20xx年醫(yī)學專題—第十六篇細胞因子及細胞粘附因子的測定(編輯修改稿)
2024-11-13 20:31 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 75～100％。根據(jù)病變程度找出CPEI50的標本稀釋范圍，并以此計算出距離比例和確定IFN效價。 該法操作復雜、影響因素較多，在試驗前應對所用(suǒ y242。nɡ)的病毒進行滴定。,細胞(x236。bāo)病變抑制法結(jié)果判斷舉例*,*結(jié)果(jiē guǒ)：CPEI50稀釋度介于4647之間，距離比例為(7350)/(7327) =0.50，效價為46.5；同法計算IFN標準品的CPEI50稀釋度，將IFN效價換算成國際單位，IFN國際單位=樣品CPEL50的稀釋度/標準品CPEI50稀釋度標準品的單位。,第十七頁，共三十八頁。,趨化性(chemotaxis)： 誘導細胞向由趨化因子低濃度出向趨化因子高濃度處作定向移動的特性,可采用瓊脂糖和微孔小室趨化試驗。 化學增活性(chemokinesis)： 細胞因子增強細胞的隨機運動(y249。nd242。ng)能力的特性,可采用瓊脂糖小滴化學動力學試驗檢測。,趨化因子誘導(y242。udǎo)細胞移動的方式,四、趨化活性測定法,第十八頁，共三十八頁。,敏感性較高 特異性不高 操作(cāozu242。)繁瑣 易受干擾,五、生物學活性測定方法學評價(p237。ngji224。),第十九頁，共三十八頁。,第二節(jié) 免疫學測定法,細胞因子(或受體)與相應的特異性抗體( 單克隆抗體或多克隆抗體)結(jié)合，通過同位素、熒光或酶等標記技術(shù)加以(jiāyǐ)放大和顯示， 從而定性或定量顯示細胞因子(或受體)的水平。,第二十頁，共三十八頁。,根據(jù)抗體性質(zhì)和特異性不同，夾心(jiāxīn)法ELISA可分為： 1. PcAb與McAb夾心法 2. McAb與PcAb夾心法 3. 雙McAb夾心法 4. 細胞、McAb夾心法,一、ELISA方法(fāngfǎ),ELISA法是應用最為廣泛的非均相酶標免疫分析技術(shù)，一步或多步的抗原抗體反應和一步酶促反應構(gòu)成ELISA的基本步驟，可作定性或定量分析(d236。ngli224。ngfēnxī)。ELISA法不僅可以用于細胞因子檢測，也可用于可溶性細胞因子受體或可溶性粘附因子的測定,第二十一頁，共三十八頁。,敏感性偏低 不能判斷(p224。ndu224。n)細胞因子的生物學活性。,ELISA,特異、簡便 易于推廣和標準化等優(yōu)點 可同時檢測大量標本(biāoběn)且試驗廢棄物便于處理 細胞因子測定的首選方法,優(yōu)點(yōudiǎn),缺點,第二十二頁，共三十八頁。,二、流式細胞分析法,流式細胞分析法，是基于熒光抗體(k224。ngtǐ)染色技術(shù)并借助流式細胞儀敏感的分辨力所建立的方法。該法主要用于細胞內(nèi)細胞因子和細胞表面粘附分子的檢測，通過特異性的熒光抗體(k224。ngtǐ)染色，能簡單、快速地進行單個細胞水平的細胞因子或粘附因子的檢測，精確判斷不同細胞亞群細胞因子和膜分子的表達情況。,1．分離和培養(yǎng)待檢細胞 2．細胞固定(g249。d236。ng) 3．封閉非特異性結(jié)合位點 4．染色與分析,基本(jīběn)步驟,第二十三頁，共三十八頁。,使用(shǐy242。ng)流式細胞分析法，可以：,區(qū)分不同分泌特性的細胞亞群： Th1細胞 IFNγ Th2細胞
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