浙江大學(xué)生物化學(xué)甲實(shí)驗(yàn)課件實(shí)驗(yàn)9氨基移換反應(yīng)及其產(chǎn)物的鑒定-資料下載頁(yè)
2025-01-16 05:47本頁(yè)面
【正文】 定和染色 電泳結(jié)束后，取下凝膠模，用專用鏟子撬開(kāi)短玻璃板，將凝膠一角切下做一加樣標(biāo)記，將凝膠板放在 ￠ 15cm培養(yǎng)皿內(nèi)，加入 染色液，固定、染色 30min左右， 脫色 棄去染色液，加入蒸餾水漂洗數(shù)次，再用脫色液脫色，直至蛋白質(zhì)區(qū)帶清晰為止。 六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 計(jì)算蛋白質(zhì)樣品相對(duì)分子質(zhì)量 將 ￠ 15cm培養(yǎng)皿放在一張坐標(biāo)紙上，量出加樣端距溴酚藍(lán)區(qū)帶中心間的距離（ cm）以及各蛋白質(zhì)樣品區(qū)帶中心與加樣端 (凝膠頂端 )的距離（ cm），按下式計(jì)算相對(duì)遷移率 Rf 蛋白樣品距加樣端距離 (cm) 相對(duì)遷移率 Rf＝ 溴酚藍(lán)區(qū)帶中心距加樣端距離 (cm) 列出電泳后各種蛋白質(zhì)的遷移率和分子量。 以標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的相對(duì)遷移率為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)分子質(zhì)量 lgM為縱坐標(biāo)在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上作圖，可得到一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)蛋白質(zhì)樣品的相對(duì)遷移率可直接在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其相對(duì)分子質(zhì)量。 蛋白質(zhì)樣品相對(duì)分子質(zhì)量（ Mr)＝ 畫(huà)出 SDS－ PAGE圖譜 ㈠ ㈩ 凝膠頂端（加樣端） 溴酚藍(lán)區(qū)帶中心 SDS－ PAGE圖譜 電泳方向 染料遷移距離 樣品遷移距離 區(qū)帶中心 作 標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)相對(duì)分子量的對(duì)數(shù)與電泳相對(duì)遷移率標(biāo)準(zhǔn)曲線圖 Mr Rf SDS— PAGE標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)相對(duì)分子量的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖 七、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析討論 八、參考資料 郭堯君， 蛋白質(zhì)電泳實(shí)驗(yàn)技術(shù)， 北京 ，科學(xué)出版社， 1999 李建武等，生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)原理和方法，北京大學(xué)出版社， 酶的基本性質(zhì)實(shí)驗(yàn) —— 底物專一性、激活劑和抑制劑、最適溫度 下 次 實(shí) 驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)六 丁鳴
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