【正文】 4 重寄生作用 ............................................... 5 胞外活性物質(zhì)的產(chǎn)生 ....................................... 5 誘導(dǎo)抗性 ................................................. 6 抗生作用 ................................................. 6 拮抗菌生理調(diào)控及機理的研究 ..................................... 7 逆境培養(yǎng) ................................................. 7 拮抗 物質(zhì)的 分泌 和 積累 ..................................... 8 基因工程技術(shù) 的應(yīng)用 ....................................... 8 本課題研究目的 ................................................. 8 應(yīng)用前景和學(xué)術(shù)價值 ............................................. 9 第二章 海洋酵母 R. paludigenum 對果實采后真菌病害抑制效果研究 ..... 10 前言 .......................................................... 10 實驗材料和方法 ................................................ 10 主要儀器 ................................................ 10 拮抗菌及其培養(yǎng) ........................................... 6 哈爾濱工業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 目錄 4 病原菌培養(yǎng)和孢子懸浮液的制備 ............................. 7 試劑 ..................................................... 7 果實選擇與預(yù)處理 ......................................... 7 幾丁質(zhì)對 R. paludigenum 生防效果的影響 ..................... 7 數(shù)據(jù)處理分析與作圖 ....................................... 7 結(jié)果 ........................................................... 8 不同濃度幾丁質(zhì)對 R. paludigenum 生防效力的影響 ............. 8 幾丁質(zhì)誘導(dǎo)后不同濃度 R. paludigenum 酵母的生防效果 ........ 10 不同培養(yǎng)時間對幾丁質(zhì)誘導(dǎo)下 R. paludigenum 生防效力的影響 .. 10 幾丁質(zhì)與 NaCl結(jié)合誘導(dǎo)對 R. paludigenum 生防效力的影響 ..... 10 討論 .......................................................... 20 第三章 海洋酵母 R. paludigenum 對果實采后真菌病害抑制機理研究 ..... 12 前言 .......................................................... 12 實驗材料和方法 ................................................ 12 主要儀器 ................................................ 12 拮抗菌及其培養(yǎng) .......................................... 13 病原菌培養(yǎng)和孢子懸浮液的制備 ............................ 13 果實選擇與預(yù)處理 ........................................ 13 幾丁質(zhì)對 R. paludigenum 生防機理的影響 .................... 13 數(shù)據(jù)處理分析與作圖 ...................................... 13 結(jié)果 .......................................................... 14 幾丁質(zhì)對 R. paludigenum 在果實傷口處生長動態(tài)的影響 ........ 14 幾丁質(zhì)處理后 R. paludigenum 對果實誘導(dǎo)抗性的影響 .......... 15 幾丁質(zhì)處理后 R. paludigenum 發(fā)酵上清液的抑菌效果 .......... 16 幾丁質(zhì)培養(yǎng)后 R. paludigenum 對果實 POD 酶活性的影響 ....... 17 討論 .......................................................... 18 第四章 結(jié)果 與 展望 ........................................... 19 本論文的主要研究結(jié)果 .......................................... 19 本實驗的后續(xù)研究及展望 ........................................ 19 致謝 ...................................................... 32 參考文獻 ................................................... 33 哈爾濱工業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 目錄 5 附 錄 ...................................................... 