【正文】 4 重寄生作用 ............................................... 5 胞外活性物質(zhì)的產(chǎn)生 ....................................... 5 誘導(dǎo)抗性 ................................................. 6 抗生作用 ................................................. 6 拮抗菌生理調(diào)控及機(jī)理的研究 ..................................... 7 逆境培養(yǎng) ................................................. 7 拮抗 物質(zhì)的 分泌 和 積累 ..................................... 8 基因工程技術(shù) 的應(yīng)用 ....................................... 8 本課題研究目的 ................................................. 8 應(yīng)用前景和學(xué)術(shù)價(jià)值 ............................................. 9 第二章 海洋酵母 R. paludigenum 對(duì)果實(shí)采后真菌病害抑制效果研究 ..... 10 前言 .......................................................... 10 實(shí)驗(yàn)材料和方法 ................................................ 10 主要儀器 ................................................ 10 拮抗菌及其培養(yǎng) ........................................... 6 哈爾濱工業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 目錄 4 病原菌培養(yǎng)和孢子懸浮液的制備 ............................. 7 試劑 ..................................................... 7 果實(shí)選擇與預(yù)處理 ......................................... 7 幾丁質(zhì)對(duì) R. paludigenum 生防效果的影響 ..................... 7 數(shù)據(jù)處理分析與作圖 ....................................... 7 結(jié)果 ........................................................... 8 不同濃度幾丁質(zhì)對(duì) R. paludigenum 生防效力的影響 ............. 8 幾丁質(zhì)誘導(dǎo)后不同濃度 R. paludigenum 酵母的生防效果 ........ 10 不同培養(yǎng)時(shí)間對(duì)幾丁質(zhì)誘導(dǎo)下 R. paludigenum 生防效力的影響 .. 10 幾丁質(zhì)與 NaCl結(jié)合誘導(dǎo)對(duì) R. paludigenum 生防效力的影響 ..... 10 討論 .......................................................... 20 第三章 海洋酵母 R. paludigenum 對(duì)果實(shí)采后真菌病害抑制機(jī)理研究 ..... 12 前言 .......................................................... 12 實(shí)驗(yàn)材料和方法 ................................................ 12 主要儀器 ................................................ 12 拮抗菌及其培養(yǎng) .......................................... 13 病原菌培養(yǎng)和孢子懸浮液的制備 ............................ 13 果實(shí)選擇與預(yù)處理 ........................................ 13 幾丁質(zhì)對(duì) R. paludigenum 生防機(jī)理的影響 .................... 13 數(shù)據(jù)處理分析與作圖 ...................................... 13 結(jié)果 .......................................................... 14 幾丁質(zhì)對(duì) R. paludigenum 在果實(shí)傷口處生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)的影響 ........ 14 幾丁質(zhì)處理后 R. paludigenum 對(duì)果實(shí)誘導(dǎo)抗性的影響 .......... 15 幾丁質(zhì)處理后 R. paludigenum 發(fā)酵上清液的抑菌效果 .......... 16 幾丁質(zhì)培養(yǎng)后 R. paludigenum 對(duì)果實(shí) POD 酶活性的影響 ....... 17 討論 .......................................................... 18 第四章 結(jié)果 與 展望 ........................................... 19 本論文的主要研究結(jié)果 .......................................... 19 本實(shí)驗(yàn)的后續(xù)研究及展望 ........................................ 19 致謝 ...................................................... 