實(shí)驗(yàn)七sds-page測(cè)定蛋白質(zhì)的分-資料下載頁
2025-05-15 01:45本頁面
【正文】 ml） 濃縮膠緩沖液（ ml） 10％ APS（ μl） 40 TEMED(μl) 12 ，將玻板固定在電泳槽上，加入電極緩沖液，上槽緩沖液液面要高過點(diǎn)樣孔，下槽要沒過電極。 （ Marker和待測(cè)蛋白樣，加入等體積的2?樣品緩沖液 ） ※ 加樣前，樣品在沸水中加熱 3分鐘，以除掉亞穩(wěn)態(tài)聚合。 ，電壓 100V，溴酚藍(lán)進(jìn)入分離膠后改為 150V，距凝膠底邊約 ，停止電泳。 電泳結(jié)束后撬開玻板，將凝膠放在大平皿內(nèi)，加入染色液，染色 1215min。 ※ 剝膠時(shí)要小心 ,保持膠完好無損 。 ：染色后的凝膠用蒸餾水漂洗，再用脫色液脫色 ,每脫色 15min后換一次脫色液，脫色 3次。 五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線： log Mr = K bmR 蛋白質(zhì)區(qū)帶中心至分離膠上沿距離 相對(duì)遷移率 = 溴酚藍(lán)至分離膠上沿距離 以每個(gè)蛋白標(biāo)準(zhǔn)的分子量對(duì)數(shù)作縱坐標(biāo)，相對(duì)遷移率作橫坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后在計(jì)算出待測(cè)蛋白的遷移率即可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其分子量。 六、思考題 ? 在 SDSPAGE中 ， 當(dāng)分離膠加完后 ， 在其上加一層正丁醇的目的是什么 ? ? 在 SDSPAGE中分離膠與濃縮膠中均含有TEMED和 APS, 試述其作用 ? ? 解釋濃縮效應(yīng)和分子篩效應(yīng) 。
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