20xx年醫(yī)學(xué)專題—第十六篇細(xì)胞因子及細(xì)胞粘附因子的測定(已改無錯字)
2024-11-13 20 本頁面
【正文】 IL4 細(xì)胞表面的粘附分子或細(xì)胞因子受體： 單克隆抗體技術(shù) 直接或間接熒光抗體染色 無需作細(xì)胞固定和非特異性結(jié)合位點的封閉 待測細(xì)胞是新鮮分離或培養(yǎng)(p233。iyǎng)的活細(xì)胞，保持良好狀態(tài),第二十四頁，共三十八頁。,三、酶聯(lián)免疫斑點試驗(sh236。y224。n)(ELISPOT或ElisaSpot),在包被有待測細(xì)胞因子抗體的微孔板上，加入可分泌相應(yīng)細(xì)胞因子的待測細(xì)胞，經(jīng)在有或無刺激物存在的條件(ti225。oji224。n)下培養(yǎng)，待測細(xì)胞分泌細(xì)胞因子于其周圍，并被板上的特異性抗體捕獲。后續(xù)的反應(yīng)如同ELISA，即在洗去細(xì)胞后視用于試驗的酶標(biāo)抗體為一抗或二抗，分別作直接或間接法。,一個(yī ɡ232。)斑點代表一個(yī ɡ232。)細(xì)胞因子分泌細(xì)胞，斑點的顏色深淺程度與細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子量相關(guān),基 本 原 理,第二十五頁，共三十八頁。,四、免疫學(xué)測定方法學(xué)評價(p237。ngji224。),優(yōu)點： 特異性高 操作簡便、快速，無需依賴細(xì)胞株 影響因素較少且易控制，重復(fù)性好，方法容易標(biāo)準(zhǔn)化。 缺點： 所測定的只是細(xì)胞因子的蛋白含量，與其生物活性不一定呈正比 結(jié)果與所用的抗體來源及親和力有很大的關(guān)系(guān x236。) 敏感性相對較低 標(biāo)本中細(xì)胞因子的可溶性受體，會影響特異性抗體對細(xì)胞因子的結(jié)合,第二十六頁，共三十八頁。,第三(d236。 sān)節(jié) 細(xì)胞因子與細(xì)胞粘附分子測定的臨床應(yīng)用,細(xì)胞因子的測定主要應(yīng)用于： 特定疾病的輔助診斷 機(jī)體免疫狀態(tài)的評估(p237。nɡ ɡū) 臨床疾病治療效果的監(jiān)測和指導(dǎo)用藥 疾病預(yù)防,第二十七頁，共三十八頁。,一、臨床(l237。n chu225。nɡ)應(yīng)用原則,細(xì)胞因子和粘附分子的異質(zhì)性、功能交叉性和多樣性、來源的復(fù)雜性和組織細(xì)胞的非特異性，決定了在進(jìn)行這些分子檢測(jiǎn c232。)時，必須對方法選擇和結(jié)果判斷作出綜合考慮。,第二十八頁，共三十八頁。,細(xì)胞因子的檢測方法多種多樣，各有利弊。 高敏感性方法：特異性的降低、廢棄物難處理 活性測定方法：定性試驗 基因分析法：利于細(xì)胞(x236。bāo)內(nèi)定位分析、操作煩瑣,（一）方法(fāngfǎ)的聯(lián)合應(yīng)用,第二十九頁，共三十八頁。,常用臨床標(biāo)本：抗凝全血，并分離獲得單個核細(xì)胞 炎癥局部細(xì)胞因子的水平：局部分泌液 細(xì)胞因子或粘附分子的細(xì)胞內(nèi)定位檢測(jiǎn c232。)：相應(yīng)細(xì)胞 相應(yīng)細(xì)胞因子的基因和mRNA表達(dá)：相應(yīng)細(xì)胞 療效觀察和預(yù)后判斷：疾病急性期和恢復(fù)期雙份標(biāo)本進(jìn)行動態(tài)觀測 免疫熒光染色和流式細(xì)胞分析：注意待檢細(xì)胞的活性和狀態(tài)，以保 證結(jié)果的特異性,（二）標(biāo)本的適當(dāng)(sh236。d224。ng)選取,第三十頁，共三十八頁。,意義： 細(xì)胞因子具有網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)的狀調(diào)節(jié)的特點 級聯(lián)效應(yīng)或相互抑制作用的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)。 有助于提供有效的疾病診斷和機(jī)體免 疫狀態(tài)信息 舉例(jǔ l236。)： T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和上皮樣細(xì)胞分泌相應(yīng)細(xì)胞因子的 功能：IL ILIFNγ和GMCSF Th1/Th2細(xì)胞平衡狀態(tài)：ILILIL10和IFNγ,（三）細(xì)胞因子的聯(lián)合(li225。nh233。)檢測,第三十一頁，共三十八頁。,二
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