【文章內容簡介】 和 PAL 活性 刺激果實 ?1， 3葡聚糖酶基因表達 表 13 主要產抗生素菌株 抗生素名稱 產生菌株 作用對象 病原菌 伊枯草菌素 枯草芽孢桿菌 B3 核果類水果 M. fructicola 吡咯菌素 洋蔥假單胞菌 (P. cepacia) LT412W 梨果 、柑橘 核果類水果 擴展青霉、灰葡萄 孢 丁香霉素 E 丁香假單胞桿菌 ESC10 和 ESC11（ BioSave） 檸檬 吡喃酮 木霉 草莓、蘋果 灰葡萄孢 拮抗菌生理調控及機理的研究 近年來，隨著拮抗菌和病原菌之間 的 細胞學、生物化學和分子生物學研究的不斷深入發(fā)展，研究者發(fā)現 通過調節(jié)采后拮抗酵母的生理代謝機制可能是增強其拮抗能力的有效途徑之一（ Janisiewicz 和 Korsten, 20xx） 。 逆境培養(yǎng) Teixid243。等（ 1998）研究表明通過低水分活度培養(yǎng) Candida sake 后其在采哈爾濱工業(yè)大學 工學 學士學位論文 第一章 文獻綜述 5 前使用時生長數量明顯增加并增強了酵母的拮抗效力，其機理與積累糖醇和海藻糖有關； ?? 。 拮抗 物質的 分泌 和 積累 阿 根 廷學 者發(fā) 現粘 紅酵 母（ Rhodotorula glutini) 產 生 的一 種 酸（ rhodotorulic acid）能抑制許多病原真菌，而且發(fā)現整合使用 rhodotorulic acid 和該粘紅酵母能增強其對果實病害的控制（ Calvente et al., 20xx； Sansone et al., 20xx）。 ?? 基因工程技術 的應用 利用分子生物學和基因工程的 手段研究拮抗菌的遺傳背景并開展相應分子水平的改造是生物防治領域的一個研究熱點， ?? 。 本課題研究目的 近年來，采后生物保鮮劑的發(fā)展遇到了瓶頸。 ?? 。 本試驗目的是解決瓶頸問題之一，探討通過在培養(yǎng)基中添加幾丁質等培養(yǎng)酵母 R. paludigenum 提高其拮抗效力的可行性，以提高酵母的生防效果。研究幾丁質誘導后 R. paludigenum 對蘋果、梨采后主要真菌病害擴展青霉（ P. expansum）體內的抑制效果，篩選出最佳誘導劑量及誘導時間，并結合其他誘導因子為蘋果、梨采后病害提供一種安全、經濟有效的防 治方法， 并對可能存在的相關機理，包括促進酵母菌生長、分泌抗菌物質和誘導抗性等進行系統(tǒng)研究。 應用前景和學術價值 利用拮抗酵母對水果采后病害進行生物防治是目前國內外研究的熱點，其 對于保護生態(tài)環(huán)境、減少食品農藥殘留、保障公眾健康具有重要意義 。但是要實現拮抗酵母的商業(yè)化推廣應用，迫切需要解決的問題是提高其生物學效力。 ?? 。 章節(jié)間要有分頁符哈爾濱工業(yè)大學學士學位論文 第二章 海洋酵母 R. paludigenum 對果實采后真菌病害抑制效果研究 6 第二章 海洋酵母 R. paludigenum 對果實采后真菌病害抑制效果研究 前言 生物防治是采用微生物菌株或抗菌素類物質，通過噴灑或浸漬果實處理，以降低或防 治果實采后病害的保鮮方法。 ?? 。 材料和方法 主要儀器 TH3560 全自動滅菌鍋 造鑫 (TSAO HSIN)企業(yè)有限公司 SWCJ1F 超凈工作臺 蘇州安泰空氣技術有限公司 SIGMA 3K15 離心機 德國希格瑪（ SIGMA）公司 QYC211 全溫空氣搖床 上海?，攲嶒炘O備有限公司 Sartrious 電子天平 北京賽多利斯天平有限公司 200 ?l、 1000 ?l、 5ml移液器 德國 Eppendorf 公司 血球計數板（ 2516） 上海醫(yī)用光學儀器廠 光學顯微鏡 日本奧林巴斯有限公司 LRH250 生化培養(yǎng)箱 上海一恒科技有限公司 拮抗菌及其培養(yǎng) 拮抗菌 Rhodosporidium paludigenum，分離自中國東海近海海域，并經英國國際微生物所菌種保存和鑒定中心（ CABI Bioscience Identification Services）鑒定。 ?? 酵母誘導培養(yǎng) 保存的酵母菌種首先在 NYDA 斜面培養(yǎng)基中進行活化， ?? 。 哈爾濱工業(yè)大學學士學位論文 第二章 海洋酵母 R. paludigenum 對果實采后真菌病害抑制效果研究 7 病原菌培養(yǎng)和孢子懸浮液的制備 病原菌 病原菌為擴展青霉（ Penicillium expansum）， ?? 。 病原菌菌懸液的制備 從病原菌保存斜面中 挑取適量的霉菌孢子， ?? 。 試劑 幾丁質（ Chitin）為生化純試劑，使用前先研磨，并用 100 目篩網過濾后備用。 果實選擇與預處理 試驗所用果實為正常商業(yè)成熟度的蘋果 (Malus domestica)果實， ?? 。 幾丁質對 R. paludigenum 生防效果的影響 不同濃度幾丁質對拮抗酵母生防活性的影響 酵母活化和液體培養(yǎng)、菌體收集同 ， ?? 。 幾丁質誘導后不同濃度 R. paludigenum 酵母的生防效果 用消過毒的打孔器在每個果實表面形成統(tǒng)一大小和深度的傷口。 ?? 。 不同培養(yǎng)時間對幾丁質誘導 拮抗酵母生防活性的影響 酵母活化和液體培養(yǎng)、菌體收集同 ， ?? 。 幾丁質與 NaCl 結合誘導對拮抗酵母生防活性的影響 酵母活化和液體培養(yǎng)、菌體收集同 ， ?? 。 數據處理 分析與作圖 采用 SPSS 軟件 (Statistical Product and Service Solutions)進行數據統(tǒng)計，數據采用 ANOVA 進行鄧肯氏 差異分析方法（取 p）。采用 軟件作圖。 哈爾濱工業(yè)大學學士學位論文 第二章 海洋酵母 R. paludigenum 對果實采后真菌病害抑制效果研究 8 結果 不同濃度幾丁質對 R. paludigenum 生防效力的影響 在不同濃度的 NYCB 中誘導培養(yǎng)后， R. paludigenum 對梨青霉病的生防效力顯著提高（圖 21 和圖 22）。 ?? 。 6d 7d020406080100cbcbcdbcdbcdbccbaDisease incidence (%)D ay s af t er i nocul at i on(d) C ont rol N Y D B N Y C B ( 0. 1%) N Y C B ( 0. 2%) N Y C B ( 1. 0%) N Y C B ( 2. 0%)a 圖 21 不同濃度幾丁質培養(yǎng)后的 R. paludigenum 對梨青霉病的抑制效果 溫表 注：線條代表 3 個重復的標準誤，不同的字母表示 Duncan 多重測試得出的差異顯著性 Fig. 21 Incidence of blue mold decay caused by Penicillium expansum on pears inoculated with R. paludigenum cultured with different concentrations of chitin. Notes: Bars represent standard errors of three replications. Different letter indicates significant differences (P ) according to the Duncan39。s multiple range tests. 能用圖表示的結果最好用圖，不要用表格，數據盡量作統(tǒng)計學分析 能用圖表示的結果最好用圖，不要用表格，數據盡量作統(tǒng)計學分析 圖題五號字，加粗，居中排列，中文英對照一致，圖注字體為小五號 哈爾濱工業(yè)大學學士學位論文 第二章 海洋酵母 R. paludigenum 對果實采后真菌病害抑制效果研究 9 6d 7d012345cbcabaababababLesion diameter (mm)D ay s af t er i nocul at i on(d) N Y D B N Y C B ( 0. 1%) N Y C B ( 0. 2%) N Y C B ( 1. 0%) N Y C B ( 2. 0%) a 圖 22 不同濃度幾丁質培養(yǎng)后 R. paludigenum 對梨青霉病病斑直徑的影響 Fig. 22 Severity of blue mold decay caused by Penicillium expansum on pears inoculated with R. paludigenum cultured with different concentrations of chitin. Bars represent standard errors of three replications. Different letter indicates significant differences (P ) according to the Duncan39。s multiple range tests. 類似的，在蘋果果實上， ?? 。 C ont rol A B C D E020406080100bcccbbDIsease incidence (%)T reat m enta C ont A B C D E048121620bbbbbLesion diameter (mm)T reat m enta 圖 23 不同濃度幾丁質培養(yǎng)后 第 5 天 R. paludigenum 對蘋果青霉病的生防效果 注： A: NYDB 培養(yǎng)的 R. paludigenum。 B: %（ w/v）幾丁質 NYDB 培養(yǎng)的 R. paludigenum。 C: %（ w/v）幾丁質 NYDB 培養(yǎng)的 R. paludigenum。 D: %（ w/v）幾丁質 NYDB 培養(yǎng)的 R. paludigenum。 E: %（ w/v）幾丁質 NYDB 培養(yǎng)的 R. paludigenum. Fig. 23 Incidence of blue mold decay caused by Penicillium expansum on apples inoculated with R. paludigenum cultured with different concentrations of chitin. 哈爾濱工業(yè)大學學士學位論文 第二章 海洋酵母 R. paludigenum 對果實采后真菌病害抑制效果研究 10 Notes: A: R. paludigenum cultured in NYDB。 B: R. paludigenum cultured in NYDB with % chitin。 C: R. paludigenum cultured in NYCB with % chitin。 D: R. paludigenum cultured in NYCB with % chitin。 E: R. paludigenum cultured in NYCB with % chitin. Bars represent standard errors of three replications. 幾丁質誘導后不同濃度 R. paludigenum 酵母的生防效果 實 驗結果表明， ?? 。 不同培養(yǎng)時間對幾丁質誘導 R. paludigenum 生防效力的影響 %（ w/v） 的 NYCB 培養(yǎng)基分別培養(yǎng) 2 3 4 72 和 96 h 后， ?? 。 幾丁質與 NaCl 結合誘導對 R. paludigenum 生防效力的影響 幾丁質與 NaCl結合誘導后， R. paludigenum 對梨青霉病的抑制效果 ?? 哈爾濱工業(yè)大學學士學位論文 第二章 海洋酵母 R. paludigenum 對果實采后真菌病害抑制效果研究 11 討論 試驗結果表明： ?? 。 哈爾濱工業(yè)大學學士學位論文 第三章 海洋酵母 R. paludigenum 對果實采后真菌病害抑制機理研究 12 第三章 海洋酵母 R. paludigenum 對