吸光光度法工ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-01-14 11:27本頁(yè)面
【正文】 + 標(biāo)準(zhǔn)曲線 ， 空白溶液 作參比 例 :鄰二氮菲光度法測(cè) Li2CO3中的 Fe， 參比溶液為不含 Li2CO3樣品的所有試劑。 62 ， 但不與顯色劑反應(yīng)： ①顯色劑無(wú)吸收時(shí)： 試樣溶液 作參比。 如 測(cè)汽水中的 Fe ② 顯色劑略有吸收時(shí)： 于試液中加入掩蔽劑將被測(cè)成分掩蔽， 再加入顯色劑， 將該溶液 作參比。 63 吸光度讀數(shù)范圍的選擇 ? 光度計(jì)的讀數(shù)誤差一般為～ 2％ (ΔT),由于 T與濃度 c不是線性關(guān)系，故不同濃度時(shí)的 ΔT引起的誤差不同。 100 80 60 40 20 0 T% ?c1 ?c2 ?c3 ?T ?T ?T透光率讀數(shù)誤差 c ?c1 c1 ?c2 c2 ?c3 c3 64 吸光光度法中，儀器測(cè)量不準(zhǔn)也是誤差的主要來(lái)源。 A=lgT=εbc ⑴ 透過(guò)率讀數(shù)誤差 ?T基本是個(gè)常數(shù)， 因?yàn)?T的標(biāo)尺是均勻的， ?T是由儀器刻度讀數(shù)不可靠引起的誤差，和 T的大小無(wú)關(guān) 吸光度讀數(shù)誤差 ?A是隨著 A的不同而變化，因?yàn)?A的刻度標(biāo)尺是不均勻的， ?A隨著 A的增大而增大 65 不同的吸光度數(shù)值 A下，吸光度讀數(shù)誤差帶來(lái)的測(cè)定濃度誤差 dc/c是不同的 l g 0. 43 4 l n 0. 43 4 dTdA d T d T bd cT ?? ? ? ? ? ? ? （ 2 ）0 . 4 3 4 lgd c d A d Tc A T T? ? ?將 （ 2 ） （ 1 ） ： 0 . 4 3 4 lgcTc T T???用 有 限 值 表 示 為66 0 . 4 3 4 lgcTc T T??? （ 95 ） 假設(shè) △ T為 %，繪制不同透過(guò)率下濃度相對(duì)誤差變化曲線如圖 916（ p254）： T過(guò)高或過(guò)低，dc/c都是很大的， T在適宜的范圍內(nèi)測(cè)量誤差才是可以接受的 利用（ 95）公式令其導(dǎo)數(shù)為零，求出：T=（ A=）濃度誤差最小，約為 177。 %。 67 10 8 6 4 2 0 20 40 60 80 A T% Er r0. 43 4lg( 0. 01 )cTEc T TT??????() 濃度測(cè)量的相對(duì)誤差與 T(或 A)的關(guān)系 實(shí)際工作中，應(yīng)控制 T在 70 ～ 10 ％ , A在 ～ (調(diào) c, b, ?) 68 調(diào)整比色皿厚度和取樣量等達(dá)到 ★ 濃度誤差大小和 T/A的讀數(shù)范圍有關(guān)： T=70～ 10% / A=～ ， 濃度測(cè)量誤差為 %； 如果要求準(zhǔn)確度高些， 可控制 T=6520% /A= 69 吸光光度法的應(yīng)用 ? 1. 單一組分測(cè)定 （標(biāo)準(zhǔn)曲線法） 1) 金屬離子 : Fephen, Ni丁二酮肟 , Co鈷試劑 2) 磷的測(cè)定 : DNA中含 P～ %, RNA中含 P～ %, 可得核酸量 . H3PO4+12(NH4)2MoO4+21HNO3 =(NH4)3PO412MoO3+12NH4NO3+12H2O 磷鉬黃 (?小 ) Sn2+ 磷鉬 (V)藍(lán) (?大 ) 70 2. 多組分的測(cè)定 a)在 ?1處測(cè)組分 x, 在 ?2處測(cè)組分 y b) 在 ?1處測(cè)組分 x。 在 ?2處測(cè)總吸收 ,扣除 x吸收 ,可求 y c) x,y組分不能直接測(cè)定 P254 A1= ?x?1 bcx+ ?y?1 bcy (在 ?1處測(cè)得 A1) A2 = ?x?2 bcx+ ?y?2 bcy (在 ?2處測(cè)得 A2) ?x?1, ?y?1, ?x?2, ?y?2由 x,y純液 在 ?1, ?2處分別測(cè)得 71 3) 蛋白質(zhì)測(cè)定 — 溴甲酚綠、考馬司亮藍(lán)等 4) 氨基酸測(cè)定 — 茚三酮 (紫色化合物 ) 5) 水質(zhì)檢測(cè) : NH4+、 NO Mn2+、 Fe2+、SO4 Hg2+ 6) 藥物含量測(cè)定 — 比吸光系數(shù)定量；荷移光譜法測(cè)定 . 7) 紫外吸收 (UV): NO NO SO4SO3 CO3 SCN、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋白質(zhì)等。 72 5. 雙波長(zhǎng)分光光度法消除干擾 6. 導(dǎo)數(shù)分光光度法
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