生物大分子相互作用-資料下載頁(yè)
2025-01-18 02:21本頁(yè)面
【正文】 消逝波 ?2. 等離子波 ?3. SPR的光學(xué)原理 ?當(dāng)光從光密介質(zhì)入射到光疏介質(zhì)時(shí)（ n1n2）就會(huì)有全反射現(xiàn)象的產(chǎn)生。 n1 sinθ1 = n2 sinθ2 菲涅爾定理： 密 疏 密 疏 這表示 沿 X軸方向傳播而振幅衰減 的一個(gè)波，這就是消逝波。全反射的光波會(huì)透過(guò)光疏介質(zhì)約為光波波長(zhǎng)的一個(gè)深度，再沿界面流動(dòng)約半個(gè)波長(zhǎng)再返回光密介質(zhì)。光的總能量沒(méi)有發(fā)生改變。透入光疏介質(zhì)的光波成為消逝波。 界面 疏 密 等離子體 等離子體通常是指由密度相當(dāng)高的自由正、負(fù)電荷組成的氣體，其中正、負(fù)帶電粒子數(shù)目幾乎相等。 金屬表面等離子波 把金屬的價(jià)電子看成是均勻正電荷背景下運(yùn)動(dòng)的電子氣體，這實(shí)際上也是一種等離子體。由于電磁振蕩形成了等離子波。 SPR光學(xué)原理 光在棱鏡與金屬膜表面上發(fā)生全反射現(xiàn)象時(shí)，會(huì)形成 消逝波 進(jìn)入到光疏介質(zhì)中，而在介質(zhì)（假設(shè)為金屬介質(zhì)）中又存在一定的 等離子波 。當(dāng)兩波相遇時(shí)可能會(huì)發(fā)生 共振 。 SPR光學(xué)原理 當(dāng)消逝波與表面等離子波發(fā)生共振時(shí)，檢測(cè)到的反射光強(qiáng)會(huì)大幅度地減弱。能量從光子轉(zhuǎn)移到表面等離子， 入射光的大部分能量被表面等離子波吸收，使得反射光的能量急劇減少。 SPR光學(xué)原理 可以從反射光強(qiáng)的響應(yīng)曲線(xiàn)看到一個(gè)最小的尖峰，此時(shí)對(duì)應(yīng)的入射光波長(zhǎng)為共振波長(zhǎng)，對(duì)應(yīng)的入射角為 SPR角。 SPR角隨金表面折射率變化而變化，而 折射率的變化又 與 金表面結(jié)合的分子質(zhì)量 成正比。這就是 SPR對(duì)物質(zhì)結(jié)合檢測(cè)的基本原理。 SPR的響應(yīng)模式 Biacore 3000的光學(xué)系統(tǒng) 傳感芯片 —— 分子敏感膜 成膜方法： 1. 金屬膜直接吸附法 2. 共價(jià)連接法（生物素 親和素、葡聚糖凝膠、水凝膠、高分子膜、多肽等） 3. 單分子復(fù)合膜法 4. 分子印膜技術(shù) 展望未來(lái) 如今， SPR技術(shù)已被廣泛地用來(lái)分析生物分子 Main Advantages 實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè) 無(wú)需標(biāo)記樣品 樣品需要極少 檢測(cè)過(guò)程方便快捷，靈敏度較高 應(yīng)用范圍廣泛 Disadvantages 傳感曲線(xiàn)經(jīng)常不符合假一級(jí)動(dòng)力學(xué) ? 多價(jià)結(jié)合 ? 多步結(jié)合反應(yīng) ? 空間位阻效應(yīng) ? 配體或者分析物的不均一 ? 擴(kuò)散速度限制 ? 重結(jié)合現(xiàn)象 熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù) 熒光能量共振轉(zhuǎn)移是距離很近的兩個(gè)熒光分子間產(chǎn)生的一種能量轉(zhuǎn)移現(xiàn)象。當(dāng)供體熒光分子的發(fā)射光譜與受體熒光分子的吸收光譜重疊，并且兩個(gè)分子的距離在 10nm范圍以?xún)?nèi)時(shí)，就會(huì)發(fā)生一種非放射性的能量轉(zhuǎn)移，即FRET現(xiàn)象，使得供體的熒光強(qiáng)度比它單獨(dú)存在時(shí)要低的多（熒光猝滅），而受體發(fā)射的熒光卻大大增強(qiáng)（敏化熒光）。 GFP近年來(lái)發(fā)展出了多種突變體，通過(guò)引入各種點(diǎn)突變使發(fā)光基團(tuán)的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜均發(fā)生變化而發(fā)出不同顏色的熒光，有 BFP， YFP， CFP等。這些突變體使 GFP應(yīng)用于 FRET成為可能 ,為 FRET技術(shù)用于活體檢測(cè)蛋白質(zhì)相互作用提供了良好的支持。 串聯(lián)親和純化 (TAP) 是近年來(lái)發(fā)展出來(lái)的一種能夠快速 研究生理?xiàng)l件下的蛋白質(zhì)相互作用、揭示蛋白質(zhì)復(fù)合體相互作用網(wǎng)絡(luò) 的新技術(shù)，如今已經(jīng)成為研究蛋白質(zhì)組學(xué)的一個(gè)廣泛采納的工具 這種技術(shù)使用特別設(shè)計(jì)的 純化標(biāo)簽 在非常接近于 生理?xiàng)l件 的情況下捕捉出特定的蛋白質(zhì)及其作用伙伴，借助于質(zhì)譜分析技術(shù)，研究人員就可鑒別出這種蛋白質(zhì)相互作用組。 標(biāo)簽共分 3部分： 蛋白 A 鈣調(diào)素結(jié)合多肽 (calmodulin binding peptide。 CBP) 中間連接的煙草病毒 (TEV)蛋白酶識(shí)別的酶切位點(diǎn)。 帶有 TAP標(biāo)簽的融合蛋白在細(xì)胞中表達(dá)，且與內(nèi)源相互作用蛋白形成復(fù)合物，細(xì)胞裂解后經(jīng) IsG偶聯(lián)的層析柱純化，蛋白 A與 IgG特異結(jié)合，從而使含有標(biāo)簽的復(fù)合物得到第一次純化。 為除去與柱填料非特異結(jié)合的蛋白，用 TEv酶切割分離蛋白 A標(biāo)簽，使含有靶蛋白的復(fù)合物與層析柱分離，并經(jīng)過(guò)鈣調(diào)素偶聯(lián)的親和層析柱進(jìn)行第二次純化，靶蛋白上的 CBP標(biāo)簽可與鈣調(diào)素結(jié)合； 在加入過(guò)量螯合劑后 CBP與親和層析柱分離使含有靶蛋白的復(fù)合體得到分離純化，經(jīng)十二烷基磺酸鈉 聚丙烯酰胺凝膠電泳 (SDS． PAGE)，復(fù)合物中的各個(gè)蛋白被分開(kāi)，切膠、胰酶消化后，即可通過(guò)質(zhì)譜鑒定復(fù)合物中各個(gè)蛋白的氨基酸序列。 Stitchseq技術(shù)
高考資料相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1