【文章內(nèi)容簡介】 液相傳質(zhì)阻力都小時(shí)，總的傳質(zhì)阻力小，色譜峰變形擴(kuò)張小。固定液用量較大時(shí)，液膜較厚，液相傳質(zhì)阻力成為主要影響因素。而固定液用量低時(shí)，氣相傳質(zhì)阻力則成為主要因素?，F(xiàn)代氣相色譜分析一般采用低固定液用量以加快分析時(shí)間，因此主要應(yīng)考慮氣相傳質(zhì)阻力。何為分離度？哪些因素影響分離度？如何影響？是否分離度越大越好？答：分離度R 又稱分辨率，用于表示相鄰兩色譜峰分離程度的指標(biāo)，以兩組份保留值之差與平均峰寬值之比表示。R＝(tR2tR1)2(tR2tR1)＝(W1+W2)/2(W1+W2)式中tR1,tR2分別為組分組分2的保留時(shí)間；WW2分別為組分1和組分2色譜峰峰寬。分離度與柱效能、柱選擇性及柱容量的關(guān)系 推導(dǎo)可得：上式表明：提高柱效能，即增加理論塔板數(shù)，可增加分離度；在不增加柱長前提下，設(shè)法降低板高是增加分離度的有效途徑；增加柱選擇性，即增大相對保留值可極大地改善分離度；加大柱容量，即使容量因子加大，則色譜柱分離度也增大。但應(yīng)注意增大容量因子會(huì)使分析時(shí)間延長，引起色譜峰擴(kuò)張變形。實(shí)際計(jì)算分離度時(shí)應(yīng)以分析樣品中最難分離物質(zhì)對或相對兩組份的色譜峰作為計(jì)算依據(jù)。分離度不是越大越好，只要滿足分離要求就可以。進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器的溫度各如何確定？柱溫過高過低的結(jié)果是什么？答：氣化室溫度即進(jìn)樣器的溫度，取決于樣品的揮發(fā)性、沸點(diǎn)及進(jìn)樣量?？傻扔跇悠返姆悬c(diǎn)或稍高于樣品的沸點(diǎn)，以保證完全氣化。但一般不超過沸點(diǎn)50℃以上，以防樣品分解。檢測器溫度：為了使色譜流出物不在檢測器冷凝，而污染檢測器。檢測器溫度需高于柱溫，一般高30到50℃，或等于氣化室溫度。但若檢測器溫度太高，熱導(dǎo)檢測器的靈敏度降低。柱溫不能高于固定液的最高使用溫度，否則會(huì)造成固定液大量揮發(fā)流失。但柱溫不能太低，否則液相傳質(zhì)阻力增加，導(dǎo)致色譜峰拖尾。何為載體？有幾種類型，如何選用？答：載體是固定液的支持骨架，使固定液能在其表面上形成一層薄而勻的液膜。載體可以分成兩類：硅藻土類和非硅藻土類。硅藻土類載體是天然硅藻土經(jīng)煅燒等處理后而獲得的具有一定粒度的多孔性顆粒。按其制造方法的不同，可分為紅色載體和白色載體兩種。紅色載體因含少量氧化鐵顆粒而呈紅色。其機(jī)械強(qiáng)度大，孔徑小，比表面積大，表面吸附性較強(qiáng)，有一定的催化活性，適用于涂漬高含量固定液，分離非極性化合物。白色載體是天然硅藻土在煅燒時(shí)加入少量碳酸鈉之類的助熔劑，使氧化鐵轉(zhuǎn)化為白色的鐵硅酸鈉。白色載體的比表面積小，孔徑大，催化活性小，適用于涂漬低含量固定液，分離極性化合物。氣相色譜有幾種定量方法？各有何特點(diǎn)及適用范圍？ 答：氣相色譜定量方法有歸一化法、外標(biāo)法及內(nèi)標(biāo)法。（1）歸一法：指根據(jù)組分含量與峰面積成正比，對于混合物中組分i的百分含量等于它的色譜峰面積在總峰面積的百分比。計(jì)算公式為：Xi（％）＝100fiAi/229。(fiAi)i=1n式中Xi為試樣中組分的百分含量，fi為組分i的校正因子，Ai為組分i的峰面積。優(yōu)點(diǎn)：操作簡便，操作條件變化時(shí)分析結(jié)果影響較??；定量分析結(jié)果與進(jìn)樣量無關(guān)（必須以不超載為前提）。