目的基因獲得ppt課件-資料下載頁
2025-04-29 03:16本頁面
【正文】 號(hào)圖。用可疑病人的 cDNA做探針 與之雜交，檢查哪些基因的表達(dá)受抑制或激活 基因診斷。 未知序列目的基因的篩選 （ 5）用抗體篩選目的基因 ? cDNA應(yīng)克隆在表達(dá)載體中 ? 表達(dá)載體有使外源基因表達(dá)的必要調(diào)控部分。如啟動(dòng)子、 SD序列等。通過表達(dá)產(chǎn)物與抗體特定的結(jié)合來識(shí)別和分離目的 cDNA克隆。 未知序列目的基因的篩選 用抗體篩選目的 cDNA克隆 cDNA法克隆目的基因的局限性 ? 并非所有的 mRNA分子都具有 polyA結(jié)構(gòu) ? 細(xì)菌或原核生物的 mRNA半衰期很短 ? mRNA在細(xì)胞中含量少，對(duì)酶和堿極為敏感，分離純化困難 ? 僅限于克隆蛋白質(zhì)編碼基因 化學(xué)合成法的基本戰(zhàn)略 全基因合成 ? 根據(jù)目的基因全序列，將目的基因分成若干 1215堿基長的小片斷，兩條互補(bǔ)鏈分別設(shè)計(jì)成交錯(cuò)覆蓋的兩套小片斷。 ? 容易在退火時(shí)發(fā)生錯(cuò)配 化學(xué)合成法的基本戰(zhàn)略 ? 將目的基因的一條鏈分成若干 4050堿基的片斷，另一條設(shè)計(jì)成與之交錯(cuò)互補(bǔ)的 20個(gè)堿基小片段。 根據(jù)目的基因的全序列，分別合成 4050堿基長的單鏈 DNA片段，拼接模塊數(shù)大幅度減少，適合較大的基因合成。 化學(xué)合成法的基本戰(zhàn)略 化學(xué)合成法的基本戰(zhàn)略 ? 上述三種方法各有 利弊 ? 化學(xué)合成 DNA的單片段愈短，收率就愈高，但由于化學(xué)合成的份額較大，成本較高； ? 在大片段酶促法合成目的基因時(shí)，雖然化學(xué)合成的份額相對(duì)較小，成本較低，但大片段化學(xué)合成的收率極低。 DNA化學(xué)合成的用途 ? 合成天然基因 如生長激素釋放抑制素基因、腦啡肽基因、胰島素基因、干擾素基因等 ? 修飾改造基因 如組織型纖溶酶原激活劑基因、尿激酶原基因等 ? 設(shè)計(jì)新型基因 ? 制備探針、引物、接頭
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