【導讀】師的指導下進行的研究工作及取得的成果。盡我所知，除文中特別加。而使用過的材料。均已在文中作了明確的說明并表示了謝意。除了文中特別加以標注引用的內容外，本論文。不包含任何其他個人或集體已經發(fā)表或撰寫的成果作品。究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。全意識到本聲明的法律后果由本人承擔。同意學校保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權大學可以將本學位。印或掃描等復制手段保存和匯編本學位論文。涉密論文按學校規(guī)定處理。程序清單等），文科類論文正文字數不少于萬字。有圖紙應符合國家技術標準規(guī)范。當發(fā)生這些變更時，生產商通常需要評價產品的相關質量指標，以證明變。更沒有對藥品的安全和有效性產生不利的影響。由于變更而導致終產品質量的改變。及到的變更進行風險評估，對變更的潛在影響進行分析。

　　

【正文】 和國藥典二部》重組人生長激素各論中規(guī)定生物活性：照生長激素生物測定法（附錄 XII P）依法檢查，每 1mg 蛋白中含生長激素不得少于 單位（每年至少測定一次）。 兩個車間各取 1~3 批同時進行重組人生長激素體內生物學活性的檢驗，兩個車間原液的生物活性應符合《中華人民共和國藥典》重組人生長激素各論中的規(guī)定，兩者的活性平均值和標準偏差應沒有顯著差異，以此證明廠房的變更未改變其體內生物學活性。 免疫化學性質 免疫化學性質的檢測可以采用免疫斑點法或 western blot 方法，兩種方法均針對重組人生長激素的抗原特性進行檢測。 免疫化學性質的研究，可以證明兩個車間生產的原液抗原特異性一致性，它的一致性可以進一步說明兩者結 構的一致。 16 強制降解試驗和長期穩(wěn)定性 新車間生產的原液可以通過高溫和光照強制破壞試驗，檢測相關蛋白、高分子蛋白質、電荷異構體、含量，比較兩者之間降解物和降解速率。在工藝不變的情況下降解產物類型和降解速率應該沒有顯著變化，新車間原液和老車間強制降解比較應不得產生新的降解產物。 重組人生長激素原液為冷凍保存，因此無需進行加速穩(wěn)定性考察，僅進行長期穩(wěn)定性考察。將新車間和老車間的長期穩(wěn)定性歷史數據進行統(tǒng)計分析和比較，降解速率和雜質類別上應沒有明顯的差異。 重組人生長激素原液長期穩(wěn)定性考察方法如下：擬考察點為 0、 1 12 36 個月。原液包裝形式和老車間一致，貯存溫度 2~8℃ 。按照《中國藥典》 2020年版附錄 XIX C“原料藥與藥物制劑穩(wěn)定性試驗指導原則”，本品為注射劑，指導原則規(guī)定的重點考察項目為：外觀色澤、含量、 pH 值、可見異物、有關物質。因此 重點考察項目為： 性狀、含量、 pH 值、可見異物、有關物質（相關蛋白、高分子蛋白）、水分 指標。 在 0、 24 和 36 個月進行全項檢測。 半成品的研究方法和質量標準 重組人生長激素原液和輔料按照處方比例進行混合后除菌過濾得到半成品。半成品的放行標準包括：內毒素、無菌、蛋白含 量。新車間半成品應符合放行標準，和歷史數據比較沒有顯著差異。半成品除放行標準的檢測還應增加穩(wěn)定性考察，在室溫下，考察 0、 16 和 24 小時半成品相關蛋白、高分子蛋白和含量，新車間半成品在考察期內應符合成品的放行標準，比較兩個車間上述指標平均值和相對標準偏差，兩個車間應無顯著差異。 