浙江大學(xué)生物化學(xué)甲實驗課件實驗8植物基因組dna的提取-資料下載頁
2025-01-16 05:59本頁面
【正文】 OD260/OD280 ＞ ，表示有 RNA污染； OD260/OD280 ＜ ，表示有蛋白質(zhì)、酚等污染。 ⑵ RNA純度： ＜ OD260/OD280＜ ，表示為純的 RNA； OD260/OD280 ＜ ，表示有蛋白質(zhì)或酚污染； OD260/OD280 ＞ ，表示可能有異硫氰酸殘存。 ⑶ OD230/OD260的比值應(yīng)在 ，若比值較高說明有殘余的鹽和小分子如核苷酸、氨基酸、酚等的存在。 若樣品不純，則比值發(fā)生變化，此時無法用分光光度法對核酸進(jìn)行定量；同時也會影響酶切和 PCR的效果。 三、實驗材料與試劑 實驗材料 植物基因組 DNA樣品 實驗試劑 ⑴ ddH2O； ⑵ TE緩沖液（ pH ）。 四、實驗器材與儀器 離心機(jī)、離心管（ 5ml）及離心管架； 微量移液器 10ul、 200ul、 1000ul及槍頭； 紫外分光光度計； 石英比色皿（ ）或 1cm光徑的微量石英比色皿（ 50ul、 100ul）。 五、實驗操作方法和步驟 方法 1： 將提取的植物基因組 DNA樣品吸取 20ul，加到新的 5ml離心管中，再加一定量的 ddH2O 或 TE緩沖液（ pH ）稀釋 100倍， 用 （約需 ）或 微量石英比色皿 在紫外分光光度計上測定 230nm、 260nm、280nm處的吸光度。計算植物基因組 DNA樣品溶液的 DNA的含量以及 DNA樣品的純度。 方法 2： 直接取植物基因組 DNA樣品微量原液（ 1～ 2ul)，用分光光度計進(jìn)行自動測定出 230nm、 260nm、 280nm處的吸光度值，計算植物基因組 DNA樣品溶液的DNA的含量以及 DNA樣品的純度。 ⑴ 用 TE調(diào) 0（空白）： ⑵ 取植物基因組 DNA樣品原液 1～ 2ul，進(jìn)行自動測定 230nm、 260nm、 280nm處的吸光度值： 六、計算 植物基因組 DNA樣品溶液的 DNA的含量： DNA（ μg/μl ） = 50 OD260讀數(shù) 2* DNA樣品稀釋倍數(shù) /1000 （ * 用 2 ，用 1cm光徑石英比色皿 1。） 植物基因組 DNA樣品溶液的 DNA的純度： OD260/OD280＝ OD230/OD260＝ 樣品純度判斷： ⑴ OD260/OD280 ≈ ，表示為純的 DNA； ⑵ OD260/OD280 ＞ ，表示有 RNA污染； ⑶ OD260/OD280 ＜ ，表示有蛋白質(zhì)、酚等污染。 七、結(jié)果分析討論 下 次 實 驗 課 自主設(shè)計實驗與實踐 —— 開題報告 遞交： 《 自主設(shè)計實驗與實踐課題申請書 》 及“實驗藥品、器材和儀器需量申領(lǐng)表”
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1