核酸發(fā)酵ppt課件-資料下載頁
2025-05-01 01:09本頁面
【正文】 80年代年產(chǎn)量已達(dá) 4000 噸左右。中國目前年產(chǎn) 5′肌苷酸和 5′鳥苷酸能力為 50～ 80噸。 無色至白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末。水溶液在 pH值 2～ 14范圍內(nèi)穩(wěn)定。加熱 30～ 60min幾乎無變化， 250℃ 時分解。 539。鳥苷酸二鈉有特殊香菇滋味，鮮味程度約為肌苷酸鈉的三倍以上， 539。鳥苷酸二鈉常與谷氨酸鈉配合使用 (加入量 1%～ 5％ )，有十分明顯的增鮮作用。亦與肌苷酸二鈉混合配制成呈味核苷酸二鈉，作混合味精用。 167。 3 核酸類物質(zhì)生產(chǎn)各論 鳥苷酸的代謝調(diào)控及發(fā)酵機(jī)制 PRPP PRA 5,IMP AMP GMP ADP SAMP XMP 枯草芽孢桿菌嘌呤核苷酸生物合成調(diào)節(jié)機(jī)制 反饋抑制 反饋阻遏 IR 嘌呤核苷酸生物合成途徑的關(guān)鍵酶： PRPP轉(zhuǎn)酰胺酶、 IMP脫氫酶和 SAMP合成酶。 PRPP轉(zhuǎn)酰胺酶被 AMP、 ADP完全反饋抑制，IMP、 GMP、 XMP、 ATP對其抑制較弱 肌苷酸脫氫酶受 GMP系物質(zhì)的反饋阻遏。其次受 ATP、 XMP、 GTP的反饋抑制。 在枯草芽孢桿菌中， GMP合成中的專一性酶（ IMP脫氫酶）僅受 GMP系物質(zhì)的反饋阻遏。 從 IMP合成 AMP、 GMP。傾向于優(yōu)先合成 GMP。 GMP發(fā)酵應(yīng)具備的條件： 因枯草芽孢桿菌具有 GMP的環(huán)形支路： 菌株因喪失 SAMP合成酶（ Ade－ ）活性，切斷從 IMP到AMP的通路，使生成的 IMP全部轉(zhuǎn)向合成 GMP，同時喪失GMP還原酶活性，使生成的 GMP不致還原為 IMP。 為了積累鳥苷，核苷酶或核苷磷酸化酶等鳥苷分解酶的活性必須微弱； 鳥苷酸（ GMP）是嘌呤核苷酸全合成的終產(chǎn)物，為了積累鳥苷，必須解除 GMP對 PRPP轉(zhuǎn)胺酰酶， IMP脫氫酶及 GMP合成酶等的反饋抑制與阻遏。（封閉基因或選擇滲漏） 為了抑制肌苷產(chǎn)生，高效率積累鳥苷，由 IMP脫氫酶及 GMP所催化的反應(yīng)應(yīng)該比核苷酸酶（ IMPIR)所催化的反應(yīng)優(yōu)先進(jìn)行。 鳥苷的產(chǎn)生菌 枯草芽孢桿菌、產(chǎn)氨短桿菌、微黃短桿菌、銅綠假單孢菌都能產(chǎn)鳥苷。其中枯草芽孢桿菌代謝途徑清晰，一般作為選育鳥苷高產(chǎn)菌株的出發(fā)菌株。 鳥苷酸的助鮮作用比肌苷酸更強(qiáng)。直接發(fā)酵糖質(zhì)原料或利用鳥嘌呤作前體都能得到鳥苷酸。 GMP工業(yè)生產(chǎn)多用發(fā)酵法先制成鳥苷，然后通過微生物或化學(xué)磷酸化作用轉(zhuǎn)變?yōu)? GMP。生產(chǎn)鳥苷采用的菌種有枯草桿菌、短小芽孢桿菌、產(chǎn)氨短桿菌的多種變異株，它們的特點是生成必需嘌呤堿基并對嘌呤結(jié)構(gòu)類似物具有抗性，各菌株的鳥苷生成量達(dá) 10克 /升左右。 鳥苷的發(fā)酵工藝 工藝流程 試管斜面培養(yǎng) 搖瓶種子培養(yǎng) 二級種子罐培養(yǎng) 三級種子罐培養(yǎng) 發(fā)酵 板框壓濾 脫色 活性碳吸附 低溫結(jié)晶 精制 （ 2）操作說明 培養(yǎng)基：鳥苷酸發(fā)酵采用的都是營養(yǎng)缺陷型菌株，培養(yǎng)基中除碳源、氮源和無機(jī)鹽等基本成分，還需添加菌株所需的必需營養(yǎng)物質(zhì)。 （ 1）碳源：葡萄糖或麥芽糖， 10－ 12％，流加補(bǔ)糖。 （ 2）氮源： （ NH4） 2SO4或 NH4Cl，初始濃度 2％，發(fā)酵過程中流加氨水補(bǔ)充氮源和調(diào)解 pH。 （ 3）無機(jī)鹽：磷酸鹽、鎂鹽、鐵鹽、錳鹽。 （ 4）嘌呤前體物： L谷氨酸鈉等氨基酸。 （ 5）營養(yǎng)缺陷型菌株的營養(yǎng)物質(zhì)：腺嘌呤或者含各種嘌呤的酵母粉或酵母膏，限制性營養(yǎng)物質(zhì)必須是亞適量。 （ 5）生物素：亞適量，調(diào)節(jié)細(xì)胞膜的透性（ 610μ g/L） 。 培養(yǎng)條件 ① 投料量和接種量：投料量為發(fā)酵灌體積的 60－ 80％；接種量 9－ 10％。 ② 溫度控制： 0－ 24h溫度為 36℃ ， 24h后為 ℃ 。 ③ pH控制：發(fā)酵培養(yǎng)基起始 pH為 ，發(fā)酵 10h后通過流加氨水控制 pH在 ；發(fā)酵結(jié)束前 pH會突然上升，pH超過 。 ④ 罐壓與通風(fēng)比： 0－ 24h通氣比 1:。 24h后為1:(）。發(fā)酵過程中罐壓控制在 。 ⑤ 鳥苷的發(fā)酵周期為 48h。 鳥苷的提取工藝： （ 1）工藝流程 發(fā)酵液 過濾除菌體 一次結(jié)晶 過濾 鳥苷粗品 二次結(jié)晶 過濾 鳥苷 烘干、磨粉 脫色 過濾 包裝、成品 板框壓濾機(jī) （ 2）提取工藝說明 ① 過濾：發(fā)酵液加絮凝劑殼聚糖（ 1g/L)，升溫到 90－95℃ 。趁熱以板框壓濾機(jī)過濾，收集濾液，沸水洗滌濾餅，合并濾液。 ② 結(jié)晶：濾液在結(jié)晶罐中冷卻，獲得鳥苷粗品。 ③ 脫色：將鳥苷粗品、水、粉末活性碳（比例為10:200:1)于脫色罐中升溫至 90℃ 維持 1h，不斷攪拌。然后以板框壓濾機(jī)過濾，收集濾液，沸水洗滌濾餅，合并濾液?；钚蕴?(疏水或非極性吸附劑） ④ 結(jié)晶：濾液在結(jié)晶罐中冷卻到 10℃ ，結(jié)晶得鳥苷精品 ⑤ 烘干、包裝：鳥苷精品于 80℃ 干燥 12h，磨粉，過 40目篩，包裝 。
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