人類基因組dna提取-資料下載頁
2025-05-13 10:18本頁面
【正文】 不易分辨，造成條帶缺失現(xiàn)象。 緩沖液 : 常用的緩沖液有 TAE和 TBE， 而 TBE比 TAE有著更好的緩沖能力 。 使用新制的緩沖液可以明顯提高電泳效果 。 注意：電泳緩沖液多次使用后 ， 離子強(qiáng)度降低 ，pH值上升 ， 緩沖性能下降 ， 可能使 DNA電泳產(chǎn)生條帶 模糊和不規(guī)則 的 DNA帶遷移的現(xiàn)象 。 電壓和溫度 : 電泳時電壓不應(yīng)該超過 20V/cm， 電泳溫度應(yīng)該低于 30℃ ， 對于 巨大的 DNA電泳 ， 溫度應(yīng)該低于15℃ 。 注意：如果電泳時電壓和溫度過高 ， 可能導(dǎo)致出現(xiàn) 條帶模糊和不規(guī)則的 DNA帶遷移 的現(xiàn)象 。 特別是 電壓太大可能導(dǎo)致小片段跑出膠而出現(xiàn)缺帶現(xiàn)象 DNA電泳一定要使用 DNA Marker或已知大小的正對照 DNA來估計 DNA片段大小 。 Marker應(yīng)該選擇在目標(biāo)片段大小附近 ladder較密的 ， 這樣對目標(biāo)片段大小的估計比較準(zhǔn)確 。需要注意的是 Marker的電泳同樣要符合 DNA電泳的操作標(biāo)準(zhǔn) 。 核酸染色劑 實驗室常用的核酸染色劑是 溴化乙錠 （ EB） 溴化乙錠 （ EB） ：是一種吖啶類染料 ， 它在紫外燈照射下能發(fā)射熒光 ， 當(dāng) DNA樣品在瓊脂糖凝膠中電泳時 ， 瓊脂糖凝膠中的 EB就插入 DNA分子中形成熒光絡(luò)合物 ， 使 DNA發(fā)射的熒光增強(qiáng)幾十倍 ， 電泳后就可直接紫外燈照射檢測瓊脂糖中的 DNA ?優(yōu)點：染色效果好 ， 操作方便 ?缺點：穩(wěn)定性差 ， 具有毒性 。 ?注意：觀察凝膠時應(yīng)根據(jù)染料不同使用合適的光源和激發(fā)波長 ， 如果激發(fā)波長不對 ， 條帶則不易觀察 ， 會出現(xiàn)條帶模糊的現(xiàn)象 。 DNA樣品的純度和狀態(tài) ?樣品中 含鹽量太高 和 含雜質(zhì)蛋白 均可以產(chǎn)生條帶模糊和條帶缺失的現(xiàn)象 。 乙醇沉淀可以去除多余的鹽 ， 用酚可以去除蛋白 。 ?變性的 DNA樣品 可能導(dǎo)致條帶模糊和缺失 ， 也可能出現(xiàn)不規(guī)則的 DNA條帶遷移 。 用 20mM NaCl緩沖液稀釋可以防止 DNA變性 DNA的上樣 正確的 DNA上樣量是條帶清晰的保證 。 注意太多的 DNA上樣量可能導(dǎo)致 DNA帶型模糊 ， 而太小的 DNA上樣量則導(dǎo)致帶信號弱甚至缺失 。 瓊脂糖凝膠電泳操作步驟 ?1 制備瓊脂糖凝膠 ?2. 膠板制備 ?3. 加樣 ?4. 電泳 ? ? 瓊脂糖凝膠電泳的應(yīng)用 ?檢測提取的 DNA ?設(shè)計完成引物，擴(kuò)增好基因序列，做完P(guān)CR后，檢測是否成功。 ?觀察限制性內(nèi)切酶的切割結(jié)果 ?通過切膠回收純化某個片段 實驗結(jié)果觀察及記錄 ?在波長為 254nm的長波長紫外燈下，觀察染色的或已加有 EB的電泳膠板 ?記錄下結(jié)果，找出實驗中的問題及不足。 謝謝 觀賞 Office Make Presentation much more fun @WPS官方微博 @kingsoftwp
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