熒光定量pcr的原理及其應(yīng)用-資料下載頁(yè)
2025-05-12 14:14本頁(yè)面
【正文】 因沉默是胃腫瘤發(fā)生的一個(gè)重要機(jī)制 ? 甲基化一般發(fā)生在基因的啟動(dòng)子區(qū) CpG中的 C核苷酸 ? SOCS1 (suppressor of cytokine signaling1)高甲基化與胃腫瘤的發(fā)生具有密切聯(lián)系 熒光定量 PCR 應(yīng)用 研究方法 胃癌患者血清 DNA提取 （蛋白酶 K、 SDS、酚 /氯仿、乙醇） 亞硫酸氫鈉處理 DNA template SYBR supermix Primers 定量 PCR 體系 ? 以 In vitro methylated DNA(IVD)為陽(yáng)性對(duì)照（標(biāo)準(zhǔn)品） ? 以非甲基化的胃癌細(xì)胞系 KATO III為陰性對(duì)照 ? 以 6個(gè)年齡、性別匹配的正常人血清做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 ? 修飾非甲基化 CpG為 UpG ? 甲基化位點(diǎn)不修飾 針對(duì)未經(jīng)修飾改變的啟動(dòng)子序列 熒光定量 PCR 應(yīng)用 研究方法 亞硫酸氫鈉處理的血清 DNA 94176。 C 6min 94176。 C 10sec 64176。 C 25sec 72176。 C 25sec 77176。 C 10sec Melting curve analysis 40cycles 定量 PCR (SYBR) 結(jié)果統(tǒng)計(jì)、臨床意義分析 熒光定量 PCR 應(yīng)用 研究結(jié)果 Melt curve of real time MSP analysis of SOCS1 gene The standard curve of (in vitro methylated DNA, IVD) determined at 77176。 C 熒光定量 PCR 應(yīng)用 研究結(jié)果 a In vitro methylated DNA b Results from duplicate experiment c Amount of methylated SOCS1 as determined by Ct value 熒光定量 PCR 應(yīng)用 ? 癌癥患者血清中 SOCS1高度甲基化 ? 此方法診斷具有非侵入人體優(yōu)點(diǎn) ? SOCS1可作為胃癌早期診斷的指標(biāo)之一 ? 基因表達(dá)水平研究 – 基因的絕對(duì)表達(dá)量（微生物檢測(cè)、環(huán)境監(jiān)測(cè)） – 標(biāo)本間基因的差異表達(dá)（病理相關(guān)、芯片驗(yàn)證） ? 基因型研究 – 基因單堿基變化（ SNP、 mutant） – 基因的堿基修飾（甲基化等） 熒光定量 PCR 應(yīng)用 More… We need to decide what to start? ? 決定實(shí)驗(yàn)方案（絕對(duì)定量？相對(duì)定量？） ?實(shí)驗(yàn)?zāi)康? ? 決定選用實(shí)驗(yàn)方法 (SYBR green？ TaqMan?) ? 檢測(cè)基因數(shù)、樣本數(shù) ?成本核算 We need Kits? ? 定量 PCR試劑 ? SYBR Green I Mix ? TaqMan Mix ? 配套耗材 ? Tubes ? Strips ? Plate Thank You Email:
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