20xx年醫(yī)學專題—神經(jīng)細胞體外培養(yǎng)方法及應用(編輯修改稿)
2024-11-15 13:23 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 yǎng)的生長基質(zhì),膠 元 多聚賴氨酸 LN,第十四頁，共三十頁。,神經(jīng)細胞(sh233。n jīnɡ x236。 bāo)培養(yǎng)操作程序表,脊髓后根節(jié) 大腦皮質(zhì) 孕18~20天大鼠胚胎(pēitāi) 新生1~3天大鼠 在CMFHanks液中取出組織除去腦膜 ? 與CMFHanks 液一起移至離心管 ? 舍棄CMFHanks液，再加入5ml 0.25%胰蛋白酶和5滴0.2%Dnase液 ?,第十五頁，共三十頁。,370C，30min ? 舍棄胰蛋白酶，加入5ml培養(yǎng)液和10滴Dnase液 ? 用巴斯德吸管吹打20次，再用套有微量加樣器頭的加樣器吹打20次 ? 若有組織殘渣，將上清移至新試管(sh236。guǎn)再加3ml培養(yǎng)液反復吹打 ? 將細胞懸液收集于離心管，離心1200r/min ，8min，舍去上清，向沉淀加培養(yǎng)液，離心1200r/min，8min ?,第十六頁，共三十頁。,加入培養(yǎng)液調(diào)整懸液中的細胞濃度，神經(jīng)節(jié)細胞為1107 ? 種入涂有polyDlysine的蓋片上，每片50μl ? 放入CO2孵箱中過夜 ? 次日(c236。 r236。)加3ml培養(yǎng)液 ? 2天后（培養(yǎng)的第三天）換入有DNA合成陰斷劑的培養(yǎng)液,第十七頁，共三十頁。,神經(jīng)元的分離培養(yǎng)(p233。iyǎng)過程,大鼠大腦皮層神經(jīng)組織細胞培養(yǎng) 組織來源 新生大鼠12日齡，碘 酒 ，灑精消毒。 斷頭，取出大腦，分離腦 膜 ，夾取兩側(cè)大腦皮質(zhì)(d224。 nǎo p237。 zh236。)放入接種培養(yǎng)液中，用DHank’s沖洗二遍。 剪碎，0.51mm3,用DHank’s充分洗去殘血 加入510倍量0.25%胰蛋白酶，移入離心管中放到水370C浴箱中消化2025分鐘。 終止消化離心洗滌 2000轉(zhuǎn)/分 ，5分鐘棄上清。吹打制成細胞懸液。 臺盼蘭染色計數(shù)后接種于事先涂好鼠尾膠的24孔板中。 370C
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