【正文】 口端，直至其與開(kāi)口端的末端相碰為止。 ？ 因柱溫問(wèn)題很易引起前延峰，有些樣品在常溫下分離可見(jiàn)前延峰，提高溫度后前延峰的現(xiàn)象消失。 ？ 在分析多組分樣品時(shí)，僅改變流動(dòng)相的強(qiáng)度（組成百分比）而不改變其組成，一般僅僅改變所有組分的保留時(shí)間，不會(huì)發(fā)生峰位的重排。通常使用在給定色譜條件下的強(qiáng)溶劑，但并非所有污染物都可以在流動(dòng)相中溶解。例如，硅膠基質(zhì)在 pH4 時(shí)水解穩(wěn)定性最好。） ⑧檢測(cè)器燈能量不足 ⑨色譜柱填料流失或阻塞 ⑩流動(dòng)相混合不均勻或混合器工作不正常 解決方法 ①檢查接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過(guò)程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。（高壓造成流通池窗口破裂，產(chǎn)生噪音基線(xiàn)） ⑤流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化 ⑥柱平衡慢，特別是流動(dòng)相發(fā)生變化時(shí) ⑦流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成 ⑧樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)（高 K’值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線(xiàn)。 為什么會(huì)看到這些峰變形了呢？這很容易從峰展寬的角度來(lái)解釋。 正如柱子不能完全平衡將導(dǎo)致保留時(shí)間的重現(xiàn)性差一樣，柱溫不平衡也會(huì)導(dǎo)致不理想的后果，這個(gè)問(wèn)題在峰寬上的影響尤其明顯。例如，在圖 2 中當(dāng)溫度升至 77℃以上時(shí)，峰 3 和峰 4 將會(huì)合并。當(dāng)色譜柱正對(duì)著空調(diào)的送風(fēng)口時(shí)，雖然整個(gè)實(shí)驗(yàn)室的溫度非常穩(wěn)定，但色譜系統(tǒng)的溫度就會(huì)不斷的變化。 使用此類(lèi)材料的管路需要注意的是： PEEK 對(duì)鹵代烷烴和四氫呋喃的兼容性不好。 3 樣品的特性 有些樣品由于其化學(xué)結(jié) 構(gòu)的特點(diǎn)，存在互變異構(gòu)現(xiàn)象，而這種互變異構(gòu)體無(wú)法分開(kāi)，而是以一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡存在。但是，在對(duì)樣品了解程度不夠，方法不妥，樣品處理方法及進(jìn)樣方式不合理下，會(huì)出現(xiàn)各種意想不到的問(wèn)題，而對(duì)色譜峰難以作出合理的解釋?zhuān)绕鋵?duì)于新手更是如此。解決辦法為檢查記錄儀與檢測(cè)器，重作校正曲線(xiàn)。 ③ 流動(dòng)相不合適，解決辦法為改換流動(dòng)相或使流動(dòng)相在控制室內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)混合 ？ ① 篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖 洗柱子，替換篩板或更換柱子。 ⑨ 流動(dòng)相流量不合適。若柱壓還高，請(qǐng)與廠(chǎng)商聯(lián)系。這是樣品的溶劑與流動(dòng)相極性相差太大，而流動(dòng)相來(lái)不及將其稀釋達(dá)到平衡造成的。色譜柱大約需要（以 1mL/min 的流速）沖一個(gè)小時(shí)或更多的時(shí)間被徹底浸潤(rùn)，恢復(fù)到正常狀態(tài)。 擁有溫控系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室一般都有全天候溫控設(shè)置，但這種設(shè)置可能引起室溫顯著變化，這對(duì)整夜 運(yùn)行的色譜系統(tǒng)就會(huì)有一些影響，例如我們實(shí)驗(yàn)室的夜間溫度就設(shè)為 47℃。峰 4 和 5 的相對(duì)位置沒(méi)有十分明顯的變化，但是，當(dāng)溫度升高時(shí)，峰 3 會(huì)移近峰4。當(dāng)一次梯度洗脫分離完成后，一定要用 1015 倍柱體積的流動(dòng)相來(lái)沖洗柱子以恢復(fù)柱子的平衡。在 77℃時(shí)后一個(gè)峰變形很大以至于會(huì)認(rèn)為它是兩個(gè)成份或者認(rèn)為柱子有了死體積。） ②流動(dòng)相不均勻。使用離子對(duì)試劑、緩沖鹽更應(yīng)注意平衡柱。 采用精密級(jí)穩(wěn)壓電源。溶于流動(dòng)相中的少量污染物可能慢慢富集到色譜柱上，從而造成保留時(shí)間的漂移?？梢酝ㄟ^(guò)使用固相提?。?SPE）等樣品前處理方法來(lái)去除樣品基質(zhì) 的影響。