基因的克隆方法ppt課件-資料下載頁
2025-01-08 00:31本頁面
【正文】 33 （ 1）提取基因組 total RNA （ 2）反轉(zhuǎn)錄合成總 cDNA作模板 （ 4） PCR擴增及序列分析 （ 3）根據(jù)目的基因序列設(shè)計引物 2） 從 mRNA中擴增 : RTPCR 原核生物不易得到 mRNA，也不含有polyA尾。 適合擴增真核生物基因。 34 4 、 基于基因圖譜的基因克隆方法 ?又稱圖位克隆法，是建立在擁有 RFLP等分子標記的連鎖遺傳圖和基因文庫，基因產(chǎn)物未知的一種基因克隆技術(shù)，理論上可以分離任何一個突變基因。 35 染色體 分子標記 A 分子標記 B 目的基因 陽性克隆 轉(zhuǎn)化互補實驗 基因圖位克隆示意圖 36 圖位克隆基因的一般操作過程： ?通過遺傳分析構(gòu)建與目標基因緊密連鎖的分子標記連鎖圖，達到基因的精細定位。 ?用與目標基因緊密連鎖的兩側(cè)分子標記 篩選基因組文庫 ，構(gòu)建包含目標基因的基因組物理圖譜。 目的基因 標記 1 標記 2 標記 3 標記 4 標記 5 37 染色體 分子標記 2 分子標記 3 目的基因 基因組物理圖譜 進一步精細定位 獲得目的基因 38 ?通過染色體步移或染色體登陸技術(shù)對目標基因進行進一步精細定位，得到陽性克隆。 ?對陽性克隆轉(zhuǎn)化隱性受體進行功能互補。 ?基因序列測定及表達分析等。 39 ?影響基因圖位克隆的因素： ?建立的分子標記遺傳圖中標記與基因之間的距離大小。 ?基因組的大小及可能存在的大量的重復序列。 ?基因組文庫的大小及單克隆的大小。 ?成功的例子： ?水稻 Xa21 ?擬南芥的 RPM1， RPS2等。 40 ?圖位克隆基因需滿足的條件： ?較理想的遺傳圖譜和物理圖譜，如SSR、 RFLP圖譜。 ?大片段的基因組文庫（ BAC ， PAC ，TAC等）。 ?遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)。 41 其它的基因克隆法 cDNA捕捉法 RNAi： RNA干涉法 酵母雙雜交法 。 42 思考題 ?請簡單闡述 SH在 mRNA水平上克隆差異表達基因的機理。
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