缺點(diǎn)：所有組分在一個(gè)分析周期都能流出色譜柱，且檢測器對所有組分都要有所響應(yīng)。（2）外標(biāo)法：指在相同的操作條件下，分別將等量的試樣和含待測組分的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行色譜分析，比較試樣與標(biāo)準(zhǔn)品中待測組分的峰值，求出待測組分的含量的方法。計(jì)算公式為：Xi＝EiAi／AE 式中Xi為試樣中組分i的含量，Ei為標(biāo)準(zhǔn)試樣中組分i的含量，Ai為試樣中組分i的峰面積，AE為標(biāo)準(zhǔn)試樣中組分i的峰面積。優(yōu)點(diǎn)：操作簡便且不必求校正因子；在線性范圍內(nèi)，待測組分在試樣、標(biāo)準(zhǔn)試樣中含量相近時(shí)，定量分析準(zhǔn)確度較高。缺點(diǎn)：對進(jìn)樣操作重現(xiàn)性、儀器穩(wěn)定性要求較高，同時(shí)在實(shí)際應(yīng)用時(shí)應(yīng)定時(shí)校正線性。該法要求進(jìn)樣量準(zhǔn)確且實(shí)驗(yàn)條件恒定。為降低實(shí)驗(yàn)誤差，應(yīng)盡量使配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與樣品中i組分濃度相近，且進(jìn)樣體積最好相等。（3）內(nèi)標(biāo)法：指在已知量試樣中加入能與所有組分完全分離的已知量內(nèi)標(biāo)物，用相應(yīng)校正因子校準(zhǔn)待測組分的峰值并與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰值進(jìn)行比較，求出待測組分百分含量的方法。計(jì)算公式如下：Xi（％）＝100msAifis/mAs式中Xi為試樣中組分i的百分含量，m為試樣的質(zhì)量（g），ms為加入內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的質(zhì)量（g），Ai為組分i的峰面積，As為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積，fis為組分i對內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的相對校正因子。適用范圍：對在一個(gè)分析周期內(nèi)混合物樣品中所有組分不能全部流出色譜柱；或檢測器不能對所有組分都響應(yīng)；或只需測定混合物中某幾個(gè)組份含量時(shí)，可用內(nèi)標(biāo)法。內(nèi)標(biāo)法的優(yōu)點(diǎn)：①在進(jìn)樣量不超過限定量的前提下，結(jié)果與進(jìn)樣的重復(fù)性無關(guān) ②只要被測組分與內(nèi)標(biāo)物出峰，且分離度符合要求就可定量③適合分離藥物中的微量組分。有時(shí)微量組分與主要成分的含量相差懸殊。缺點(diǎn)：必須準(zhǔn)確計(jì)量樣品和內(nèi)標(biāo)物的量，且有時(shí)不易找到合適的內(nèi)標(biāo)物。高效液相色譜儀由哪些部件組成？與氣相色譜儀比較有何異同？答：高效液相色譜儀一般由五個(gè)部分組成：高壓輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。輸液泵、色譜柱、檢測器是儀器的基礎(chǔ)部件。GCHPLC分析對象在操作溫度下能迅速氣化且不分解可分析20 %的有機(jī)物能制成溶液即可，不需氣化（高分子和離子型）可分析80 %的有機(jī)物應(yīng)用范圍流動(dòng)相 選擇余地小，一般不影響分離選擇范圍寬，明顯影響分離（極性和pH不易不高值）容易，可用于制備較高,更為安全 柱后回收價(jià)格及安全1正相色譜中常用的固定相和流動(dòng)相有哪些？