【正文】 al marker） ?細胞學標記 (cytological marker) ?生化標記 (biochemical marker) ?分子標記 (molecular marker) 一、形態(tài)標記 即植物的外部形態(tài)特征。主要包括肉眼可見的外部特征，如：矮稈、紫鞘、卷葉等；也包括色素、生理特性、生殖特性、抗病蟲性等有關的一些特性。形態(tài)標記簡單直觀、經濟方便；但其數(shù)量在多數(shù)植物中是很有限的，且多態(tài)性較差，表現(xiàn)易受環(huán)境影響，并且有一些標記與不良性狀連鎖。此外形態(tài)標記的獲得需要通過誘變、分離純合的過程，周期較長。因此形態(tài)標記在作物遺傳育種中的作用是有限的。 二、細胞學標記 即植物細胞染色體的變異：包括染色體核型（染色體數(shù)目、結構、隨體有無、著絲粒位置等）和帶型（ C帶、 N帶、 G帶等）的變化。與形態(tài)標記相比，細胞學標記的優(yōu)點是能進行一些重要基因的染色體或染色體區(qū)域定位。但細胞學標記材料需要花費較大的人力和較長時間來培育，難度很大；同時某些物種對染色體變異反應敏感；還有些變異難以用細胞學方法進行檢測。因此到目前為止，真正應用于作物遺傳育種研究中的細胞學標記還很少。 三、生化標記 主要包括同工酶和等位酶標記。同工酶是：指結構不同、功能相似的酶，也即具有同一底物專一性的不同分子形式的酶。屬于一個以上基因座位編碼的酶的不同形式；而等位酶是指由一個基因座位的不同等位基因編碼的酶的不同分子形式。分析方法是從植物組織的蛋白粗提物中通過電泳和組織化學染色法將酶的多種形式轉變成肉眼可辯的酶譜帶型。 ?與形態(tài)標記、細胞學標記相比，生化標記具兩個方面的優(yōu)點：一是表現(xiàn)近中性，對植物經濟性狀一般沒有大的不良影響；二是直接反映了基因產物差異，受環(huán)境影響較小。但目前可使用的生化標記數(shù)量還相當有限，且有些酶的染色方法和電泳技術有一定難度，因此其實際應用受到一定限制。 四、分子標記（ DNA標記） 在遺傳學研究中廣泛應用的 DNA分子標記已經 發(fā)展了很多種，一般依其所用的分子生物學技 術大致可以分為兩大類： （ 1）是以 Southern雜交技術為核心的分子標記，（如 RFLP），這類分子標記被稱為第一代分子標記。 （ 2）是以 PCR技術為核心的分子標記，（如 STS、 RAPD、 AFLP、 SSR）等，這類分子標記被稱為第二代分子標記；單核苷酸多態(tài)性（ SNP）標記被稱為第三代分子標記 。它也是以 PCR技術為基礎的分子標記技術。 英文縮寫 英文名稱 中文名稱 RFLP Restriction fragment Iength polymorphism 限制性片段長度多態(tài)性 STS Sequence tagged site 序列標簽位點 RAPD R andom amplified polymor Phic DNA 隨機擴增多態(tài)性DNA AFLP Amplified frangment length Polymorphism 擴增片斷長度多態(tài)性 SSR Simple sequence repeat 簡單序列重復 SNP Simple mucleotide polymor phism 單核苷酸多態(tài)性 幾種主要的ＤＮＡ分子標記 幾種主要的分子標記 （一） RFLP標記：稱為限制性片段長度多態(tài)性，是指用某一種限制性內切酶來切割來自不同個體的 DNA分子上，內切酶的識別序列有差異， 即是由限制性酶切位點上堿基的插入、缺失、重排或點突變所引起的。 這種差異反映在酶切片段的長度和數(shù)目上。 RFLP標記是發(fā)展最早的 DNA標記技術。 RFLP技術主要包括以下基本步驟： DNA提取 用限制性內切酶酶切 DNA 、 用凝膠電泳分開 DNA片段 把 DNA片段轉移到濾膜上 利用放射性標記的探針雜交顯示特定的 DNA片段（ Southern雜交）和結果分析。 ?特點 A 無表型效應， RFLP標記的檢測不受環(huán)境條件和發(fā)育階段的影響。 B RFLP標記在等位基因之間是共顯性的，因此在配制雜交組合時不受雜交方式的影響。 C 在非等位的 RFLP標記之間不存在上位效應，因而互不干擾 D RFLP標記起源于基因組 DNA的自身變異，在數(shù)量上幾乎不受限制 E DNA需要量大，檢測技術繁雜，難以用于大規(guī)模的育種實踐中。 在植物分子標記輔助育種中需要將 RFLP轉換成以PCR為基礎的標記。 ? (二 )、 AFLP標記 AFLP：即擴增片段長度多態(tài)性 DNA（ amplified fragment polymorphism DNA)，指基因組 DNA經酶切后形成的限制性片段，在PCR引物識別下進行 PCR擴增反應，然后直接進行電泳分離和染色，由擴增產物所顯示出來的多態(tài)性。此法既具有 RFLP的優(yōu)點如穩(wěn)定性好、不受基因互作和環(huán)境條件影響，帶紋豐富等特點，又具有 PCR的用量少，靈敏度高、快速高效的功能優(yōu)點，是一種理想的分子標記。 ?PCR（ polymerase chain reaction)：聚合酶鏈式反應的簡稱 。 它是利用 DNA復制過程的一種模擬 。 其基本方法是試管內用一對與目的片段兩側兩條鏈互補的引物 ， 在 DNA聚合酶的作用下引發(fā)某段特異 DNA進行反復復制 ， 使之迅速擴增 ， 便于進一步分析研究 。 ? (三 )、 RAPD標記 williams等人 (1990)首次運用隨機引物擴增尋找多態(tài)性 DNA片段作為分子標記，并將此法 命名為隨機擴增多態(tài) DNA(random ampilfid polymorphism DNA， RAPD)。實際上 RAPD是一種特殊形式的 AFLP，它 與一般的 AFLP的最大區(qū)別是用于擴增多態(tài)性 DNA引物不是專一的而是隨機的 。 ? RAPD標記是建立于 PCR技術基礎上的，利用一系列不同的隨機排列堿基順序的寡聚核苷酸單鏈為引物，對所研究的基因組 DNA進行 PCR擴增。擴增產物通過電泳、染色來檢測擴增產物 DNA的多態(tài)性，這些產物 DNA片段的多態(tài)性反映了基因組相應區(qū)域的 DNA多態(tài)性。