如何正確設(shè)計從生物樣品中分離純化生物大分子-資料下載頁
2025-01-13 20:56本頁面
【正文】 離心。純化蛋白質(zhì)大分子涉及 純度 和 產(chǎn)率 實際中兩者不能兼得，視目的而取舍。 （ 2） 前處理 ： ? 定義：把蛋白質(zhì)從原來的組織或細胞中以溶解的狀態(tài)釋放出來，并保持原來的 天然狀態(tài) ， 不丟失生物活性 。 ? 選擇適當(dāng)?shù)姆椒ǎ?破碎組織和細胞 ： ? 動物 組織和細胞：用電動搗碎機或勻漿器破碎或用超聲波處理法破碎； ? 植物 組織和細胞：使用石英砂和適當(dāng)?shù)奶崛∫阂黄鹧心サ姆椒ㄆ扑榛? 用纖維素酶處理。 ? 細菌 細胞：常用方法有超聲波振蕩，與砂研磨、高壓擠壓或溶菌酶處理等。 ? 如果蛋白質(zhì)主要 集中在某一亞細胞 ， 例如細胞核、染色體、核糖體或可溶性的細胞漿等。用差速離心方法分離， 收集亞細胞組分材料。 ? 如果蛋白質(zhì)是與 細胞膜或膜質(zhì)細胞器結(jié)合 ， 必須用超聲波或去污劑使膜結(jié)構(gòu)解聚。 （ 3） 粗分級 ： ? 定義 ：選用一套適當(dāng)方法，把蛋白質(zhì)混合物提取液中，所要的蛋白質(zhì)與其他雜蛋白質(zhì)分離開來。 ? 方法 ： 鹽析 、 等電點沉淀 和 有機溶劑分級分離 等方法。 （ 4） 細分級 ： ? 定義 ：樣品的進一步提純。 ? 方法 ： ? 層析法 ：凝膠過濾，離子交換層析，吸附層析以及親和層析等。 ? 電泳法 ：包括區(qū)帶電泳、等電聚焦等 （ 5） 進一步分離純化 ? 沉淀法 ：根據(jù)不同物質(zhì)在溶劑中的 溶解度不同 ，將目的蛋白質(zhì) 大分子轉(zhuǎn)入固相沉淀或留在液相，而與雜質(zhì)得到初步的分離。 ? 包括：鹽析、有機溶劑沉淀、結(jié)晶、等電點沉淀、選擇性沉淀等 ? 離心 ：懸液中的各種粒子（細胞，細胞器及分子）有 不同的分子量 或 密度 ，因此離心時有不同的速率。 ? 包括：差速離心、速率區(qū)帶離心 ? 電泳 ：物質(zhì)的 電荷 –質(zhì)量比 決定其在電場中移動的速度。各種蛋白質(zhì)在同一 pH條件下，因分子量和電荷數(shù)量不同而在電場中的遷移率不同而得以分開。 ? 包括： SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳凝膠（ SDSPAGE）、等電聚焦、雙向電泳、脈沖電泳 ? 層析 ：溶液中的蛋白質(zhì)分子能與固體表面進行結(jié)合及解離，但蛋白質(zhì)在 分子量 、 帶電性 和 結(jié)合特異性 方面的差異，與固體表面結(jié)合與解離的難易程度不一樣，因此流動的速度也不一樣。固定相由圓球形小株緊密堆積而成。小株的性質(zhì)決定分離成分。 ? 包括：吸附層析、凝膠過濾層析、離子交換層析、親和層析等 （ 6） 濃縮 ： ? 減壓加溫蒸發(fā)濃縮 ? 空氣流動蒸發(fā)濃縮 ? 冰凍法 ? 吸收法 ? 超濾法 （ 7） 干燥與保存 ： 真空干燥：適用于不耐高溫，易于氧化物質(zhì)的干燥和保存 干燥的制品一般比較穩(wěn)定， 在低溫 0－ 4 度，其活性在數(shù)日甚至數(shù)年無明顯變化。 By 10級七年二班 張效棟 周安妮 董捷 劉宇萌
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