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正文內(nèi)容

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2025-01-14 23:11本頁(yè)面
  

【正文】 大多數(shù)酶切位點(diǎn)的甲基化不影響切割,而有些會(huì)影響,如XbaI, BclI等。而且甲基化只發(fā)生在特定序列,以XbaI為例,只有在位點(diǎn)序列旁出現(xiàn)GA或TC,該XbaI位才會(huì)被甲基化。而要解除這種限制修飾作用通常有兩種方法:(1)選用上述酶的同功酶,如Sau3AI,DNA識(shí)別切割位點(diǎn)與MboI相同;但不受甲基化影響;(2)利用甲基化酶缺失的受體細(xì)胞進(jìn)行DNA的制備, JM110和鏈霉菌等,前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出,而后者細(xì)胞內(nèi)本就沒(méi)有甲基化酶,從這些細(xì)胞中抽提的 DNA就能被上述酶切割。 JM110要排除dam,dcm甲基化的影響,需要用特定的dam,dcm的菌株,如JM110如果由JM110或 SCS110等甲基化缺失的菌株產(chǎn)生的質(zhì)粒,則不會(huì)被甲基化.
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