細胞生物學習題與實驗-資料下載頁
2025-04-04 23:49本頁面
【正文】 6．計算吞噬百分數(shù)和吞噬指數(shù)： 吞噬百分數(shù)=100個巨噬細胞中吞噬了雞紅細胞的細胞數(shù)/100 吞噬指數(shù)=100個巨噬細胞吞噬的雞紅細胞總數(shù)/100實驗記錄：記錄巨噬細胞的吞噬情況糖原的顯示—PAS反應(yīng)（periodic acid schiff reaction）【目的要求】 通過PAS反應(yīng)，了解糖原顯示的基本原理、方法以及糖原在細胞中的分布?！净驹怼刻窃蒁葡萄糖的分支或直鏈組成，在肝和肌肉最豐富。過碘酸是一種強氧化劑，能將葡萄糖中乙二醇基（CHOHCHOH）氧化成二個游離醛基（—CHO），游離醛基與Schiff 試劑反應(yīng)生成紫紅色產(chǎn)物，顏色深淺與多糖含量成正比。由于單糖在固定、脫水和包埋等組織化學操作過程中被抽提掉，故一般組織標本上所能顯示的糖類主要是多糖，包括糖原、粘多糖、粘蛋白、糖蛋白和糖脂等。因此要確定此紅色物質(zhì)是否糖原還需要同時進行對照實驗。糖原可被唾液淀粉酶水解，先用唾液淀粉酶作用再進行PAS顯色，若反應(yīng)為陰性，則表明是糖原，反之則為其他多糖?！緦嶒炗闷贰?．器材：石蠟切片機，蓋玻片、載玻片、染色缸等．2．試劑（1） %過碘酸溶液（Periodic Acid Solution） （2）希夫試劑（Schiff39。s Reagent）見實驗3．材料：甘薯塊根，馬鈴薯塊莖和小鼠肝石蠟切片 【方法與步驟】1．切片染色（1）小鼠肝或馬鈴薯石蠟切片在二甲苯中脫臘10分鐘。（2）用梯度酒精按照從高到低的的順序復水，每級酒精停留25分鐘，直至蒸餾水。 （3）%過碘酸溶液作用5～15分鐘。 （4）蒸餾水沖洗。（5）入Schiff 試劑作用15～30分鐘。（6）新配制的亞硫酸溶液洗3次，每次1—2分鐘，以除去多余的無色品紅。（7）自來水沖洗直到切片變紅色。（8）用95%和100%酒精脫水。 二甲苯透明，封片，鏡檢。對照實驗：淀粉酶水解對照法。實驗結(jié)果：糖原、粘多糖、粘蛋白均顯PAS陽性紅色；糖原對照實驗PAS反應(yīng)為陰性。Feulgen反應(yīng)【目的要求】學習Feulgen反應(yīng)的原理及操作步驟，了解細胞中DNA的分布?！净驹怼縁eulgen反應(yīng)是系列反應(yīng)，包括DNA水解、顯色兩個主要反應(yīng)步驟。DNA經(jīng)弱酸（1mol/L HCL）60oC條件下水解，DNA分子中嘌呤堿基和與脫氧核糖間的糖苷鍵斷裂，在脫氧核糖的一端形成游離的醛基，這些醛基在原位與Schiff’s試劑（無色品紅亞硫酸溶液）反應(yīng)，形成紫紅色的化合物，因此，細胞內(nèi)含有DNA的部位會呈現(xiàn)紫紅色陽性反應(yīng)。孚爾根反應(yīng)對組織中的DNA高度專一。組織中除DNA外還有多糖、RNA和其它自由醛基（free aldehyde），固定劑也可能引導產(chǎn)生一些醛基，自由的醛基被鹽酸酸解消除，多糖在此反應(yīng)條件下不會產(chǎn)生裸露的醛基，絕大多數(shù)RNA經(jīng)1 mol/L鹽酸在60oC溫度下處理會降解為可溶性成分。對用戊二醛固定的材料，組織中可能含有較多的醛基，在染色前用硼氫化鈉處理就可破壞掉。只有DNA發(fā)生不完全水解并暴露出醛基，醛基與希夫試劑反應(yīng)生成紫紅色的產(chǎn)物。 【實驗用品】1．器材：真空泵、冰箱、切片機、烘箱、染色缸、水浴鍋、載玻片、蓋玻片。2．試劑（1）1mol/L HCL： 。（2）希夫試劑配制200 ml 蒸餾水煮沸， g 堿性品紅，攪拌溶解，溶液為紅色。待溶液冷至 50oC，過濾，加入10 ml 1 mol/L HCl，搖動；冷至25oC， g 偏重亞硫酸鈉（sodium bisulfite），搖均。黑暗中放置18 至24小時，直到溶液變成淡黃色或近于無色，此時，品紅已轉(zhuǎn)化為無色品紅衍生物，這一溶液稱為希夫試劑。當希夫試劑與醛基作用時，又呈現(xiàn)為紫紅色。如果急用，加幾?；钚蕴?，搖均，過濾。儲藏在棕色瓶中，于冰箱中保存可達24個月。（3）漂洗液（Sulfurous Acid Rinse）配制偏重亞硫酸鈉 5 ml1mol/L鹽酸 5ml蒸餾水 90 ml此溶液用時新鮮配制。配制漂洗液與配制希夫試劑所用偏重亞硫酸鈉必須一致。3．實驗材料：小鼠肝切片、洋蔥鱗莖表皮細胞、大豆根尖【方法與步驟】（1）切片二甲苯脫蠟經(jīng)各級酒精入蒸餾水（2）入冷1mol/L HCL 1min——入60oC1mol/L HCL 水解8min——入1mol/L HCL 片刻——蒸餾水洗（3）入Schiff試劑作用30～60min，隨時檢查顯色程度。（4）新配制亞硫酸溶液洗三次，每次2min，以除去多余的非特異性顏色。（5）自來水沖洗后鏡檢。（6）%亮綠復染 1min。（7）不同濃度的乙醇溶液脫水，二甲苯透明，樹膠封片。對照片：省去1mol/L HCL水解的步驟，其他步驟相同。 實驗結(jié)果：小鼠肝細胞的細胞核呈紫紅色。細胞質(zhì)部分呈綠色。用此方法檢測到的是DNA的定位，但根據(jù)顏色的深淺和多少，可判斷DNA的相對含量。對不同材料、不同發(fā)育時期進行觀察，有助于理解生長發(fā)育過程。10 / 1
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