酶學(xué)基礎(chǔ)ppt課件-資料下載頁
2025-01-08 05:54本頁面
【正文】 的活性部位上的序列，剪切點(diǎn)序列起到底物的作用。 ?自我剪切酶的活性依賴于酶的空間結(jié)構(gòu)和構(gòu)象的完整性及保守序列的穩(wěn)定性。 孫利芹 2022 孫利芹 2022 ?自我剪切酶的保守序列（催化中心序列）和剪切位點(diǎn)序列（底物序列）與酶的催化作用關(guān)系密切。 ?對自我剪切酶的結(jié)構(gòu)和功能關(guān)系的研究，可以了解酶催化中心的必需基團(tuán)，據(jù)此進(jìn)行分子改造，從催化分子內(nèi)反應(yīng)的 R酶設(shè)計(jì)出催化分子間反應(yīng)的 R酶。 孫利芹 2022 本節(jié)小結(jié) ?酶促反應(yīng)的本質(zhì)（酶的催化作用機(jī)理 /機(jī)制） ? 趨近與定向效應(yīng)、構(gòu)象變化效應(yīng)、酸堿催化機(jī)制、共價催化和微環(huán)境效應(yīng) ?核酸酶的自我剪接和剪切機(jī)制 ?酶與底物結(jié)合的模型理論 孫利芹 2022 ☆ 酶中間產(chǎn)物理論的提出 ☆ 米氏方程 ☆ 動力學(xué)參數(shù)的意義 ☆ 米氏方程圖解表示法 167。 酶催化反應(yīng)動力學(xué) Ⅰ —— 單底物反應(yīng)動力學(xué) 孫利芹 2022 ☆ 酶中間產(chǎn)物理論的提出 ※ 1902 年 ， Brown在研究 轉(zhuǎn)化酶催化蔗糖酶解的反應(yīng) 是發(fā)現(xiàn)，隨著底物濃度的， 反應(yīng)速度的上升成雙曲線 (酶被底物飽和 )。 ※ Brown （ 1902）和Henri(1903),提出 “ 中間產(chǎn)物 ” 假說 E + S ES E+P ※ 1913 年， Michaellis and Menton 歸納出米氏方程 ※ 1936 年 證實(shí) ES的存在 單底物酶促反應(yīng)中初速度對初底物 濃度在固定酶濃度下的曲線 [S0] V0 Vmax 零級反應(yīng) 一級反應(yīng) 孫利芹 2022 ☆ 米氏方程 ? ?? ?m a x 000 sVSVSk??公式推導(dǎo)： ◆ 對于單底物結(jié)合位點(diǎn)的單底物酶促反應(yīng)，可表示如下形式： K2 k1 E P E ES S + K2 K1 + ◆ 在米氏研究中，方程簡化為： K2 k1 E P E ES S + K1 + 孫利芹 2022 ◆ 三個假說： ※ 不考慮 E+P ES 這個逆反應(yīng)，即忽略 P 0, 意味著方 程只適合酶促反應(yīng)的初速度 V0,([P]5%)。 ※ [S]以 [S0]計(jì)算，要求 [S][E], 否則，由于 ES的存 在， [S] 不能代替 [S0]； ※ 快速平衡假說，即 ES分解生成產(chǎn)物的速度不足以破壞 E 和 ES之間的平衡，所以有 K1[E][S]=K1[ES] ◆ 米氏方程推導(dǎo)的幾個原則： ※ 據(jù)快速平衡假說，有 K1[E][S]=K1[ES]，由此得到 ES的 解離常數(shù) Ks K2 k1 E P E ES S + K1 + 孫利芹 2022 [E0]=[E]+[ES] 是限速反應(yīng)，即 [ES]的濃度 控制了 0[ ] [ ]1[]1[ ] [ ] [][] sESSkKESK s E SE S K??? ? ? ?2KES E P??? ?※ 底物濃度很高時， E都以 ES的形式存在，則初速度達(dá)到最大值，即有 Vmax=K2[E0] 產(chǎn)物形成的速度，即 V0=K2[ES] ※ ※ 據(jù)假設(shè) 2， [S][E], 可用 [S0]代替 [S]，得到 m a x 000[][] sVSVSK?? 孫利芹 2022 ◆ Briggshadane修正的米氏方程 由于快速平衡假說的缺陷，許多酶促反應(yīng)相當(dāng)快，K2遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于 K1， 即 不能忽略 2KES E P??? ?穩(wěn)態(tài)假說的提出 反應(yīng)進(jìn)行一段時間，系統(tǒng)的中間產(chǎn)物由零逐漸增加到一定數(shù)值，在一定時間內(nèi)，盡管底物濃度和產(chǎn)物濃度不斷變化， [ES]不斷生成，但中間產(chǎn)物的生成和分解速度相等，濃度改變很小 []1 1 2[ ] [ ] ( ) [ ] 0ESd K E S K K E Sdt ?? ? ? ?121[ ] [ ][] mKKES KE S K? ??? 孫利芹 2022 ☆ 動力學(xué)參數(shù)的意義 ◆ Km — 當(dāng)酶促反應(yīng)速度達(dá)到最大反應(yīng)速度一半時的底物濃度。 mol/L ※ 酶的特征常數(shù)之一，只與酶的性質(zhì)有關(guān)，與酶的濃度無關(guān)； ※K m 會因外界條件如 pH、溫度及離子強(qiáng)度等因素的影響而不 同，為常數(shù)只是對應(yīng)特定的酶、特定底物、特定的反應(yīng)條 件而言； ※ 對有多個底物的同一種專一性的酶，對每個底物都有一個 特定的 Km值，其中最小的那種底物成為酶的最適作用底物 或天然底物； ※1/ K m可以近似表示酶對底物親合力的大小。 思考題： 有一種蛋白水解酶，作用于數(shù)種人工合成底物，為比較這些底物與酶親和力的差異，應(yīng)該怎樣來說明它？ 孫利芹 2022 ◆ Kcat Kcat為催化常數(shù)，常稱轉(zhuǎn)換數(shù)，代表單位時間內(nèi)每個酶分子將底物轉(zhuǎn)換成產(chǎn)物的微摩爾數(shù)。 當(dāng) ES復(fù)合物解離速度快時， Kcat=K2，此時將 Vmax= Kcat[E0]代入米氏方程，在 [E0][S0] Km的情況下，米氏方程寫作 0 0 0[ ] [ ]c a tmKV E SK?Kcat/Km 為二級速率常數(shù)，可以用來衡量酶對底物的專一性 孫利芹 2022 ☆ 米氏方程圖解表示法 ◆ LineweaverBurk雙倒數(shù)法 1/Km 1/V0 1/Vmax 斜率 =Km/Vmax 1/[S0] 0 m a x 0 m a x1 1 1.[]mKV V S V?? 孫利芹 2022 ◆ Hanewolf作圖法（將倒數(shù)兩邊同乘 [S0]) [S] [S0]/V0 斜率 =1/Vmax Km Km/Vmax 000 m a x m a x[] 1 [] mSK SV V V?? 孫利芹 2022 ◆ EadieHofstee作圖法（將雙倒數(shù)兩邊同乘 Vmax) 00 m a x0[]mVV K VS? ? ?Vmax/Km Vmax V0/S0 V0 斜率 =Km 孫利芹 2022 哈哈， 下 課 了 ! 孫利芹 2022
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1