適合分離哪些類型化合物？答：在正相色譜中，一般采用極性鍵合固定相，硅膠表面鍵合的是極性的有機(jī)基團(tuán)，鍵合相的名稱由鍵合上去的基團(tuán)而定。最常用的有氰基（C N）、氨基（NH2）、二醇基（DIOL）鍵合相。流動(dòng)相一般用比鍵合相極性小的非極性或弱極性有機(jī)溶劑，如烴類溶劑，或其中加入一定量的極性溶劑（如氯仿、醇、乙腈等），以調(diào)節(jié)流動(dòng)相的洗脫強(qiáng)度。通常用于分離極性化合物。1反相色譜中常用的固定相和流動(dòng)相有哪些？適合分離哪些類化合物？在反相色譜中，一般采用非極性鍵合固定相，如硅膠C18H37（簡稱O D S或C18）硅膠苯基等，用強(qiáng)極性的溶劑為流動(dòng)相，如甲醇/水，乙腈/水，水和無機(jī)鹽的緩沖液等。反相鍵合相色譜是應(yīng)用最廣泛的色譜法，適合分離非極性至中等極性的組分。1高效液相色譜中常用的洗脫方式有哪些？答： 洗脫方式有恒組成溶劑洗脫和梯度洗脫。恒組成溶劑洗脫是用恒定配比的溶劑系統(tǒng)洗脫。梯度洗脫是將兩種以上不同性質(zhì)但可以互溶的溶劑，按一定程序在分離過程連續(xù)或間斷改變這些溶劑的組成比例，以改變流動(dòng)相極性、離子強(qiáng)度的PH值等，使得被測組分相對保留值發(fā)生改變，達(dá)到改善分離效能，加快分析速度，縮短分析時(shí)間，提高靈敏度的目的。用來分析復(fù)雜試樣中性質(zhì)差異較大的組分。1離子源有什么作用？常用的離子源有哪些？各有何特點(diǎn)？答：離子源的作用是使待分析的物質(zhì)電離成離子，并將離子匯聚成有一定能量和一定幾何形狀的離子束 常用的離子源有：（1）電子電離源：優(yōu)、缺點(diǎn)：離子產(chǎn)率高，穩(wěn)定性好；但對于不穩(wěn)定的有機(jī)化合物，往往會(huì)使絕大多數(shù)分子都生成碎片離子，得到不易辨認(rèn)的分子離子峰。（2）化學(xué)電離源：一般有較強(qiáng)的[M+H]+ 或[MH]+準(zhǔn)分子離子峰，還可得到[M+ 17]+和[M+ 29]+的正離子，而碎片離子峰較少，質(zhì)譜圖大為簡化，容易解析。（3）電噴霧電離源：適合于分析極性強(qiáng)的大分子有機(jī)化合物，容易形成多電荷離子（4）基質(zhì)輔助激光解吸離子源：準(zhǔn)分子離子峰很強(qiáng)，且碎片離子少。通常用于飛行時(shí)間質(zhì)譜，組成MALDITOF，特別適合測定多肽、蛋白質(zhì)、DNA片段、多糖等的相對分子質(zhì)量。1什么是氮數(shù)規(guī)則：相對分子質(zhì)量為偶數(shù)的化合物，必含有偶數(shù)個(gè)氮原子或不含有氮原子；相對分子質(zhì)量為奇數(shù)的化合物，只能含有奇數(shù)個(gè)氮原子。1簡述質(zhì)譜儀的主要部件及其作用答：（1）真空系統(tǒng)，質(zhì)譜儀的離子源、質(zhì)量分析器、檢測器必須處于高真空狀態(tài)。（2）進(jìn)樣系統(tǒng)，將樣品氣化為蒸氣送入質(zhì)譜儀離子源中。樣品在進(jìn)樣系統(tǒng)中被適當(dāng)加熱后轉(zhuǎn)化為即轉(zhuǎn)化為氣體。（3）離子源，被分析的氣體或蒸氣進(jìn)入離子源后通過電子轟擊（電子轟擊離子源）、化學(xué)電離（化學(xué)電離源）、場致電離（場致電離源）、場解析電離（場解吸電離源）或快離子轟擊電離（快離子轟擊電離源）等轉(zhuǎn)化為碎片離子。（4）質(zhì)量分析器，自離子源產(chǎn)生的離子束在加速電極電場作用下被加速獲得一定的動(dòng)能