核酸結(jié)構(gòu)的功能ppt課件-資料下載頁
2025-05-01 01:09本頁面
【正文】 DNA溶液中混雜的 RNA。 核酸是線性的大分子，其在溶液中的粘度很高。RNA分子比 DNA短，在溶液中的粘度低于 DNA。 第四節(jié) 核酸的理化性質(zhì) (The Physical and Chemical Characters of Nucleic Acid) 一、核酸的一般性質(zhì) 二、紫外吸收 (一 ) 由于嘌呤和嘧啶中含有共軛雙鍵，核酸在260nm處有最大吸收峰。 堿基的紫外光譜 240 250 260 270 280 波長 (nm) 2022 4000 6000 8000 10000 12022 14000 分子消光系數(shù) AMP GMP UMP CMP dTMP 1. DNA或 RNA的定量 OD260=： 50μg/ml雙鏈 DNA 40μg/ml單鏈 DNA（或 RNA） 20μg/ml寡核苷酸 DNA純品 : OD260/OD280 = RNA純品 : OD260/OD280 = (二 ) OD260的應(yīng)用 三、 DNA的變性與復(fù)性 (一 )變性 (denaturation) 在某些理化因素作用下， DNA雙鏈解開成兩條單鏈的過程。 本質(zhì)是雙鏈間氫鍵的斷裂。 ① OD260增高 ② 浮力密度升高 ③ 粘度下降 ④ 酸堿滴定曲線改變 ⑤ 比旋度下降 ⑥ 生物活性喪失 (1)理化性質(zhì)變化 強(qiáng)酸，強(qiáng)堿，高溫，高壓，變性試劑如尿素以及某些有機(jī)溶劑如乙醇等。 (2)增色效應(yīng)： DNA變性時(shí)其溶液 OD260增高的現(xiàn)象。 DNA的紫外吸收光譜 200 250 260 300 波長 (nm) 吸光度值 變性狀態(tài) 天然狀態(tài) (3)Tm： 紫外光吸收值達(dá)到最大值的 50%時(shí)的溫度稱為 DNA的解鏈溫度，又稱融解溫度 (melting temperature, Tm)。其大小與 G+C含量成正比。 解鏈曲線： 在連續(xù)加熱 DNA的過程中以溫度為橫坐標(biāo)，以吸光度 A260為縱坐標(biāo)作圖，所得的曲線稱為解鏈曲線。 76 80 84 88 92 96 100 ℃ OD260 Tm (二 )復(fù)性 (renaturation)的定義 (3)減色效應(yīng) ： DNA復(fù)性時(shí)，其溶液 OD260降低。 (1)當(dāng)變性因素去除后，變性 DNA的兩條互補(bǔ)鏈可恢復(fù)天然的雙螺旋構(gòu)象，這一現(xiàn)象稱為復(fù)性。 (2)熱變性的 DNA經(jīng)緩慢冷卻后即可復(fù)性，這一過程稱為退火 (annealing) 。 DNA復(fù)性過程中 ， 將不同種類的 DNA單鏈分子或 RNA分子置同一溶液中 ， 就可以形成 雜化雙鏈 (heteroduplex)。 DNA與 DNA之間形成 ，也可在 DNA和 RNA分子間或者 RNA與 RNA分子間形成 。 這種現(xiàn)象稱為 核酸分子雜交 。 (三 )核酸分子雜交 (hybridization) （ 1）研究 DNA分子中某一種基因的位置 （ 2）確定兩種核酸分子間的序列相似性 （ 3）檢測(cè)待檢樣品中是否存在某些專一序列 （ 4）該方法是基因芯片技術(shù)的基礎(chǔ)
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