細(xì)胞生物學(xué)習(xí)題與實驗(編輯修改稿)
2025-05-01 23:49 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 B、The permease that allows glucose and Na+ into the cell requires ATPC、The permease that pumps glucose from the cell into the blood requires ATPD、The Na+K+ATPase that pumps Na+ from the cell into the blood, maintaining low Na+ levels in the cellThe transport rate of a substance into a cell is drastically reduced when the formation of ATP is blocked. The transport system must be a form of ( )A、active transport B、facilitated diffusion C、simple diffusion D、both active transport and facilitated diffusion三、簡答（每小題4分，共32分）細(xì)胞學(xué)說及其意義。簡述三種質(zhì)子泵的基本特點。試述溶酶體酶在高爾基復(fù)合體中被準(zhǔn)確分揀的M6P途徑。細(xì)胞通過哪些途徑使受體失活，對刺激產(chǎn)生適應(yīng)？簡述NO的作用機(jī)理。舉出兩種人工細(xì)胞同步化的方法，并說明優(yōu)缺點。（任意2種方法）穿膜運輸一般有哪幾種方式，其各自的主要特點是什么？ 細(xì)胞外基質(zhì)的成分主要有哪幾類？其各自最主要的生物學(xué)功能是什么？四、實驗設(shè)計（20分）細(xì)胞凋亡是一個主動的由基因決定的自動結(jié)束生命的過程，受到嚴(yán)格的遺傳機(jī)制的調(diào)控，它與細(xì)胞壞死有截然不同的細(xì)胞學(xué)現(xiàn)象。試設(shè)計12個實驗方案來檢測凋亡細(xì)胞，要求寫明實驗原理、主要實驗儀器、主要方法步驟。小鼠骨髓細(xì)胞染色體標(biāo)本的制備【目的要求】掌握小鼠骨髓細(xì)胞染色體的制備方法，識別小鼠染色體的數(shù)目及特點【基本原理】骨髓細(xì)胞具有高度的分裂活性，經(jīng)秋水仙素或秋水酰胺處理后，使分裂細(xì)胞阻斷在有絲分裂中期，再經(jīng)低滲處理、固定、滴片、染色等步驟，可制作較好的骨髓細(xì)胞的染色體標(biāo)本?！緦嶒炗闷贰?．器材：解剖器具、注射器、離心機(jī)、離心管、恒溫水浴箱、載玻片、酒精燈等；2．試劑 %秋水仙素溶液、Carnoy’s固定液（甲醇：冰醋酸＝3：1）、 mol / L KCI溶液、Giemsa染液等。 3．材料：小鼠【方法與步驟】1．前處理 取材前3～4 h，向腹腔內(nèi)注射秋水仙素。注射濃度隨動物種類不同而異，一般每克體重注射2～6μg，注射總量不宜超過2 ml（例如一只體重50 g的蟾蜍，若按4μg / g注射，％ ml ）。秋水仙素的主要作用是使分裂細(xì)胞阻斷在有絲分裂中期，增加中期分裂相的比例。 2．取骨髓細(xì)胞 處死動物，用裝有生理鹽水的注射器反復(fù)沖洗出骨髓細(xì)胞，并用注射器筒輕輕吹打，使細(xì)胞團(tuán)塊分散，靜置片刻、待大組織團(tuán)塊沉淀后，用吸管將骨髓細(xì)胞懸浮液移至離心管中，以1000 r / min 離心5~10 min，棄去上清液。3．低滲 根據(jù)骨髓細(xì)胞液的多少， mol / L的 KCI液5～6 ml，在37℃水浴箱中或室溫下低滲20～30 min。低滲時間過長，易造成細(xì)胞破裂；時間過短，則染色體難以分散。4．預(yù)固定 低滲完畢，立即加入1 ml 新配制的預(yù)冷Carnoy’s固定液，用吸管將細(xì)胞輕輕吹打均勻，進(jìn)行預(yù)固定。然后以1000 r / min 離心8 min。5．固定 棄去上清液，加5～6 ml Carnoy’s液，輕輕吹打細(xì)胞，靜置固定20 min。離心棄去上清液，再加5～6 ml Carnoy’s液，固定20 min。 6．制備細(xì)胞懸液 離心棄去上清液，再加少許新鮮Carnoy’s固定液，用吸管將固定后的細(xì)胞吹散，并反復(fù)吹打混勻，制成濃集的細(xì)胞懸濁液。 7．準(zhǔn)備載玻片 滴片前1～2 h，將潔凈的載玻片放在0～4℃冰水中，使其表面附有一層水膜。這樣在滴片時，細(xì)胞懸液遇到載玻片上的冷水，染色體會迅速分散開來。 滴片法制備染色體標(biāo)本（引自王宗仁等）8．滴片 取出預(yù)冷的載玻片，將其傾斜約30176。放置。吸取細(xì)胞懸液，從距離載玻片40 cm 以上高度處滴至載玻片上2～3滴；滴片后立即用嘴或洗耳球?qū)?zhǔn)滴片處輕微吹氣；也可用鑷子夾住載玻片、在酒精燈火焰上迅速過幾下（見圖），這樣都有助于染色體分散和展開。9．干燥 使滴片在室溫下自然干燥，或在酒精燈火焰上烤干，也可用吹風(fēng)機(jī)冷風(fēng)吹干。 10．染色 待滴片充分干燥后，用pH （Giemsa原液：緩沖液＝1：10）染色30 min。然后自來水沖洗，空氣干燥。鏡檢。酸性磷酸酶的顯示（金屬沉淀法）【目的要求】1．熟悉酸性磷酸酶顯示方法的原理及操作步驟2．觀察酸性磷酸酶在細(xì)胞中的分布【基本原理】酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）主要存在于巨噬細(xì)胞，定位于溶酶體內(nèi)。在溶酶體膜穩(wěn)定完整時，底物不易滲入，ACP活力微弱或無活性，經(jīng)固定，在合適pH條件下，膜本身變?yōu)椴环€(wěn)定，逐漸改變其滲透性，底物可以滲入，酶活力被顯示。ACP在酸性條件下（）可使作用液中的底物β甘油磷酸鈉的磷酸根解離出來，進(jìn)而與溶液中硝酸鉛結(jié)合形成磷酸鉛沉淀，
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