20xx年醫(yī)學(xué)專題—第十六篇細(xì)胞因子及細(xì)胞粘附因子的測(cè)定(編輯修改稿)
2024-11-13 20:31 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 75～100％。根據(jù)病變程度找出CPEI50的標(biāo)本稀釋范圍，并以此計(jì)算出距離比例和確定IFN效價(jià)。 該法操作復(fù)雜、影響因素較多，在試驗(yàn)前應(yīng)對(duì)所用(suǒ y242。nɡ)的病毒進(jìn)行滴定。,細(xì)胞(x236。bāo)病變抑制法結(jié)果判斷舉例*,*結(jié)果(jiē guǒ)：CPEI50稀釋度介于4647之間，距離比例為(7350)/(7327) =0.50，效價(jià)為46.5；同法計(jì)算IFN標(biāo)準(zhǔn)品的CPEI50稀釋度，將IFN效價(jià)換算成國際單位，IFN國際單位=樣品CPEL50的稀釋度/標(biāo)準(zhǔn)品CPEI50稀釋度標(biāo)準(zhǔn)品的單位。,第十七頁，共三十八頁。,趨化性(chemotaxis)： 誘導(dǎo)細(xì)胞向由趨化因子低濃度出向趨化因子高濃度處作定向移動(dòng)的特性,可采用瓊脂糖和微孔小室趨化試驗(yàn)。 化學(xué)增活性(chemokinesis)： 細(xì)胞因子增強(qiáng)細(xì)胞的隨機(jī)運(yùn)動(dòng)(y249。nd242。ng)能力的特性,可采用瓊脂糖小滴化學(xué)動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)檢測(cè)。,趨化因子誘導(dǎo)(y242。udǎo)細(xì)胞移動(dòng)的方式,四、趨化活性測(cè)定法,第十八頁，共三十八頁。,敏感性較高 特異性不高 操作(cāozu242。)繁瑣 易受干擾,五、生物學(xué)活性測(cè)定方法學(xué)評(píng)價(jià)(p237。ngji224。),第十九頁，共三十八頁。,第二節(jié) 免疫學(xué)測(cè)定法,細(xì)胞因子(或受體)與相應(yīng)的特異性抗體( 單克隆抗體或多克隆抗體)結(jié)合，通過同位素、熒光或酶等標(biāo)記技術(shù)加以(jiāyǐ)放大和顯示， 從而定性或定量顯示細(xì)胞因子(或受體)的水平。,第二十頁，共三十八頁。,根據(jù)抗體性質(zhì)和特異性不同，夾心(jiāxīn)法ELISA可分為： 1. PcAb與McAb夾心法 2. McAb與PcAb夾心法 3. 雙McAb夾心法 4. 細(xì)胞、McAb夾心法,一、ELISA方法(fāngfǎ),ELISA法是應(yīng)用最為廣泛的非均相酶標(biāo)免疫分析技術(shù)，一步或多步的抗原抗體反應(yīng)和一步酶促反應(yīng)構(gòu)成ELISA的基本步驟，可作定性或定量分析(d236。ngli224。ngfēnxī)。ELISA法不僅可以用于細(xì)胞因子檢測(cè)，也可用于可溶性細(xì)胞因子受體或可溶性粘附因子的測(cè)定,第二十一頁，共三十八頁。,敏感性偏低 不能判斷(p224。ndu224。n)細(xì)胞因子的生物學(xué)活性。,ELISA,特異、簡便 易于推廣和標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn) 可同時(shí)檢測(cè)大量標(biāo)本(biāoběn)且試驗(yàn)廢棄物便于處理 細(xì)胞因子測(cè)定的首選方法,優(yōu)點(diǎn)(yōudiǎn),缺點(diǎn),第二十二頁，共三十八頁。,二、流式細(xì)胞分析法,流式細(xì)胞分析法，是基于熒光抗體(k224。ngtǐ)染色技術(shù)并借助流式細(xì)胞儀敏感的分辨力所建立的方法。該法主要用于細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子和細(xì)胞表面粘附分子的檢測(cè)，通過特異性的熒光抗體(k224。ngtǐ)染色，能簡單、快速地進(jìn)行單個(gè)細(xì)胞水平的細(xì)胞因子或粘附因子的檢測(cè)，精確判斷不同細(xì)胞亞群細(xì)胞因子和膜分子的表達(dá)情況。,1．分離和培養(yǎng)待檢細(xì)胞 2．細(xì)胞固定(g249。d236。ng) 3．封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn) 4．染色與分析,基本(jīběn)步驟,第二十三頁，共三十八頁。,使用(shǐy242。ng)流式細(xì)胞分析法，可以：,區(qū)分不同分泌特性的細(xì)胞亞群： Th1細(xì)胞 IFNγ Th2細(xì)胞
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