w03細(xì)胞生物學(xué)研究方法-資料下載頁(yè)
2025-01-08 11:43本頁(yè)面
【正文】 已脫離了生物體免疫系統(tǒng)保護(hù) ， 是極易受 bacteria . 真菌等微生物的污染侵害 ， 培養(yǎng)基的選擇是決定 culture成敗的技術(shù)關(guān)鍵 ， 培養(yǎng)基主要成分包括：各種氨基酸 ， 維生素 ，碳水化合物 ， 無(wú)機(jī)鹽以及能促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng) ， 分裂的生長(zhǎng)素 ，細(xì)胞激動(dòng)素等 ， 動(dòng)物細(xì)胞 culture基中還需要增添胎牛血清 。 細(xì)胞培養(yǎng)方式： 液體懸浮培養(yǎng) ， 平板培養(yǎng) ， 回轉(zhuǎn)玻璃管培養(yǎng) 。 細(xì)胞培養(yǎng)的名詞概念： ? （ 1） 傳代：當(dāng)培養(yǎng)細(xì)胞 長(zhǎng)滿一層后 ， 分瓶接種再培養(yǎng) ，每傳一次稱為一代 （ 同時(shí)分裂生長(zhǎng)接觸一致 ） ? （ 2） 原代細(xì)胞：指從組織中分離出來(lái) ， 連續(xù)培養(yǎng)五代之內(nèi)的細(xì)胞 ? （ 3） 傳代細(xì)胞：連續(xù)培養(yǎng)五代以后的細(xì)胞 ? （ 4） 細(xì)胞株 (cell strain): 從原代培養(yǎng)物中接種出來(lái)的一群不均一的細(xì)胞群 （ 染色體數(shù)目不變 ， 不能無(wú)限長(zhǎng)期傳代 、 繁衍 ） 。 （ 5） 細(xì)胞系： cell line是具有固定特性和標(biāo)志的一個(gè)類型培養(yǎng)細(xì)胞 。 ? 細(xì)胞系一般都是轉(zhuǎn)化細(xì)胞 ， 可以無(wú)限傳代長(zhǎng)期繁衍下去 ， 每種細(xì)胞系都具有特殊的遺傳標(biāo)志特征 ， 例如具有某種生化藥劑的抗性突變基因 ， 而且這些遺傳標(biāo)志在繼續(xù)培養(yǎng)中可保持穩(wěn)定不變這樣才能被學(xué)術(shù)界公認(rèn)為是一個(gè)新的細(xì)胞系 ， （ 接觸不一致 ， 染色數(shù)目突變 ） 。 ? ? 細(xì)胞系是供細(xì)胞遺傳學(xué)，細(xì)胞生理學(xué)、免疫病理學(xué)研究工作用的好試驗(yàn)材料， ? 例如： Hela 細(xì)胞系是 1953年取自一位美國(guó)黑人婦女子宮頸癌上皮細(xì)胞，現(xiàn)在全世界都采用該細(xì)胞系做人類細(xì)胞生化等研究研究的典型材料；再如世界著名的動(dòng)物的細(xì)胞試驗(yàn)材料之一： CHO 細(xì)胞 line(Chinese hamster ootheea)取自中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢組織的細(xì)胞系。 （ 6） 克隆 clone： 即無(wú)性繁殖系 。 目前有植物 clone, 動(dòng)物 clone,微生物 clone, 胚胎 clone, 細(xì)胞 clone和分子 clone之分 ，細(xì)胞 clone即指由單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)繁殖而成的一群遺傳性狀完全相同的細(xì)胞群體 ， 如果一個(gè)細(xì)胞系是通過(guò) clone形成法產(chǎn)生的 ， 那么這個(gè)細(xì)胞系就可稱為一個(gè) clone。 圖 225 群體培養(yǎng)（左）和克隆培養(yǎng)（右） 圖 226 植物細(xì)胞培養(yǎng) ? 