37 哈爾濱工業(yè)大學(xué) 工學(xué) 學(xué)士學(xué)位論文 第一章 文獻綜述 1 第一章 文獻綜述 我國水果產(chǎn)業(yè) 發(fā)展概述 水果是維生素、礦物質(zhì)和膳 食纖維的重要來源，是人們維持身體健康，增進營養(yǎng)必不可少的主要食品 ， 是世界上僅次于糧食的農(nóng)產(chǎn)品 。 ?? . 正文 內(nèi)容為 小四 字 體，行距 ，中文為宋體，英文為 Times New Roman，下同 果蔬采后病害的侵染研究 由真菌病害引起的果實采后的腐爛變質(zhì)是導(dǎo)致水果大量損失的主要原因之一。 ?? . 采后病原真菌的侵染方式 采后病原真菌主要通過 3 種途徑或方式入侵果實： (1)通過機械傷或蟲害等造成的傷口； (2)通過自然開放的皮孔、氣孔、果實和花梗結(jié)合部位； (3)通 過分泌寄主細(xì)胞壁水解酶等直接突破果實表皮的防御機制（ Prusky 和Lichter, 20xx）。病原菌孢子一旦接觸傷口組織，侵染就開始了 （ Janisiewicz和 Korsten, 20xx； Prusky 和 Lichter, 20xx） 。 引用的參考文獻多于 1 篇時，按照論文發(fā)表時間的先后次序時行引用 采后病原真菌的致病機理 采后病原真 菌具有眾多而且復(fù)雜的致病機理，但其最終目的都是成功的侵染寄主。 ?? 致病菌酸化果實組織 Pseudomonas expansum、 P. digitatm 和 P. italicum 等酸性病原真菌能產(chǎn)生檸檬酸和葡萄糖酸等有機酸，使寄主果實組織發(fā)生酸化，進而促進病原菌致病因子，如 PG 基因（ pepgl）的表達（ Prusky et al., 20xx）。 致病因子 CAT 物種拉丁名第一次出現(xiàn)屬名寫出全稱，隨后用其縮寫 章 節(jié)， 小二黑體居中 ，下同 二級標(biāo)題， 小三黑體 ，下同 三級標(biāo)題，四號 黑體 ，下同 四級標(biāo)題，小四號 黑體 ，下同 哈爾濱工業(yè)大學(xué) 工學(xué) 學(xué)士學(xué)位論文 第一章 文獻綜述 2 活性氧（ Reactive Oxygen Species， ROS）在植物和微生物相互作用過程中具有重要作用（ Torres et al., 20xx)。最近，中科院植物所 Qin 等 （ 20xx）利用蛋白組學(xué)技術(shù)發(fā)現(xiàn)， ?? 。 病原菌破壞植物自身防御機制 植物在遭到病原菌侵染時， 通過體內(nèi)木質(zhì)素和羥脯氨酸糖的沉積，植物抗菌素的積累，蛋白質(zhì)酶抑制劑和溶菌酶的合成來增強細(xì)胞壁的保衛(wèi)反應(yīng)。 ?? 果蔬采后病害的控制方法 果蔬貯藏保鮮是果蔬生產(chǎn)減損、保值和增值的關(guān)鍵因素。 ?? 。 化學(xué)殺菌劑的使用 目前，化學(xué)殺菌劑是防治果蔬采后真菌病害的主要手段之一。 ?? 。 果實采后病害 物理 防治 果蔬采后病害防治物理方法主要有：熱處理；低溫冷藏 ； 微波處理；氣調(diào)；輻射處理；低壓處理。低溫冷藏技術(shù)已經(jīng)在部分地區(qū)得到實際運用，熱殺菌和輻照殺菌也是目前報道比較多的方法。 ?? 。 果 實采后 病害 生物防治 從可持續(xù)發(fā)展的角度出發(fā)，開發(fā)新型、高效且安全的有機、綠色的保鮮劑具有重大的社會意義和廣闊的應(yīng)用前景。 ?? 。 采后拮抗酵母作用機制 根據(jù)已有的研究結(jié)果顯示，微生物對病原菌有直接作用和間接作用兩種方式，直接作用包括抗生作用和重寄生作用，間接作用包括營養(yǎng)和空間的競爭，胞外活性物質(zhì)的產(chǎn)生和誘導(dǎo)抗性等。 ?? 營養(yǎng)和空間的競爭 為了抑制病原菌的侵染 , 拮抗菌必須在病原菌到達以前或到達以后的很短時間內(nèi)在果實表面侵染部位占據(jù)優(yōu)勢。 ?? 。 非共知的英文縮寫在文中第一次出現(xiàn)時需要寫出全稱，并給出中文意思 哈爾濱工業(yè)大學(xué) 工學(xué) 學(xué)士學(xué)位論文 第一章 文獻綜述 3 重寄生作用 許多酵母拮抗菌可以分泌胞外 水解酶（幾丁酶， β1,3葡聚糖酶等），從而分解病原菌的細(xì)胞壁或菌絲體。 ?? 。 胞外活性物質(zhì)的產(chǎn)生 一些研究結(jié)果顯示，拮抗菌與病原菌互作時 , 在果實傷口部位生長的酵母細(xì)胞外圍有大量的新生物質(zhì)。這些胞外活性物質(zhì)可能參與了拮抗菌與病原菌之間的相互作用（ 表 11）。 表 11 主要產(chǎn)胞外物質(zhì)菌株 誘導(dǎo)抗性 近 5 年來，拮抗 菌 誘導(dǎo)采后果實抗性 成為了生物防治的研究熱點 。 ?? 。 抗生作用 通過拮抗菌產(chǎn)生抗生素抑制病原菌作用是人們最早發(fā)現(xiàn)的一種拮抗機理，也是大多數(shù)拮抗細(xì)菌最主要的機制之一（表 ）（ Janisiewicz and Roitman, 1988。 Janisiewicz et al., 1991）。 ?? 。 抗生素名稱 產(chǎn)生菌株 針對 病原菌 蒿屬香豆素、東莨菪亭 無名假絲酵母 (C. famata) 指狀青霉 毒性蛋白 (killer protein) 畢赤酵母屬 (Pichia sp.) 抗細(xì)菌物質(zhì) 羅倫隱球酵母 （ C. laurentii） 熒光假單胞菌、 Staphylococcus aureus 揮發(fā)性物質(zhì) 乳酸克魯維酵母 (Kluyveromyces lactis) 擴展青霉 圖表在文中一定要有引用，且圖表緊隨文字描述之后 五號宋體加粗居中 三線表 哈爾濱工業(yè)大學(xué) 工學(xué) 學(xué)士學(xué)位論文 第一章 文獻綜述 4 表 12 采后拮抗 菌 對果實抗性的誘導(dǎo)及對抗性相關(guān)反應(yīng)的刺激 果實 拮抗菌 備注 蘋果 出芽短梗霉 C. saitoana 刺激果實幾丁質(zhì)酶、葡聚糖酶和 POD 誘導(dǎo)抗性，并刺激果實幾丁質(zhì)酶、 ?1,3葡聚糖酶 分泌 ?1,3葡聚糖酶 柚子 柑橘 C. oleophila 誘導(dǎo)抗性，并刺激果實乙烯、 PAL, 幾丁質(zhì)酶、 ?1,3葡聚糖酶、積累植保素等 刺激果實硫還原蛋白基因表達 刺激幾丁質(zhì)酶 cDNA 的表達 刺激 ?1,3內(nèi)葡聚糖酶基因表達 草莓 出 芽短梗霉 誘導(dǎo)抗性 櫻桃 番茄 膜 醭畢赤酵母 刺激果實 POD，降低 CAT 和 SOD，提高總蛋白，增強 33和 47kDa 蛋白 刺激果實幾丁質(zhì)酶、 ?1,3葡聚糖酶 桃 、梨、棗、蘋果 羅倫隱球酵母 誘導(dǎo)果實抗性；刺激果實幾丁質(zhì)酶、 ?1,3葡聚糖酶、 POD