hplc常見(jiàn)問(wèn)題和對(duì)策-資料下載頁(yè)
2025-01-07 12:04本頁(yè)面
【正文】 腐蝕條件 ,更換柱 ,采用保護(hù)柱 ？ ①樣品體積過(guò)大－－用流動(dòng)相配樣 ,總的樣品體積小于第一峰的15% ②在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展－－進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散 ③數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢－－設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于 10 點(diǎn) ④檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)過(guò)大－－設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的 10% ⑤流動(dòng)相粘度過(guò)高－－增加柱溫 ,采用低粘度流動(dòng)相 ⑥檢測(cè)池體積過(guò)大－－用小體積池 ,卸下熱交換器 ⑦保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)－－等度洗脫時(shí)增加強(qiáng)溶劑含量 ,也可用梯度洗脫 ⑧柱外體積過(guò)大－－將連接管徑和連接管長(zhǎng)度降至最小 ⑨樣品過(guò)載－－進(jìn)小濃度小體積樣品 ，還有哪些因素能引起壓力改變？ 改變流動(dòng)相組成和溫度；改變柱長(zhǎng)、柱內(nèi)徑和填料粒度；柱突然阻塞壓力升高（正常情況下其它條件不變柱壓都是逐漸升高的）。 、弱溶劑？ 改變流動(dòng)相的組成或溶劑溶劑強(qiáng)度就可以改變峰容量因子和保留時(shí)間。在一定條件下，減少保留時(shí)間或縮短分析時(shí)間的溶劑為強(qiáng)溶劑，增加保留時(shí)間或延長(zhǎng)分析時(shí)間的溶劑為弱溶劑。 ？ 在分析多組分樣品時(shí)，僅改變流動(dòng)相的強(qiáng)度（組成百分比）而不改變其組成，一般僅僅改變所有組分的保留時(shí)間，不會(huì)發(fā)生峰位的重排。 下列條件改變可能發(fā)生峰位重排：流動(dòng)相中換了強(qiáng)溶劑； PH 值的改變；柱填料的改變；柱溫的改變；流動(dòng)相的組成改變（如加入離子對(duì)試劑三乙基胺等）。 ，常用的實(shí)驗(yàn)室脫氣方式還有哪些？ 加熱回流脫氣，脫氣效果最佳，但無(wú)法保持；氦脫氣，此方法脫氣效果佳，能除去百分之九十以上的空氣，但氦氣價(jià)格太貴，所以用的不多；真空脫氣，效果僅次于氦脫氣，但脫氣過(guò)程中容易造成樣品溶液揮發(fā)損失；超聲脫氣，只能脫去約百分之三十的空氣，但在實(shí)驗(yàn)室中最常用。目前還是盡量爭(zhēng)取用在線脫氣，方便且效果好。 ？ 評(píng)介一根色譜柱的基本指標(biāo)是：塔板數(shù)、峰不對(duì)稱因子、柱壓降、適用范圍和鍵合相濃度以及峰容量。 ？ 時(shí)間常數(shù)實(shí)際上是響應(yīng)時(shí)間的設(shè)定，起著過(guò)濾噪音的作用。時(shí)間常數(shù)太?。ㄌ欤┛赡茉黾佣淘胍?，時(shí)間常數(shù)太大（太慢）可能出寬峰、拖尾峰。 ？ 所用的流動(dòng)相在檢測(cè)波長(zhǎng)下有吸收，而進(jìn)在此波長(zhǎng)下沒(méi)有吸收或吸收低于流動(dòng)相的溶液，在流動(dòng)相中會(huì)出現(xiàn)洞 穴，通過(guò)柱后出現(xiàn)倒峰。 “胖”峰和平頭峰？怎樣避免？ 用比流動(dòng)相強(qiáng)度大的大體積樣品進(jìn)樣，通常會(huì)損害色譜圖的質(zhì)量，而出現(xiàn)“胖”峰和平頭峰。應(yīng)遵循下列規(guī)則選用溶劑溶解樣品：A 最好用流動(dòng)相溶解樣品進(jìn)樣。 B 用大體積弱溶劑溶解樣品，如反相色譜中用水溶解樣品進(jìn)樣，主要缺點(diǎn)是每次進(jìn)樣后在色譜圖的開頭出現(xiàn)大的負(fù)峰，有時(shí)還波及到樣品峰。 C 需要時(shí)用強(qiáng)溶劑溶解進(jìn)樣。 ？ 在良好的色譜分離中，樣品分子是以單一的保留過(guò)程被保留。如在反相色譜中，溶質(zhì)與柱填料的非極性烷基鏈發(fā)生 疏水性相互作用。但在以硅膠為基質(zhì)的填料中，有些樣品組分能與硅醇基團(tuán)相互作用，脫附的過(guò)程很慢，使峰嚴(yán)重拖尾，這就是次保留過(guò)程。對(duì)付次保留效應(yīng)最有效的方法就是選用封尾更好色譜柱或加入流動(dòng)相改良劑（也叫掃尾劑）。 ？ 因柱溫問(wèn)題很易引起前延峰，有些樣品在常溫下分離可見(jiàn)前延峰，提高溫度后前延峰的現(xiàn)象消失。