【正文】 ....................................................... 18 第四章 結(jié)果 與 展望 ........................................... 19 本論文的主要研究結(jié)果 .......................................... 19 本實驗的后續(xù)研究及展望 ........................................ 19 致謝 ...................................................... 32 參考文獻 ................................................... 33 哈爾濱工業(yè)大學學士學位論文 目錄 5 附 錄 ...................................................... 37 哈爾濱工業(yè)大學 工學 學士學位論文 第一章 文獻綜述 1 第一章 文獻綜述 我國水果產(chǎn)業(yè) 發(fā)展概述 水果是維生素、礦物質(zhì)和膳 食纖維的重要來源，是人們維持身體健康，增進營養(yǎng)必不可少的主要食品 ， 是世界上僅次于糧食的農(nóng)產(chǎn)品 。本人完全意識到本聲明的法律后果由本人承擔。 作 者 簽 名： 日 期： 指導教師簽名： 日 期： 使用授權(quán)說明 本人完全了解 大學關(guān)于收集、保存、使用畢業(yè)設計（論文）的規(guī)定，即：按照學校要求提交畢業(yè)設計（論文）的印刷本和電 子版本；學校有權(quán)保存畢業(yè)設計（論文）的印刷本和電子版，并提供目錄檢索與閱覽服務；學?？梢圆捎糜坝　⒖s印、數(shù)字化或其它復制手段保存論文；在不以贏利為目的前提下，學?？梢怨颊撐牡牟糠只蛉績?nèi)容。 Induction。 ?? 關(guān)鍵詞 ： Rhodosporidium paludigenum；幾丁質(zhì) ；誘導；生物防治 ABSTRACT Biological control is a method that using microbial strains or antibiotic substances, by spraying or dipping, to decrease postharvest decay of fruits. We planned to use chitin (one of the yeast cell wall ponents) to coculture with Rhodosporidium paludigenum Fell amp。哈爾濱工業(yè)大學學士學位論文 工學 學士畢業(yè)論文 幾丁質(zhì)對海洋生防酵母 (Rhodosporidium paludigenum)抑菌活性的影響及相關(guān)機理的研究 哈爾濱工業(yè)大學學士學位論文 A Thesis for the Degree of B. Eng Impact and Mechanism of Chitin on the Marine Yeast’s Antibacterial Activity（ Times New Roman 二號加粗居中） Candidate： Laifeng Lu Supervisor： Guangfeng Kan Academic Degree Applied for： Bachelor of Engineering Specialty： Food Science and Engineering Date of Oral Examination： June, 20xx University： ： Harbin Institute of Technology 摘 要 生物防治是采用微生物菌株或抗菌素類物質(zhì)，通過噴灑或浸漬果實處理，以 降低或防治果實采后病害的保鮮方法。 Tallman）以提高其采后果實 病害 生物防治 效果 。 Chitin。對本研究提供過幫助和做出過貢獻的個人或集體，均已在文中作了明確的說明并表示了謝意。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。 涉密論文按學校規(guī)定處理。病原菌孢子一旦接觸傷口組織，侵染就開始了 （ Janisiewicz和 Korsten, 20xx； Prusky 和 Lichter, 20xx） 。最近，中科院植物所 Qin 等 （ 20xx）利用蛋白組學技術(shù)發(fā)現(xiàn)， ?? 。 化學殺菌劑的使用 目前，化學殺菌劑是防治果蔬采后真菌病害的主要手段之一。 ?? 。 ?? 營養(yǎng)和空間的競爭 為了抑制病原菌的侵染 , 拮抗菌必須在病原菌到達以前或到達以后的很短時間內(nèi)在果實表面侵染部位占據(jù)優(yōu)勢。 胞外活性物質(zhì)的產(chǎn)生 一些研究結(jié)果顯示，拮抗菌與病原菌互作時 , 在果實傷口部位生長的酵母細胞外圍有大量的新生物質(zhì)。 抗生作用 通過拮抗菌產(chǎn)生抗生素抑制病原菌作用是人們最早發(fā)現(xiàn)的一種拮抗機理，也是大多數(shù)拮抗細菌最主要的機制之一（表 ）（ Janisiewicz and Roitman, 1988。 逆境培養(yǎng) Teixid243。 本課題研究目的 近年來，采后生物保鮮劑的發(fā)展遇到了瓶頸。 應用前景和學術(shù)價值 利用拮抗酵母對水果采后病害進行生物防治是目前國內(nèi)外研究的熱點，其 對于保護生態(tài)環(huán)境、減少食品農(nóng)藥殘留、保障公眾健康具有重要意義 。 ?? 。 病原菌菌懸液的制備 從病原菌保存斜面中 挑取適量的霉菌孢子， ?? 。 幾丁質(zhì)誘導后不同濃度 R. paludigenum 酵母的生防效果 用消過毒的打孔器在每個果實表面形成統(tǒng)一大小和深度的傷口。 數(shù)據(jù)處理 分析與作圖 采用 SPSS 軟件 (Statistical Product and Service Solutions)進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，數(shù)據(jù)采用 ANOVA 進行鄧肯氏 差異分析方法（取 p）。 