核酸備課用ppt課件-資料下載頁
2025-05-04 02:57本頁面
【正文】 的一般理化性質(zhì) （ 一 ） 核酸具有大分子的一般特性 。 表示核酸分子的大小通常用： （ bp） 數(shù) （ μ m） （ s） 相互關(guān)系為： 1bp=660道爾頓； 1μ m雙鏈 DNA=3 000bp或 2 106道爾頓。 目 錄 （ 二 ） 核酸分子中含有酸性磷酸基和堿基上的堿性基團(tuán) ， 故為兩性解離電解質(zhì) 。通常表現(xiàn)為酸性 。 因此可利用電泳和離子交換法分離不同的核酸 。 （ 三 ） 核酸分子中堿基含有共軛雙鍵 ， 具有吸收紫外線的性質(zhì) ， 最大吸收峰在260nm處 。 此特性用于核酸的定性 、 定量分析 。 目 錄 目 錄 1. DNA或 RNA的定量 OD260= 50μg/ml雙鏈 DNA 40μg/ml單鏈 DNA（或 RNA） 20μg/ml寡核苷酸 DNA純品 : OD260/OD280 = RNA純品 : OD260/OD280 = OD260的應(yīng)用 目 錄 目 錄 二、 DNA的變性 (denaturation) 定義 ： 在某些理化因素作用下， DNA雙鏈解開成兩條單鏈的過程。 方法： 過量酸，堿，加熱，變性試劑如尿素、 酰胺以及某些有機(jī)溶劑如乙醇、丙酮等。 變性后其它理化性質(zhì)變化： OD260增高 粘度下降 比旋度下降 浮力密度升高 酸堿滴定曲線改變 生物活性喪失 目 錄 目 錄 DNA變性的本質(zhì)是雙鏈間氫鍵的斷裂 目 錄 例：變性引起紫外吸收值的改變 DNA的紫外吸收光譜 ?增色效應(yīng)： DNA變性時(shí)其溶液 OD260增高的現(xiàn)象 。 目 錄 目 錄 熱變性 ?解鏈曲線： 如果在連續(xù)加熱 DNA的過程中以溫度對(duì) A260（ absorbance， A， A260代表溶液在260nm處的吸光率 ） 值作圖 ， 所得的曲線稱為解鏈曲線 。 目 錄 目 錄 ? Tm： 變性是在一個(gè)相當(dāng)窄的溫度范圍內(nèi)完成 ，在這一范圍內(nèi) ， 紫外光吸收值達(dá)到最大值的50%時(shí)的溫度稱為 DNA的解鏈溫度 ， 又稱融解溫度 (melting temperature, Tm) 。 其大小與G+C含量成正比 。 目 錄 目 錄 三、 DNA的復(fù)性與分子雜交 DNA復(fù)性 (renaturation)的定義 在適當(dāng)條件下，變性 DNA的兩條互補(bǔ)鏈可恢復(fù)天然的雙螺旋構(gòu)象，這一現(xiàn)象稱為 復(fù)性 。 減色效應(yīng) DNA復(fù)性時(shí)，其溶液 OD260降低。 熱變性的 DNA經(jīng)緩慢冷卻后即可復(fù)性，這一過程稱為 退火 (annealing) 。 目 錄 目 錄 在 DNA變性后的復(fù)性過程中 ， 如果將不同種類的 DNA單鏈分子或 RNA分子放在同一溶液中 ， 只要兩種單鏈分子之間存在著一定程度的堿基配對(duì)關(guān)系 ， 在適宜的條件 （ 溫度及離子強(qiáng)度 ） 下 ， 就可以在不同的分子間形成 雜化雙鏈 (heteroduplex)。 這種雜化雙鏈可以在不同的 DNA與 DNA之間形成 ， 也可以在 DNA和 RNA分子間或者RNA與 RNA分子間形成 。 這種現(xiàn)象稱為核酸分子雜交 。 核酸分子雜交 (hybridization) 目 錄 目 錄 目 錄 目 錄 核酸分子雜交的應(yīng)用 研究 DNA分子中某一種基因的位置 定兩種核酸分子間的序列相似性 檢測(cè)某些專一序列在待檢樣品中存在與否 是基因芯片技術(shù)的基礎(chǔ) 目 錄 第 五 節(jié) 核 酸 酶 Nuclease 目 錄 核酸酶 是指所有可以水解核酸的酶 ?依據(jù)底物不同分類 ?DNA酶 (deoxyribonuclease, DNase)： 專一降解 DNA。 ?RNA酶 (ribonuclease, RNase)： 專一降解 RNA。 ?依據(jù)切割部位不同 ?核酸內(nèi)切酶： 分為限制性核酸內(nèi)切酶和非特異性限制性核酸內(nèi)切酶。 ?核酸外切酶： 5180。→3 180?；?3180?！? 180。核酸外切酶。 目 錄 ?參與 DNA的合成與修復(fù)及 RNA合成后的剪接等重要基因復(fù)制和基因表達(dá)過程 ?負(fù)責(zé)清除多余的 、 結(jié)構(gòu)和功能異常的核酸 ，同時(shí)也可以清除侵入細(xì)胞的外源性核酸 ?在消化液中降解食物中的核酸以利吸收 ?體外重組 DNA技術(shù)中的重要工具酶 生物體內(nèi)的核酸酶負(fù)責(zé)細(xì)胞內(nèi)外催化核酸的降解 核酸酶的功能 目 錄 核 酶 ? 催化性 DNA (DNAzyme) 人工合成的寡聚脫氧核苷酸片段，也能序列特異性降解 RNA。 ? 催化性 RNA (ribozyme) 作為序列特異性的核酸內(nèi)切酶降解 mRNA。 目 錄 ？ ？ DNA與 RNA水解產(chǎn)物有何區(qū)別 ？ DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的基本內(nèi)容 ？ ？ 每種 RNA的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及有何功用 ？ Tm值 ？ 其影響因素有哪些 ？ ？ 引起變性的因素是什么 ？
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