成品的研究方法和質量標準 注射用重組人生長激素已經被錄入《中華人民共和國藥典》，因此其放行標準是不低于《中華人民共和國藥典》 2020 年版的各論的要求，放行檢測涵蓋了注射用重組人生長激素理化性質、純度和雜質、生物學活性等產品關鍵質量屬性。可以作為評價兩個車間產品質量的比較標準。 17 新車間注射用重組人生長激素的研究，不僅要求符合放行標準，還應進行生物活性和穩(wěn)定性考察。新車間至少 3 個連續(xù)批和老車間進行比較，比較方法如下： ? 半成品和成品放行檢測中的定量項目應采用統(tǒng)計分析的方法和老車間的歷史數據比較，比較平均值，相對標準偏差。 ? 兩個車間同期生產的產品均應符合質量標準。 ? 對兩個車間同期生產的產品雜質進行分析，應沒有新增雜質的出現。 ? 兩個車間的產品同時進行高溫和光照的強制降解試驗，比較兩個車間產品在高溫和光照情況下降解速率是否有不同，雜質類型是否有差異。 ? 新車間連續(xù) 3 批產品進行加速穩(wěn)定性考察，采用市售小包裝貯存，溫度 25℃177。 2℃ ，濕度 60%177。 5%。 參照《中國藥典》 2020 年版附錄 XIX C《 原料藥與藥物制劑穩(wěn)定性試驗指導原則 》以及《化學藥物穩(wěn)定性研究技術指導原則》設置考察時間點 ， 考察點為 0、 和 6 個月。 重點考察項目為：性狀、含量、 pH 值、可見異物和有關物質（相關蛋白和高分子蛋白）。 0 和 6 個月進行全項檢測。新車間 和老車間產品的 歷史數據進行比較，兩者在降解速率和雜質類別上應沒有明顯的差異。 ? 新車間每個規(guī)格至少 3 批進行長期穩(wěn)定性考察， 采用市售小包裝貯存，貯存溫度 5℃ 177。3 ℃。 按照《中國藥典》 2020 年版附錄 XIX C《原料藥與藥物制劑穩(wěn)定性試驗指導原則》以及《化學藥物穩(wěn)定性研究技術指導原則》設置考察時間點。 時間點在第一年一般為每 3 個月末一次，第二年每 6 個月末一次，以后每年末一次。即第 0、 1 1 2 36 個月末取樣檢測考察指標。重點考察項目為： 性狀、含量、 pH 值、可見異物和有關物質（相關蛋白和高分子蛋白）。 0、 24 和 36 個月分別進行全項檢測。 和老車間同規(guī)格產品進行比較，兩者在穩(wěn)定性上應沒有明顯差異。 表 7 注射用重組人生長激素放行標準檢測方法 檢測項目 分析方法 外觀 目檢 鑒別 方法（ 1） 《中華人民共和國藥典》二部重組人生長激素項下的鑒別（ 1）項方法（反相色譜法） 方法（ 2） 《中華人民共和國藥典》二部重組人生長激素項下的鑒 18 別（ 4）項方法（等電聚焦電泳 IEF） 檢查 水分 費休氏法容量滴定法 相關蛋白 《中華人民共和國藥典》二部注射用重組人生長激素項下的相關蛋白檢測方法（反相色譜法） 高分子蛋白 《中華人民共和國藥典》二部注射用重組人生長激素項下的高分子蛋白檢測方法（分子排阻色潽法） 電荷異構體 等電聚焦電泳 異常毒性 《中華人民共和國藥典》二部附錄 XI C 細菌內毒素 《中華人民共和國藥典》二部附錄 XI E 裝量差異 《中華人民共和國藥典》二部附錄 I B 注射劑 無菌 《中華人民共和國藥典》二部附錄 XI H 薄膜過濾法 酸堿度 《中華人民共和國藥典》二部附錄 VI H 溶液的澄清度與顏色 《中華人民共和國藥典》二部附錄 IX A 第一法和附錄 IX B 可見異物 《中華人民共和國藥典》二部附錄 IX H 燈檢法 不溶性微粒 《中華人民共和國藥典》二部附錄 IX C 第一法 含量 《中華人民共和國藥典》二部注射用重組人生長激素項下方法 生物學活性 《中華人民共和國藥典》二部重組人生長激素項下方法 第 4章 初步風險評估 輸入物料的變更分析和風險評估 根據 圖 2 的工藝流程圖，首先對注射用重組人生長激素工藝中的輸入物料分別進行分析，找出由于廠房變更而引起變化的輸入物料，然后針對這些輸入物料進行變更的風險識別和評估。 