檢查柱的方向 ④流動(dòng)相組成變化－－防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀 ⑤溫度增加－－柱恒溫 （三） 保留時(shí)間延長(zhǎng) ①流速下降－－管路泄漏 ,更換泵密封圈 ,排除泵內(nèi)氣泡 ②硅膠柱上活性點(diǎn)變化－－用流動(dòng)相改性劑 ,如加三乙胺 ,或采用堿至鈍化柱 ③鍵合相流失－－ 同前（二） 3 ④流動(dòng)相組成變化－－同前（二） 4 ⑤溫度降低－－同前（二） 5 ？ ①樣品體積過(guò)大－－用流動(dòng)相配樣 ,總的樣品體積小于第一峰的15% ②樣品溶劑過(guò)強(qiáng)－－采用較弱的樣品溶劑 ③柱塌陷或形成短路通道－－更 換色譜柱 ,采用較弱腐蝕性條件 ④柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效－－更換燒結(jié)不銹鋼 ,加在線(xiàn)過(guò)濾器 ,過(guò)濾樣品 ⑤進(jìn)樣器損壞－－更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子 ？ ①進(jìn)樣閥殘余峰－－每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥 ,改進(jìn)閥和樣品的清洗 ②樣品中未知物－－處理樣品 ③柱未平衡－－重新平衡柱 ,用流動(dòng)相作樣品溶劑（尤其是離子對(duì)色譜） ④三氟乙酸（ TFA）氧化－－每天新配 ,用抗氧化劑 ⑤水污染（反相）－－通過(guò)變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量，用 HPLC級(jí)的水 ？ ①柱超載－－降低樣品量 ,增加柱直徑采用較高容量的固定相 ②峰干擾－－清潔樣品 ,調(diào)整流動(dòng)相 ③硅羥基作用－－加三乙胺 ,用堿致鈍化柱 ,增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相 PH 值 ,純化樣品 ④柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效－－更換燒結(jié)不銹鋼 ,加在線(xiàn)過(guò)濾器 ,過(guò)濾樣品 ⑤柱塌陷或形成短路通道－－更換色譜柱 ,采用較弱腐蝕性條件 ⑥死體積或柱外體積過(guò)大－－連接點(diǎn)降至最低 ,對(duì)所有連接點(diǎn)作合適調(diào)整 ,盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管 ⑦柱效下降－－用較低腐蝕條件 ,更換柱 ,采用保護(hù)柱 ？ ①樣品體積過(guò)大－－用流動(dòng)相配樣 ,總的樣品體積小于第一峰的15% ②在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展－－進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散 ③數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢－－設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于 10 點(diǎn) ④檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)過(guò)大－－設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的 10% ⑤流動(dòng)相粘度過(guò)高－－增加柱溫 ,采用低粘度流動(dòng)相 ⑥檢測(cè)池體積過(guò)大－－用小體積池 ,卸下熱交換器 ⑦保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)－－等度洗脫時(shí)增加強(qiáng)溶劑含量 ,也可用梯度洗脫 ⑧柱外體積過(guò)大－－將連接管徑和連接管長(zhǎng)度降至最小 ⑨樣品過(guò)載－－進(jìn)小濃度小體積樣品 ，還有哪些因素能引起壓力改變？ 改變流動(dòng)相組成和溫度；改變柱長(zhǎng)、柱內(nèi)徑和填料粒度；柱突然阻塞壓力升高（正常情況下其它條件不變柱壓都是逐漸升高的）。如在反相色譜中，溶質(zhì)與柱填料的非極性烷基鏈發(fā)生 疏水性相互作用。 ？ A 內(nèi)標(biāo)物的結(jié)構(gòu)或理化性質(zhì)應(yīng)與被分析組分相似或相近； B 內(nèi)標(biāo)物的保留值應(yīng)稍大于或小于被分析物的保留，不能相差過(guò)大； C 內(nèi)標(biāo)物的峰要與所有被分析物的峰有良好的分離度（ R 大于 ），不能讓內(nèi)標(biāo)物成了干擾物； D 無(wú)結(jié)構(gòu)相似的內(nèi)標(biāo)物，可用保留相近的內(nèi)標(biāo)物；E 儀器 對(duì)分析物的響應(yīng)與內(nèi)標(biāo)基本一致，出峰面積大小不能相差懸殊。當(dāng)比較檢測(cè)器時(shí)，常使用敏感度這一性能指標(biāo)。 B 柱外峰寬