浙江大學(xué)生物化學(xué)甲實(shí)驗(yàn)課件實(shí)驗(yàn)8植物基因組dna的提取-資料下載頁
2025-01-16 05:59本頁面
【正文】 OD260/OD280 ＞ ，表示有 RNA污染； OD260/OD280 ＜ ，表示有蛋白質(zhì)、酚等污染。 ⑵ RNA純度： ＜ OD260/OD280＜ ，表示為純的 RNA； OD260/OD280 ＜ ，表示有蛋白質(zhì)或酚污染； OD260/OD280 ＞ ，表示可能有異硫氰酸殘存。 ⑶ OD230/OD260的比值應(yīng)在 ，若比值較高說明有殘余的鹽和小分子如核苷酸、氨基酸、酚等的存在。 若樣品不純，則比值發(fā)生變化，此時(shí)無法用分光光度法對核酸進(jìn)行定量；同時(shí)也會影響酶切和 PCR的效果。 三、實(shí)驗(yàn)材料與試劑 實(shí)驗(yàn)材料 植物基因組 DNA樣品 實(shí)驗(yàn)試劑 ⑴ ddH2O； ⑵ TE緩沖液（ pH ）。 四、實(shí)驗(yàn)器材與儀器 離心機(jī)、離心管（ 5ml）及離心管架； 微量移液器 10ul、 200ul、 1000ul及槍頭； 紫外分光光度計(jì)； 石英比色皿（ ）或 1cm光徑的微量石英比色皿（ 50ul、 100ul）。 五、實(shí)驗(yàn)操作方法和步驟 方法 1： 將提取的植物基因組 DNA樣品吸取 20ul，加到新的 5ml離心管中，再加一定量的 ddH2O 或 TE緩沖液（ pH ）稀釋 100倍， 用 （約需 ）或 微量石英比色皿 在紫外分光光度計(jì)上測定 230nm、 260nm、280nm處的吸光度。計(jì)算植物基因組 DNA樣品溶液的 DNA的含量以及 DNA樣品的純度。 方法 2： 直接取植物基因組 DNA樣品微量原液（ 1～ 2ul)，用分光光度計(jì)進(jìn)行自動(dòng)測定出 230nm、 260nm、 280nm處的吸光度值，計(jì)算植物基因組 DNA樣品溶液的DNA的含量以及 DNA樣品的純度。 ⑴ 用 TE調(diào) 0（空白）： ⑵ 取植物基因組 DNA樣品原液 1～ 2ul，進(jìn)行自動(dòng)測定 230nm、 260nm、 280nm處的吸光度值： 六、計(jì)算 植物基因組 DNA樣品溶液的 DNA的含量： DNA（ μg/μl ） = 50 OD260讀數(shù) 2* DNA樣品稀釋倍數(shù) /1000 （ * 用 2 ，用 1cm光徑石英比色皿 1。） 植物基因組 DNA樣品溶液的 DNA的純度： OD260/OD280＝ OD230/OD260＝ 樣品純度判斷： ⑴ OD260/OD280 ≈ ，表示為純的 DNA； ⑵ OD260/OD280 ＞ ，表示有 RNA污染； ⑶ OD260/OD280 ＜ ，表示有蛋白質(zhì)、酚等污染。 七、結(jié)果分析討論 下 次 實(shí) 驗(yàn) 課 自主設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)與實(shí)踐 —— 開題報(bào)告 遞交： 《 自主設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)與實(shí)踐課題申請書 》 及“實(shí)驗(yàn)藥品、器材和儀器需量申領(lǐng)表”
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