攪拌下緩慢均勻少量多次地加入，接近計(jì)劃飽和度時(shí)，加鹽的速度更要慢一些，盡量避免局部硫酸銨濃度過(guò)大而造成不應(yīng)有的蛋白質(zhì)沉淀。 Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section 次常用 Na2SO4。 Department of Biochemical Engineering 18 第三章 沉淀技術(shù) 不易引起變性，有穩(wěn)定酶與蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的作用。 由于酶和各種蛋白質(zhì)通常是在低溫下穩(wěn)定，因而鹽析操作也要求在低溫下（ 0～ 4℃ ）進(jìn)行。 Department of Biochemical Engineering 16 第三章 沉淀技術(shù) 鹽析操作要點(diǎn) 無(wú)機(jī)鹽的挑選原則 ? 高溶解度，能配置高離子強(qiáng)度的鹽溶液； ? 溶解度受溫度的影響小； ? 鹽溶液的密度不高，便于蛋白質(zhì)沉淀和離心分離； ? 不易引起蛋白質(zhì)的變性； ? 價(jià)格低廉； Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section 4. β分段鹽析用于蛋白質(zhì)進(jìn)一步的精細(xì)分離純化。 2. β分段鹽析 ：在一定的離子強(qiáng)度下（ I ） ，改變?nèi)芤旱?pH、 T ，達(dá)到沉淀的目。 Department of Biochemical Engineering 14 第三章 沉淀技術(shù) β值的特性及對(duì)鹽析的影響 ?表示不外加鹽時(shí)的理想溶解度 S， 肯定受到溫度、 pH的影響 ； ?pH的影響： β 在 pI時(shí)最?。ㄕ{(diào)節(jié) pH可以導(dǎo)致蛋白質(zhì)凈電荷數(shù)變化） ?溫度的影響：高離子強(qiáng)度溶液中，溫度升高一般使 β下降（溫度升高利于鹽的溶解，奪取更多的水分子，使蛋白質(zhì)溶解性更差） lgS =βksI Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section 鹽濃度 ↑→ 離子強(qiáng)度 I↑→S↓→ 析出。 Department of Biochemical Engineering 12 第三章 沉淀技術(shù) 鹽析公式及討論 ?蛋白質(zhì)溶解度與溶液中離子強(qiáng)度關(guān)系 ： ?lgS =βksI ?S，蛋白質(zhì)溶解度（ g/L） ?I=(1/2)∑cizi2 ?β為常數(shù)， I=0時(shí)的 lgS ?ks為鹽析常數(shù)，與鹽性質(zhì)（離子價(jià)數(shù)、離子半徑等）、蛋白結(jié)構(gòu)有關(guān)， ks越大，鹽析效果越好（ S越小，越易沉淀） Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Department of Biochemical Engineering 11 第三章 沉淀技術(shù) 加入高濃度中性鹽后，鹽離子與生物分子表面的帶相反電荷的
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