單克隆抗體技術(shù)是細(xì)胞雜交技術(shù)的成功應(yīng)用，正常淋巴細(xì)胞（如小鼠脾細(xì)胞）具有分泌抗體的能力，但不能在體外長(zhǎng)期培養(yǎng)，瘤細(xì)胞（如骨髓瘤）可以在體外長(zhǎng)期培養(yǎng)，但不分泌抗體。于是英國(guó)人 Kohler 和 Milstein 1975 將兩種細(xì)胞雜交，產(chǎn)生了能無(wú)限繁殖并能分泌抗體的雜交細(xì)胞而創(chuàng)立了單克隆抗體技術(shù)，獲 1984 年諾貝爾獎(jiǎng)。 圖 227 單克隆抗體技術(shù) （ 二 ） 細(xì)胞顯微操作技術(shù) micromanipulation ? 運(yùn)用結(jié)合操作可對(duì)細(xì)胞進(jìn)行微量注射 ， 細(xì)胞核移植 、膜電位測(cè)定 、 胚胎切割和 gene轉(zhuǎn)移等多種細(xì)胞生物學(xué) 研究工作 。 ? 顯微操作技術(shù)器的主體部分是光學(xué)顯微鏡加上顯微 操縱儀組成 ， 顯微操縱儀是能精密調(diào)節(jié)的微動(dòng)機(jī)械裝臵 ，可以在光鏡視野下控制微型解剖針 ， 微電極以及毛細(xì)吸管等器械對(duì)細(xì)胞進(jìn)行顯微手術(shù) 。 先進(jìn)的顯微操作器還裝有 閉路電視 ， 電腦和示波器 ， 可以邊操作 ， 邊監(jiān)視細(xì)胞內(nèi)的變化情況 ， 我國(guó)著名學(xué)者童第周教授 1963年就用顯微 操作器開(kāi)展細(xì)胞核移植研究動(dòng)物細(xì)胞的核質(zhì)關(guān)系 ， 1997年聞名的 “ 多莉 ” 克隆羊的前期研究工作就是細(xì)胞核 移植 。 顯微操作儀 （ 三 ） 細(xì)胞融合 （ cell fusion） 又稱細(xì)胞雜交（ cell hybridization） ， 用于基礎(chǔ)研究 。 ? 具有廣泛實(shí)用價(jià)值的細(xì)胞工程技術(shù)，即以融合因子誘導(dǎo)兩個(gè) or兩個(gè)以上的細(xì)胞融合成一體，形成新型的雜種細(xì)胞，細(xì)胞雜交不但可以在不同種 or不同屬生物的細(xì)胞之間進(jìn)行，而且還可以在親緣（關(guān)系）差距極大的細(xì)胞之間進(jìn)行，例如人的成纖維細(xì)胞與小鼠腫瘤細(xì)胞雜交、胡蘿卜的原生質(zhì)體與蟾蜍體細(xì)胞雜交等等。 誘導(dǎo)細(xì)胞雜交的融合因子： （ 1） 滅活的病毒 （ 例如仙臺(tái) virus,新城雞瘟 virus，皰疹 virus等可外分泌一種融合蛋白 ） ， rh表示融合 ? （ 2） 聚乙二醇 PEG， 溶血卵磷脂 。 ? （ 3） 高 pH值 ， 高鈣離子 （ 植物細(xì)胞融合 ） ? （ 4） 電脈沖細(xì)胞 rh 技術(shù) ? 被廣泛應(yīng)用于人類基因定位 ， 細(xì)胞分裂周期調(diào)控研究 ， 腫瘤免疫研究 ， 例如 “ 單 clone抗體 ” 就是細(xì)胞融合技術(shù)與免疫學(xué)技術(shù)的巧妙結(jié)合的產(chǎn)物 。 （ 四 ） 細(xì)胞拆合 : ? 用某些物理方法 （ 例如核移植 ， 去核 ） or 化學(xué)方法 （ 例如以細(xì)胞松馳素 B處理后離心去核 ） 把細(xì)胞拆開(kāi)為兩部分 —— 核體 （ karyoplast） 和胞質(zhì)體（ cytoplast） ， 再將來(lái)自不同種類細(xì)胞的這兩部分組合成 “ 重組細(xì)胞 ” ， 適用于基礎(chǔ)細(xì)胞研究和應(yīng)用基礎(chǔ)研究 ? 習(xí)題 ： ? 一 . 名詞解釋： ? ? ? ? 二 . 簡(jiǎn)答題 : ? 、掃描電鏡、 掃描隧道顯微鏡的原理 ? ? ? ? ? ? 的原理
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