核酸的結(jié)構(gòu)和功能ppt課件-資料下載頁
2025-05-01 01:09本頁面
【正文】 性、定量分析。 1. DNA或 RNA的定量 OD260= 50 ?g/ml雙鏈 DNA 40 ?g/ml單鏈 DNA（或 RNA） 20 ?g/ml寡核苷酸 DNA純品 : OD260/OD280 = RNA純品 : OD260/OD280 = OD260的應(yīng)用 二、 DNA的變性 (denaturation) 定義 ： 在某些理化因素作用下， DNA雙鏈解開成兩條單鏈的過程。 變性因素： 過量酸，堿，加熱等。 變性后理化性質(zhì)的主要改變： OD260增高 粘度下降 DNA變性的本質(zhì)是雙鏈間氫鍵的斷裂 DNA的紫外吸收光譜 ?增色效應(yīng)： DNA變性時(shí)其溶液 OD260增高的現(xiàn)象 。 ?解鏈曲線： 在連續(xù)加熱 DNA的過程中以溫度對(duì) A260值作圖 ， 所得的曲線稱為解鏈曲線 。 ? Tm： 紫外光吸收值達(dá)到最大值的 50%時(shí)的溫度稱為 DNA的 解鏈溫度 ， 又稱融解溫度 (melting temperature, Tm)。 其大小與G+C含量成正比 。 三、 DNA的復(fù)性與分子雜交 DNA復(fù)性 (renaturation)的定義 在適當(dāng)條件下，變性 DNA的兩條互補(bǔ)鏈可恢復(fù)天然的雙螺旋構(gòu)象，這一現(xiàn)象稱為 復(fù)性 。 減色效應(yīng) DNA復(fù)性時(shí)，其溶液 OD260降低。 熱變性的 DNA經(jīng)緩慢冷卻后即可復(fù)性，這一過程稱為 退火 (annealing) 。 熱變性的 DNA在復(fù)性過程中，具有堿基序列部分互補(bǔ)的不同的 DNA之間或DNA與 RNA之間形成雜化雙鏈的現(xiàn)象。 核酸分子雜交 (hybridization)： 變性 復(fù)性 復(fù)性 核酸分子雜交的應(yīng)用 研究 DNA分子中某一種基因的位置 定兩種核酸分子間的序列相似性 檢測(cè)某些專一序列在待檢樣品中存在與否 是基因芯片技術(shù)的基礎(chǔ) 第五節(jié) 核 酸 酶 Nuclease 核酸酶 是指所有可以水解核酸的酶 ?依據(jù)底物不同分類 ?DNA酶 (deoxyribonuclease, DNase) ?RNA酶 (ribonuclease, RNase) ?依據(jù)切割部位不同分類 ?核酸內(nèi)切酶： 限制性核酸內(nèi)切酶 非特異性核酸內(nèi)切酶 ?核酸外切酶： 5180?！? 180?；?3180。→5 180。核酸外切酶。 ?參與 DNA的合成與修復(fù)及 RNA合成后的剪接等重要基因復(fù)制和基因表達(dá)過程 ?負(fù)責(zé)清除多余的 、 結(jié)構(gòu)和功能異常的核酸 ，同時(shí)也可以清除侵入細(xì)胞的外源性核酸 ?在消化液中降解食物中的核酸以利吸收 ?體外重組 DNA技術(shù)中的重要工具酶 生物體內(nèi)的核酸酶負(fù)責(zé)催化細(xì)胞內(nèi)外核酸的降解 核酸酶的功能 核 酶 ?催化性 DNA (DNAzyme) 人工合成的寡聚脫氧核苷酸片段，也能序列特異性降解 RNA。 ? 催化性 RNA (ribozyme) ? 序列特異性的核酸內(nèi)切酶 ? 參與 RNA轉(zhuǎn)錄后加工修飾 ? 作為針對(duì)病毒或腫瘤基因的藥物降解mRNA。
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