6d 7d020406080100cbcbcdbcdbcdbccbaDisease incidence (%)D ay s af t er i nocul at i on(d) C ont rol N Y D B N Y C B ( 0. 1%) N Y C B ( 0. 2%) N Y C B ( 1. 0%) N Y C B ( 2. 0%)a 圖 21 不同濃度幾丁質(zhì)培養(yǎng)后的 R. paludigenum 對梨青霉病的抑制效果 溫表 注：線條代表 3 個重復的標準誤，不同的字母表示 Duncan 多重測試得出的差異顯著性 Fig. 21 Incidence of blue mold decay caused by Penicillium expansum on pears inoculated with R. paludigenum cultured with different concentrations of chitin. Notes: Bars represent standard errors of three replications. Different letter indicates significant differences (P ) according to the Duncan39。 B: %（ w/v）幾丁質(zhì) NYDB 培養(yǎng)的 R. paludigenum。 B: R. paludigenum cultured in NYDB with % chitin。 不同培養(yǎng)時間對幾丁質(zhì)誘導 R. paludigenum 生防效力的影響 %（ w/v） 的 NYCB 培養(yǎng)基分別培養(yǎng) 2 3 4 72 和 96 h 后， ?? 。 病原菌培養(yǎng)和孢子懸浮液的制備 見 。果 ?? 。 酶的提取和測定 稱取 3 g果實組織加入 5 mL冷 (4℃ )的 50 mmol l1 含 mmol l1 EDTA和 1% PVPP PBS 緩沖液 (PH )。采用 哈爾濱工業(yè)大學學士學位論文 第三章 海洋酵母 R. paludigenum 對果實采后真菌病害抑制機理研究 14 軟件作圖。s multiple range test. 哈爾濱工業(yè)大學學士學位論文 第三章 海洋酵母 R. paludigenum 對果實采后真菌病害抑制機理研究 15 5 0 5 10 15 20 25 30 35 405. 45. 55. 65. 75. 85. 96. 06. 16. 26. 36. 46. 5Population (log cells/wound)T im e af t er inoc ulat ion (h) N Y D B N Y C B** 圖 32 幾丁質(zhì)誘導后 1107 cells/mL R. paludigenum 在蘋果果實傷口處的生長動態(tài) Fig. 32 Population dynamics of R. paludigenum in wounds of apples incubated at 25℃ . Wounds were treated with 50?l of 1107 cells/mL washed cell suspension of R. paludigenum alone. Bars represent standard errors of three replications. * Symbols indicates significant differences (P ) according to the Duncan39。s multiple range test. 幾丁質(zhì)處理后 R. paludigenum 發(fā)酵上清液的抑菌效果 如圖 35 所示， R. paludigenum 在 NYDB 中培養(yǎng)后的上清液沒有抑菌效力，反而有促進效果。 0h 6h 12h 24h 36h05001000150020xx2500300035004000450050005500POD Activity (U/mg protein)T i m e af t er i nocul at i on (h) C K N Y D B N Y C B 圖 36 幾丁質(zhì)培養(yǎng)后的酵 母 R. paludigenum 對蘋果 POD 活性的影響 Fig. 36 Effects of R. paludigenum cultivation in NYDB or NYDB amended with chitin 哈爾濱工業(yè)大學學士學位論文 第三章 海洋酵母 R. paludigenum 對果實采后真菌病害抑制機理研究 18 powder at % on the peroxidase activity in apple fruit. Bars represent standard errors of three replications. 討論 為進一步明確幾丁質(zhì)提高酵母拮抗效力的機理，本試驗對幾 丁質(zhì)培養(yǎng)后R. paludigenum 的 生長動態(tài)、發(fā)酵上清液 的 抑菌性 ,果實抗性 的 誘導和果實POD 酶 的激活 活等進行了研究。 （ 2）幾丁質(zhì)對 R. paludigenum 生防效力 的最佳誘導濃度為 %（ w/v） ，最佳誘導培養(yǎng)時 間為 36~48 h。這一結(jié)果暗示幾丁質(zhì)可能刺激 R. paludigenum 分泌了抑菌相關(guān)物質(zhì)，其確切機理尚待進一步研究。酵母及果實內(nèi)部具體分子作用機理，例如 ,基因組功能及表達、信號通路作用關(guān)系、蛋白激活等作用機制并不清楚。 哈爾濱工業(yè)大學學士學位論文 致 謝 21 致 謝 歲月匆匆，時光荏苒，轉(zhuǎn)瞬間四年的大學生活即將結(jié)束。 感謝浙江大學鄭曉冬教授在我畢業(yè) 實習期間，在學業(yè)、實驗和生活上給予的悉心指導和無私幫助；感謝余挺副教授從論文選題到文章定稿過程中給與的 悉心細致的教誨和無私的幫助 ，整個實驗的每一步都是在他的指導下完成的，傾注了余挺老師大量的時間和精力；同時感謝盧黃娉師姐在我實驗實際操作及論文編寫過程中給與的極大幫助。 不管相逢在什么時候，我們是永遠的朋友；感謝在實習期間，浙江大學食品 506實驗室的王一非、殷赟、劉燕、任雪艷師姐，李漢林、陸蕾、王鵬、倪庚、唐飛師兄在實驗和生活上給予的指導和幫助； 感謝 617 寢室的兄弟們，感謝你們共享著我的快樂，分擔著我的悲傷； 感謝我親愛的父母多年來對我的養(yǎng)育之恩和諄諄教誨，你們辛苦了。a