[小學(xué)教育]1核酸結(jié)構(gòu)_性質(zhì)與功能-資料下載頁
2025-03-22 06:50本頁面
【正文】 （二）催化性小 RNA參與 RNA剪接加工 一些小 RNA分子具有催化特定 RNA降解的活性 ，在 RNA合成后的剪接中具有重要作用 。 這種具有催化作用的小 RNA亦被稱為 核酶 (ribozyme)或催化性 RNA (catalytic RNA) 。 （三）核仁小 RNA參與 rRNA甲基化修飾 （四）小干擾 RNA特異阻斷體內(nèi)同源基因的表達(dá) 核酸的理化性質(zhì) The Physical and Chemical Characters of Nucleic Acid ? 核酸的 酸堿及溶解度性質(zhì) – 核酸為多元酸，具有較強(qiáng)的酸性 。 – 可與金屬離子成鹽，不溶于乙醇或異丙醇 一、核酸具備多種基本物理化學(xué)性質(zhì) 核酸中的糖苷鍵和磷酸酯鍵都能被酸、堿和酶水解。 （一）核酸可被酸、堿水解 NHNNHNONH2NHNNNO HNH2GNHNHOONNO HOHUNHNHOOC H3NNO HOHC H3TNNNHNN H2NHNNHNN HANNHN H2ONHNHN HOC（二）核酸是兩性分子 ? 堿基可發(fā)生互變異構(gòu) ? 堿基在體液環(huán)境中以堿性解離為主 ? 核酸分子是酸性化合物 （三）核酸溶液具有高分子性質(zhì) ? 黏滯度 ： DNA 〉 RNA dsDNA 〉 ssDNA ? 沉降系數(shù) ： 溶液中的核酸在離心力場中可下沉。DNA分子經(jīng)反復(fù)盤曲形成超螺旋后，其沉降系數(shù)增加，超螺旋松解后其沉降系數(shù)減小。 （四）核酸具有紫外線吸收特性 ? 核酸的紫外吸收（ OD260） 單核苷酸 〉 ssDNA（或 RNA） 〉 dsDNA 腺嘌呤 1. DNA或 RNA的定量 A260= 50μg/ml雙鏈 DNA 40μg/ml單鏈 DNA（或 RNA） 20μg/ml寡核苷酸 2. 判斷核酸樣品的純度 DNA純品 : A260/A280 = RNA純品 : A260/A280 = A260的應(yīng)用 二、核酸 變性、復(fù)性是很多分子生物學(xué)技術(shù)操作的基礎(chǔ) 定義 ： 核酸的變性（ denaturation）指DNA雙螺旋之間的氫鍵斷裂變成單鏈、或 RNA局部氫鍵斷裂變成線性單鏈結(jié)構(gòu)的過程 （一）核酸變性是雙鏈解離為單鏈的過程 方法： 過量酸，堿，加熱，變性試劑如尿素以及某些有機(jī)溶劑如乙醇、丙酮等 變性后其它理化性質(zhì)變化： A260增高 粘度下降 比旋度下降 浮力密度升高 酸堿滴定曲線改變 生物活性喪失 DNA變性的本質(zhì)是雙鏈間氫鍵的斷裂 （二）核酸變性時(shí)伴有增色效應(yīng) DNA的紫外吸收光譜 ?增色效應(yīng)： DNA變性時(shí)其溶液 A260增高的現(xiàn)象 。 熱變性 ?解鏈曲線： 如果在連續(xù)加熱 DNA的過程中以溫度對 A260值作圖 ， 所得的曲線稱為解鏈曲線 。 融 解 溫 度 Tm7 6 1 0 0 C9 69 28 88 48 00 . 5 00 . 7 00 . 6 50 . 6 00 . 5 5光密度（260nm）5 0 %5 0 %? Tm： 變性是在一個(gè)相當(dāng)窄的溫度范圍內(nèi)完成 ， 在這一范圍內(nèi) ， 紫外光吸收值達(dá)到最大值的 50%時(shí)的溫度稱為 DNA的解鏈溫度 ， 又稱 熔 解 溫 度 (melting temperature, Tm)。 Tm值是 DNA變性的重要參數(shù) 影響因素 ： 1． DNA均一性決定熔解溫度范圍大??； 2． GC堿基對含量決定熔解溫度高低； 3．介質(zhì)中的離子強(qiáng)度影響變性。 Tm值的經(jīng)驗(yàn)公式是： Tm = +（ %G+C） （三）變性的 DNA可以復(fù)性 DNA復(fù)性 (renaturation)的定義 當(dāng)變性條件緩慢地除去后，兩條解離的互補(bǔ)單鏈可重新配對結(jié)合成為雙螺旋結(jié)構(gòu)，或恢復(fù)局部雙螺旋結(jié)構(gòu)。這一現(xiàn)象稱為 復(fù)性 。 減色效應(yīng) DNA復(fù)性時(shí)，其溶液 A260降低。 熱變性的 DNA經(jīng)緩慢冷卻后才可復(fù)性，這一過程稱為 退火 (annealing) 。 （四）利用變性、復(fù)性可進(jìn)行分子雜交 將不同來源的 DNA混合在一起 ， 經(jīng)熱變性后 ， 讓其慢慢冷卻復(fù)性 。 若這些異源 DNA之間在某些區(qū)域具有互補(bǔ)的序列 ， 復(fù)性時(shí)就會(huì)形成 雜化雙鏈 （ heteroduplex） 。 雜化雙鏈可以在不同的 DNA單鏈之間形成 ，也可在 RNA單鏈之間形成 ， 還可以在 DNA單鏈和 RNA單鏈之間形成 ， 其前提條件是兩種單鏈分子之間存在著一定程度的堿基配對關(guān)系 。這 種 現(xiàn) 象 稱 為 核 酸 分 子 雜 交（ hybridization） 。 DNADNA 雜交雙鏈分子 變性 復(fù)性 不同來源的DNA分子 核酸分子雜交的應(yīng)用 （ 1） Southern印跡 可檢測 DNA （ 2） Northern印跡 用于檢測 RNA 此外， 斑點(diǎn)印跡雜交 (Dot blot)和 DNA芯片 (DNA micray)技術(shù)也是 利用核酸雜交原理設(shè)計(jì)的。
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