在離子對(duì)色譜中，前延峰的另一個(gè)原因是用非流動(dòng)相作樣品溶劑。因此在離子對(duì)色譜中要求僅用流動(dòng)相溶解樣品，而且進(jìn)樣量不要太大，否則會(huì)導(dǎo)致前延峰或其它問(wèn)題。在 RPHPLC 中樣品溶液的強(qiáng)度 大于流動(dòng)相引起前延峰。增加流動(dòng)相的強(qiáng)度，減少樣品溶液的強(qiáng)度，在離子對(duì)色譜中增加離子強(qiáng)度，可以克服前延峰的效應(yīng)。此外使用流動(dòng)相溶解樣品是解決的最簡(jiǎn)單實(shí)用的方法。 ？ A 在使用過(guò)程中柱本身退化，逐漸降低柱效。 B 柱外峰寬效應(yīng)。一根很好的專用柱用于另一液相色譜系統(tǒng)引起塔板數(shù)降低，說(shuō)明新系統(tǒng)有很大的柱外峰寬效應(yīng)。 C 化學(xué)效應(yīng)，多數(shù)是流動(dòng)相和固定相相互作用所致，改變流動(dòng)相可使寬峰有所改善。 ？ 柱平衡慢的常見(jiàn)原因是，組分在舊的或新的流動(dòng)相中對(duì)柱吸附強(qiáng)，或 者在新的流動(dòng)相中濃度小甚至為零。 A 流動(dòng)相含有胺改良劑；B 流動(dòng)相含有離子對(duì)試劑；硅膠柱；流動(dòng)相中有四氫呋喃?？煽紤]采用專用柱用于特殊的方法，不用時(shí)將柱折下來(lái)，注滿適當(dāng)?shù)娜軇┗蛄鲃?dòng)相，密封保管，不再作其它的分析。 ？ A 內(nèi)標(biāo)物的結(jié)構(gòu)或理化性質(zhì)應(yīng)與被分析組分相似或相近； B 內(nèi)標(biāo)物的保留值應(yīng)稍大于或小于被分析物的保留，不能相差過(guò)大； C 內(nèi)標(biāo)物的峰要與所有被分析物的峰有良好的分離度（ R 大于 ），不能讓內(nèi)標(biāo)物成了干擾物； D 無(wú)結(jié)構(gòu)相似的內(nèi)標(biāo)物，可用保留相近的內(nèi)標(biāo)物；E 儀器 對(duì)分析物的響應(yīng)與內(nèi)標(biāo)基本一致，出峰面積大小不能相差懸殊。 ？ A 管子的斷面必須垂直，否則，將會(huì)產(chǎn)生死體積而引起色譜峰峰形擴(kuò)展。 B 確保管子內(nèi)表面不被損傷，如果損傷，可能會(huì)發(fā)生管路堵塞。 C 將管子完全插入開口端，直至其與開口端的末端相碰為止。否則，將會(huì)產(chǎn)生死體積而引起色譜峰峰形擴(kuò)展。 D 不要過(guò)分?jǐn)Q緊螺帽，以防損壞螺紋。 33. 什么是 HPLC 的“無(wú)限直徑效應(yīng)”？ 在 HPLC 分析中由于使用了高效微粒固定相及高壓流動(dòng)相，樣品以柱塞式注入色譜柱后，因柱的阻力大，樣品分子在 柱中的分子擴(kuò)散很小，直至它從色譜柱流出也未與色譜柱內(nèi)壁接觸，因而引起的色譜峰形擴(kuò)展很小，能保持高柱效。 ？ A 噪聲：通常噪聲是指由儀器的電氣元件、溫度波動(dòng)、電壓的線性脈沖以及其他非溶質(zhì)作用產(chǎn)生的高頻噪聲和基線的無(wú)規(guī)則波動(dòng)； B 基線飄移：漂移是基線的一種向上或向下的緩慢移動(dòng)，可在較長(zhǎng)時(shí)間（ ~1h）內(nèi)觀察到。它可掩蔽噪聲和小峰。漂移與整個(gè)液相色譜系統(tǒng)有關(guān)，而不僅是由檢測(cè)器引起的； C 靈敏度（最小檢出濃度或最小檢出量）：在一個(gè)特定分離工作中， 檢測(cè)器是否有足 夠的靈敏度是十分重要的。當(dāng)比較檢測(cè)器時(shí)，常使用敏感度這一性能指標(biāo)。敏感度即指信號(hào)與噪聲的比值（信噪比）等于 2 時(shí)，在單位時(shí)間內(nèi)進(jìn)入檢測(cè)器的溶質(zhì)的濃度或質(zhì)量； D 線性范圍：在進(jìn)行定量分析時(shí)，希望檢測(cè)器有寬的線性范圍，以便在一次分析中可同時(shí)對(duì)主要組分和痕量組分同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)； E 檢測(cè)器的池體積：它應(yīng)小于最早流出的死時(shí)間色譜峰的洗脫體積的 1/10，否則會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的柱外譜帶擴(kuò)展。 ？ 設(shè)定泵使用一個(gè)單獨(dú)通路（ A），打開 Purge 閥，流速 5ml/min，提起其他溶 劑瓶?jī)?nèi)的溶劑過(guò)濾頭直至離開液面，觀察這些通路（ B、C、 D）內(nèi)的溶劑是否隨著流動(dòng)，正常時(shí)均不應(yīng)流動(dòng)。 文 章 鏈 接 ： 中 國(guó) 化 工 儀 器 網(wǎng)
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