表 8 將注射用重組人生長激素的全部輸入物料列出，并對可能引起變化的物料進行了識別。 19 表 8 輸入物料的變更分析 物料名稱 是否變更 風險分析 細胞庫（ MCB 和WCB） 否 生物制品的起始物料，是關鍵物料，由于在原址增建車間，因此種子批采用和原車間相同的種子批，需規(guī)定采用相同的轉運方式。 發(fā)酵培養(yǎng)基 否 半合成培養(yǎng)基，是關鍵物料，來源和質量標準和原車間一致。儲存和稱量的地址均未變化。 各種鹽 否 初純和精純使用了各種鹽，如作為緩沖劑的磷酸鹽等，這些化學物料的來源、質量標準未發(fā)生變化，檢測、儲存和稱量地址均無變化。 層析介質 否 層析介質是關鍵物料，來源和種類對分離影響很大，因此是不能變更的。采用和原車間一致的采購、質控、存儲。 過濾膜 否 過濾膜的來源、材質非常重要，不能變更。采用和原車間一致的采購、質控、存儲。 工藝空氣 是 工藝空氣和產品接觸的單元操作主要是發(fā)酵和除菌過濾。發(fā)酵需要通氣保持溶氧。過濾是通過氣壓使半成品濾過除菌過濾膜。 工藝空氣系統(tǒng)進行了改造，涉及到變更，風險較高需要進行全面驗證。 純化水 是 發(fā)酵和初純采用純化水，因為大腸桿菌的發(fā)酵相對對水的要求沒有細胞培養(yǎng)高，同時大腸桿菌本身產生大量的內毒素，因此在工藝的上游采用純化水。 注射用水 是 注射用水用于精純、半成品配制、器具的最后清洗等過程。對于原液生產 水是控制內毒素的關鍵因素，制劑的配料等均采用注射用水， 因此注射用水十分重要。新建車間水系統(tǒng)進行了改造，涉及到變更，風險較高，需要進行全面驗證。 20 輔料 否 輔料是關鍵物料，采用和原車間一致的采購、質控、存儲，沒有變更。 包裝材料 否 內包裝材料和產品接觸，其來源、材質等均是關鍵屬性，新車間采用和原車間一樣的采購、質控、存儲，沒有變更。 氮氣 否 在凍干完成后進行充氮氣，使瓶內保持少許負壓。氮氣的來源和質量標準沒有變化。 重組人生長激素原液 否 這些均是工藝過程中得到的工藝產出物，雖然工藝是在新車間實施的，但其物料質量標準、儲存條件沒有發(fā)生變更。 半成品 否 中間品 1~6 否 輸入物料的變更分析可以看出，新增車間由于需要新的制水和工藝空氣系統(tǒng)，因此水和工藝空氣可能發(fā)生了變更。制水和工藝空氣系統(tǒng)需要在廠房完成后進行全面的驗證，以保證符合預定的要求，并和原車間的控制水平一致。 表 9 對水和工藝空氣的關鍵質量屬性進行了風險評估，以便于判斷變更對產品質量是否產生顯著的影響。 表 9 變更物料的風險評估 物料名稱 工藝參數 發(fā)生頻率O* 嚴重程度S* 不可檢測度 D* RPN=O*S*D 工藝空氣 空氣壓縮機壓力 2 4 2 16 儲罐壓力等 2 4 2 16 P 級過濾器參數 2 6 4 48 干燥參數 2 6 2 24 Q 級過濾器參數 2 6 2 24 S 級過濾器參數 2 8 2 32 純化水 原水來源 2 6 2 24 制水工藝 2 8 2 32 清洗工藝 2 8 2 40 滅菌工藝 2 8 2 40 管路和分配系統(tǒng) 2 8 2 40 21 取樣點分布 2 8 