章12節(jié)核酸的結(jié)構(gòu)與功能-資料下載頁
2025-05-03 08:30本頁面
【正文】 。 ? DNA的 e(p)值為 60008000， RNA為 700010000。 ? 核酸變性時 e(p)值顯著升高 ， 稱 增色效應(yīng) ， ? 變性的核酸復(fù)性后 ， e(p)值又回復(fù)到原來水平 ， 稱 減色效應(yīng) 。 ? 核酸的純度 Purity of DNA A260/A280: pure 五、核酸的酸堿性質(zhì) 兩個單核苷酸殘基間的磷酸 解離常數(shù) （即 pK值，為 pk=）較低。當(dāng)溶液 pH＞ 4時，核苷酸鏈中的磷酸全部解離，多陰離子，核酸為多元酸，具有一定的酸性，等電點較低。 ， DNA分子堿基對較穩(wěn)定，否則 DNA變性； RNA的最適 PH為 45。 六、核酸的變性、復(fù)性和雜交 （一） 變性 ：對 DNA加熱時， DNA雙鍵之間的氫鍵斷裂的過程，稱 DNA的 變性 或叫 DNA的 融解 。 DNA的變性的溫度范圍 窄 ，伴隨物理性質(zhì)變化，如粘度降低、功能喪失，光吸收增加。 增色效應(yīng) ： DNA在 260NM處 紫外 吸光值增加的現(xiàn)象。為變性指標(biāo)。 DNA分子有紫外吸收是因為嘧啶、嘌呤堿基；變性時 DNA雙螺旋內(nèi)的堿基充分暴露，提高了吸光值。 常把 e(p)吸收值到最高值的一半的溫度或吸收值增加的中點溫度稱 “ 熔點溫度 ” （ melting temperature,Tm）， Tm值一般在 7085℃ 之間 Effect of Alkali amp。 Application DNA denaturation at high pH keto form enolate form keto form enolate form Base pairing is not stable anymore because of the change of tautomeric (異構(gòu) ) states of the bases, resulting in DNA denaturation （酮式） （烯醇式） RNA hydrolyzes at higher pH because of 2’OH groups in RNA Effect of Alkali amp。 Application RNA is unstable at higher pH OH free 5’OH 2’, 3’cyclic phosphodiester alkali Chemical Denaturation Urea (H2NCONH2) (尿素） : denaturing PAGE Formamide (HCONH2)（甲酰胺） and formaldehide (甲醛 ): Northern blot Disrupting the hydrogen bonding of the bulk water solution Hydrophobic effect (aromatic bases) is reduced Denaturation of strands in double helical structure 影響 Tm值的因素 1 、 DNA的 均一性 ，均質(zhì) DNA熔解溫度范圍較小，異質(zhì)的較寬 GC含量 ： Tm與 GC含量成正比 ， 測定 Tm值 ， 可以推算出 DNA的堿基的百分組成： GC%=（ ） x 在 、 M NaCl溶液中 DNA的 Tm值與 GC含量成正比 ， GC含量越多 ， Tm值越高 。 介質(zhì)中的 離子強(qiáng)度 ：離子強(qiáng)度較低的介質(zhì)中， DNA的熔解溫度較低，離子強(qiáng)度較高的介質(zhì)中， DNA的 Tm值較高，且發(fā)生熔解的溫度范圍較小。因此， DNA制品不應(yīng)保存在極稀的電解溶液中。一般1M NaCl中保存較為穩(wěn)定。 （二） DNA的 復(fù)性 ：在適當(dāng)?shù)臈l件下，變性 DNA分子又可彼此重新締合成雙螺旋結(jié)構(gòu)，這一過程稱 復(fù)性 或 退火 。復(fù)性后物化性質(zhì)恢復(fù) DNA變性后 驟然冷 至低溫時，不能復(fù)性。 緩慢冷卻 時 ， 可以復(fù)性 變性 DNA的 片段 越大復(fù)性越慢 。 變性 DNA的 濃度 越高越容易復(fù)性 均質(zhì) 的較異質(zhì)的變性 DNA容易復(fù)性 真核細(xì)胞中的 重復(fù)序列 ， 復(fù)性最快 （三）分子雜交 變性 /復(fù)性理論的應(yīng)用：分子雜交 （即由 DNA復(fù)性研究發(fā)展而成的實驗技術(shù)）。 雜交可在 DNA之間，或 RNA之間。用于估計 DNA間的同源性，進(jìn)化相關(guān)性，DNA限制性片段等。 DNA： RNA雜交可經(jīng) RNA轉(zhuǎn)錄本檢測 DNA中特定基因的存在。
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