紫外可見(jiàn)吸光光度法及分子熒光分析法-資料下載頁(yè)
2025-01-17 13:06本頁(yè)面
【正文】 棱鏡時(shí)折射率不同 玻璃 350～ 3200nm, 石英 185～ 4000 nm 39 光柵： 在鍍鋁的玻璃表面刻有數(shù)量很大的 等寬度等間距 條痕 (600、 1200、 2400條 /mm )。 利用光通過(guò)光柵時(shí)發(fā)生 衍射和干涉 現(xiàn)象而分光。 波長(zhǎng)范圍寬 , 色散均勻 , 分辨性能好 , 使用方便 . －平面透射光柵 －反射光柵 光柵衍射示意圖 M1 M2 出射狹縫 光屏 透鏡 平面透射光柵 40 ?樣品池： 用于盛放分析試樣（對(duì)液體試液） ?要求： 能透過(guò)有關(guān)輻射線 ，為減少光的損失，吸收池的光學(xué)面必須完全 垂直于 光束方向。 ?紫外光區(qū)：石英吸收池 ?可見(jiàn)光區(qū)：石英或玻璃吸收池 ?測(cè)定注意事項(xiàng)： ?參照池和吸收池應(yīng)是一對(duì)經(jīng)校正好的匹配吸收池。因?yàn)槲粘夭牧系谋旧砦馓卣饕约拔粘氐墓獬涕L(zhǎng)度的精度等對(duì)分析結(jié)果都有影響。 ?使用前后都應(yīng)將吸收池洗凈， 不能用手接觸窗口（光面） ?已匹配好的吸收池 不能用爐子或火焰干燥 41 光電倍增管 (Photomultiplier Tube, PMT) 1個(gè)光子可產(chǎn)生 106～ 107個(gè)電子 160700 nm 42 不同光區(qū)的吸光光度法儀器主要差異比較 可見(jiàn)光 （ 380～780nm） 紫外光 （ 200～380nm) 中紅外 （ ～ 50 ?m ) 光源 鎢燈 碘鎢燈 320～ 2500 氫燈 氘燈 180～ 375 硅碳棒 （紅外線） 吸收池 材料 玻璃 （ 350～ 3200） 石英 （ 185～4000） NaCl晶體 波長(zhǎng)校正： 利用光源中的穩(wěn)定線光譜或有穩(wěn)定亮線的外部光源，把光束導(dǎo)入光路進(jìn)行校正。如氘燈的 。 或者測(cè)定已知光譜樣品的光譜，與標(biāo)準(zhǔn)光譜對(duì)照進(jìn)行校正，如譜釹濾光片。一些紫外 可見(jiàn)光分光光度計(jì)具有自動(dòng)校正程序。 吸光度校正 :一般常用堿性重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行吸光度校正，測(cè)定的數(shù)值與標(biāo)準(zhǔn)吸光度表比較。 比色皿校正： 3 分光光度計(jì)的校正 ? ① 比色皿有方向性： 有些比色皿上印有方向標(biāo)志，使用時(shí)必須注意。校正無(wú)方向標(biāo)志的比色皿時(shí)，要先確定方向并作好標(biāo)志，以減少測(cè)定誤差。 ? ②同一組比色皿相互間的差異應(yīng)小于測(cè)定誤差。 測(cè)定同一溶液時(shí)，同組比色皿之間吸光度相差應(yīng)小于 ? ③ 校正比色皿的 光吸收誤差 時(shí)，應(yīng)將 純凈的蒸餾水 注入皿中，以其中 吸收最小的比色皿的吸光度為零 ，測(cè)定其它比色皿的吸光度。測(cè)定比色液時(shí)，應(yīng)將其吸光度 減去 比色皿的吸光度（ 平均值 ） ? ④ 校正比色皿 光程長(zhǎng)度誤差 時(shí)，可將吸光度約為 溶液注入皿中，測(cè)定其吸光度，以具有 準(zhǔn)確光程長(zhǎng)度的比色皿的吸光度與之比較，以標(biāo)準(zhǔn)比色皿的吸光度為基準(zhǔn)，分別求出其與各待校正比色皿的吸光度測(cè)定值的比值。測(cè)定比色液時(shí)，可將所測(cè)得的吸光度乘以各該比值 比色皿的校正 46 721或 752可見(jiàn)光分光光度計(jì)的使用 ?① 打開(kāi)光源，黃燈亮 ,預(yù)熱 10min ?② 用波長(zhǎng)旋鈕調(diào) λmax（或所選工作波長(zhǎng)） ?③ 打開(kāi) 樣品池暗箱蓋，斷開(kāi)光路， 調(diào)滿程（吸光度 A=∞）， 透光率 T=0 ?④ 選擇合適的 參比溶液 ，合上暗箱蓋，將參比池置于光路中， 調(diào)零（ A=0 ）， T=100%, ?⑤ 重復(fù)③和④至少兩遍 ?⑥測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣品的 吸光度 A 47 波長(zhǎng)選擇旋鈕 48 49 50 電源開(kāi)關(guān) 51 比色皿 52
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