2 40 注射用水 制水工藝 2 8 2 32 循環(huán)保溫 2 8 2 32 管路和分配系統(tǒng) 2 8 2 40 取樣點分布 2 8 2 40 *發(fā)生的頻率 O：指發(fā)生的頻率，分 110 級，從幾乎不可能發(fā)生失效到發(fā)生失效幾乎無法避免；嚴重程度 S：指對關鍵質量屬性的影響后果的嚴重程度評價指標，一般分 110 級，從無失效后果到無警告的嚴重危害后果；不可檢測度 D：指不可探測的程度，分 110 級，從幾乎肯定到幾乎不可能檢測。 從風險評估的結果看，雖然制水和工藝空氣系統(tǒng)發(fā)生了變更，但由于其關鍵質量屬性均是可測的，根據老車間的日常監(jiān)控，在符合設計要求的情況下，工藝空氣和水的質量發(fā)生不符合要求的頻率也很低，因此 RPN 值不高，說明水和工藝空氣的變更風險較小，可以通過對制水和工藝空氣系統(tǒng)的驗證，以及日常監(jiān)控 降低風險。 工藝的變更分析和風險評估 根據 圖 2 的工藝流程圖對每個單元操作進行分析，找出發(fā)生變更的單元操作，然后針對變更的單元操作進行風險識別和評估。 表 10 對每個單元操作進行了風險分析，并分析其是否發(fā)生了變更。 表 10 注射用重組人生長激素工藝單元操作的變更分析 操作單元 是否發(fā)生變更 風險分析 發(fā)酵 培養(yǎng) 是 新車間采用新發(fā)酵系統(tǒng)，發(fā)酵體積放大了一倍，因此本操作單元風險較高，需要進行風險的識別和評估。 捕獲菌體 否 采用和老車間一樣的設備和操作條件，通過增加設備進行放大，單元操作沒有變更。 初純 否 采用和老車間一樣的操作條件和工藝設備，單元操作沒有變更。 精純 否 采用和老車間一樣的操作條件和工藝設備，單元操作沒有變更。 22 配制 否 藥品的配方對產品的質量產生重大的影響，同時配方為注冊標準，因此為關鍵工藝參數，變更需重新申報。 同比放大體積，配制方法和儲存條件沒有變更。 除菌過濾 是 變更為兩級過濾，增加一個除菌過濾膜。 灌裝 是 批量增大使灌裝時間延長。 凍干 否 采用和原車間一樣的操作條件，單元操作沒有變更。 釓蓋 否 采用和原 車間一樣的操作條件，單元操作沒有變更。 包裝 否 采用和原 車間一樣的操作條件，單元操作沒有變更。 從 表 10 的分析可以看出，新建車間的變更主要發(fā)生在發(fā)酵培養(yǎng)、除菌過濾和灌裝 3 個單元操作中。 表 11 針對這三個單元操作的工藝參數進行了風險評估。 表 11 注射用重組人生長激素工藝的風險評估 單元操作 工藝參數 發(fā)生頻率 * 嚴重程度 * 不可檢測度 * RPN 發(fā)酵培養(yǎng) 溫度 2 8 2 32 通氣量 2 6 2 24 轉速 2 6 2 24 補料速度 2 6 4 48 pH 控制 2 6 2 24 培養(yǎng)時間 2 6 2 24 除菌過濾 過濾體積 /過濾膜面積 2 6 2 24 過濾壓力 2 8 2 32 完整性測試 2 10 2 40 半成品保存時間 4 8 2 64 半成品保存溫度 2 10 2 40 灌裝 溫度 2 8 2 32 23 灌裝體積 2 8 2 32 灌裝速度 2 4 2 16 單元操作時間 2 6 2 24 *同 表 9 的說明 根據 表 11 的風險評估可以看出，雖然發(fā)酵培養(yǎng)、除菌過濾和灌裝的操作單元發(fā)生了變更，通過對其工藝參數的分析可以看出，由于單元操作的關鍵工藝參數均可測定，并易于控制，發(fā)生不符