hela細(xì)胞傳代培養(yǎng)ppt課件-資料下載頁
2025-01-14 03:41本頁面
【正文】 ％一 95％ ? 血清 5％一 20％（一般加 10％） ? 碳酸氫鈉 g/L ? 青、鏈霉素 各 100卑位／毫升 實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備 ? 培養(yǎng)基的配置 RPMI1640培養(yǎng)粉 1袋 碳酸氫鈉 g 青、鏈霉素 各 100單位／毫升 加三蒸水 至 1000ml, 過濾除菌。調(diào)節(jié) pH值至 加血清（終濃度 10％） 消化液的配置 ? 胰蛋白酶是一種黃白色粉末，用 D－ hanks配置。 配制常用的胰蛋白酶液濃度是 ％ 。用濾器過濾除菌 實(shí)驗(yàn)步驟 ? ，把實(shí)驗(yàn)中所需用具放到超凈臺(tái)上。 ? 2．從冰箱中取出 ％胰酶、 D－ Hanks、培養(yǎng)基?？梢园岩让负?D－ Hanks的瓶蓋打開或者擰松。 ? ，用尖吸管棄去舊的培養(yǎng)基，加入 D－ Hanks。輕輕搖動(dòng)后將 Hanks棄掉。 ? ，加入的量以覆蓋整個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)面為宜，輕輕搖動(dòng)。 2－ 5分鐘后迅速將消化液吸出。消化時(shí)間長(zhǎng)短是實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵，寧可短消化，不能過消化。否則細(xì)胞會(huì)變死。在倒置顯微鏡下觀察，當(dāng)細(xì)胞質(zhì)回縮，胞間間隙加大為消化適宜。 ? 5．取培養(yǎng)基加入細(xì)胞，反復(fù)輕輕吹打培養(yǎng)皿壁，制備細(xì)胞細(xì)胞懸液。吹打的部位均勻，從上到小，從左到右，順序進(jìn)行吹打，保證各個(gè)部位的培養(yǎng)細(xì)胞均能吹打到，成片的細(xì)胞已經(jīng)分散成小的細(xì)胞團(tuán)或者單細(xì)胞便停止吹打。吹打時(shí)用力不要過猛，盡量不要出現(xiàn)氣泡，以免損傷細(xì)胞。 ? 6．至所有細(xì)胞從培養(yǎng)皿底部脫落下來，然后吸取至離心管中。 1000 rpm離心 5分鐘。（無需準(zhǔn)確計(jì)數(shù)時(shí)離心可略） ? 7．細(xì)胞離心畢，尖吸管棄去上清，吸取培養(yǎng)基適量，加入離心管，將細(xì)胞重懸、吹勻。（無需準(zhǔn)確計(jì)數(shù)時(shí)離心可略） ? 8．吸量管吸取適量培養(yǎng)基 。細(xì)胞懸液 加入新的培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)密度為 1 105－ 106/ML。顯微鏡下觀察，搖勻，放入 37度 C02培養(yǎng)箱孵育。 ? 9．待培養(yǎng)基（本身為紅色），當(dāng) pH值降低，培養(yǎng)基呈偏淡紅色時(shí)，一般 2天以后，將舊的培養(yǎng)基吸掉，更換新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
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