32 參考文獻(xiàn) ................................................... 33 哈爾濱工業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 目錄 5 附 錄 ...................................................... 37 哈爾濱工業(yè)大學(xué) 工學(xué) 學(xué)士學(xué)位論文 第一章 文獻(xiàn)綜述 1 第一章 文獻(xiàn)綜述 我國水果產(chǎn)業(yè) 發(fā)展概述 水果是維生素、礦物質(zhì)和膳 食纖維的重要來源，是人們維持身體健康，增進(jìn)營養(yǎng)必不可少的主要食品 ， 是世界上僅次于糧食的農(nóng)產(chǎn)品 。 ?? . 正文 內(nèi)容為 小四 字 體，行距 ，中文為宋體，英文為 Times New Roman，下同 果蔬采后病害的侵染研究 由真菌病害引起的果實(shí)采后的腐爛變質(zhì)是導(dǎo)致水果大量損失的主要原因之一。 ?? . 采后病原真菌的侵染方式 采后病原真菌主要通過 3 種途徑或方式入侵果實(shí)： (1)通過機(jī)械傷或蟲害等造成的傷口； (2)通過自然開放的皮孔、氣孔、果實(shí)和花梗結(jié)合部位； (3)通 過分泌寄主細(xì)胞壁水解酶等直接突破果實(shí)表皮的防御機(jī)制（ Prusky 和Lichter, 20xx）。病原菌孢子一旦接觸傷口組織，侵染就開始了 （ Janisiewicz和 Korsten, 20xx； Prusky 和 Lichter, 20xx） 。 引用的參考文獻(xiàn)多于 1 篇時(shí)，按照論文發(fā)表時(shí)間的先后次序時(shí)行引用 采后病原真菌的致病機(jī)理 采后病原真 菌具有眾多而且復(fù)雜的致病機(jī)理，但其最終目的都是成功的侵染寄主。 ?? 致病菌酸化果實(shí)組織 Pseudomonas expansum、 P. digitatm 和 P. italicum 等酸性病原真菌能產(chǎn)生檸檬酸和葡萄糖酸等有機(jī)酸，使寄主果實(shí)組織發(fā)生酸化，進(jìn)而促進(jìn)病原菌致病因子，如 PG 基因（ pepgl）的表達(dá)（ Prusky et al., 20xx）。 致病因子 CAT 物種拉丁名第一次出現(xiàn)屬名寫出全稱，隨后用其縮寫 章 節(jié)， 小二黑體居中 ，下同 二級(jí)標(biāo)題， 小三黑體 ，下同 三級(jí)標(biāo)題，四號(hào) 黑體 ，下同 四級(jí)標(biāo)題，小四號(hào) 黑體 ，下同 哈爾濱工業(yè)大學(xué) 工學(xué) 學(xué)士學(xué)位論文 第一章 文獻(xiàn)綜述 2 活性氧（ Reactive Oxygen Species， ROS）在植物和微生物相互作用過程中具有重要作用（ Torres et al., 20xx)。最近，中科院植物所 Qin 等 （ 20xx）利用蛋白組學(xué)技術(shù)發(fā)現(xiàn)， ?? 。 病原菌破壞植物自身防御機(jī)制 植物在遭到病原菌侵染時(shí)， 通過體內(nèi)木質(zhì)素和羥脯氨酸糖的沉積，植物抗菌素的積累，蛋白質(zhì)酶抑制劑和溶菌酶的合成來增強(qiáng)細(xì)胞壁的保衛(wèi)反應(yīng)。 ?? 果蔬采后病害的控制方法 果蔬貯藏保鮮是果蔬生產(chǎn)減損、保值和增值的關(guān)鍵因素。 ?? 。 化學(xué)殺菌劑的使用 目前，化學(xué)殺菌劑是防治果蔬采后真菌病害的主要手段之一。 ?? 。 果實(shí)采后病害 物理 防治 果蔬采后病害防治物理方法主要有：熱處理；低溫冷藏 ； 微波處理；氣調(diào)；輻射處理；低壓處理。低溫冷藏技術(shù)已經(jīng)在部分地區(qū)得到實(shí)際運(yùn)用，熱殺菌和輻照殺菌也是目前報(bào)道比較多的方法。 ?? 。 果 實(shí)采后 病害 生物防治 從可持續(xù)發(fā)展的角度出發(fā)，開發(fā)新型、高效且安全的有機(jī)、綠色的保鮮劑具有重大的社會(huì)意義和廣闊的應(yīng)用前景。 ?? 。 采后拮抗酵母作用機(jī)制 根據(jù)已有的研究結(jié)果顯示，微生物對(duì)病原菌有直接作用和間接作用兩種方式，直接作用包括抗生作用和重寄生作用，間接作用包括營養(yǎng)和空間的競(jìng)爭(zhēng)，胞外活性物質(zhì)的產(chǎn)生和誘導(dǎo)抗性等。 ?? 營養(yǎng)和空間的競(jìng)爭(zhēng) 為了抑制病原菌的侵染 , 拮抗菌必須在病原菌到達(dá)以前或到達(dá)以后的很短時(shí)間內(nèi)在果實(shí)表面侵染部位占據(jù)優(yōu)勢(shì)。 ?? 。 非共知的英文縮寫在文中第一次出現(xiàn)時(shí)需要寫出全稱，并給出中文意思 哈爾濱工業(yè)大學(xué) 工學(xué) 學(xué)士學(xué)位論文 第一章 文獻(xiàn)綜述 3 重寄生作用 許多酵母拮抗菌可以分泌胞外 水解酶（幾丁酶， β1,3葡聚糖酶等），從而分解病原菌的細(xì)胞壁或菌絲體。 ?? 。 胞外活性物質(zhì)的產(chǎn)生 一些研究結(jié)果顯示，拮抗菌與病原菌互作時(shí) , 在果實(shí)傷口部位生長(zhǎng)的酵母細(xì)胞外圍有大量的新生物質(zhì)。這些胞外活性物質(zhì)可能參與了拮抗菌與病原菌之間的相互作用（ 表 11）。 表 11 主要產(chǎn)胞外物質(zhì)菌株 誘導(dǎo)抗性 近 5 年來，拮抗 菌 誘導(dǎo)采后果實(shí)抗性 成為了生物防治的研究熱點(diǎn) 。 ?? 。 抗生作用 通過拮抗菌產(chǎn)生抗生素抑制病原菌作用是人們最早發(fā)現(xiàn)的一種拮抗機(jī)理，也是大多數(shù)拮抗細(xì)菌最主要的機(jī)制之一（表 ）（ Janisiewicz and Roitman, 1988。 Janisiewicz et al., 1991）。 ?? 。 抗生素名稱 產(chǎn)生菌株 針對(duì) 病原菌 蒿屬香豆素、東莨菪亭 無名假絲酵母 (C. famata) 指狀青霉 毒性蛋白 (killer protein) 畢赤酵母屬 (Pichia sp.) 抗細(xì)菌物質(zhì) 羅倫隱球酵母 （ C. laurentii） 熒光假單胞菌、 Staphylococcus aureus 揮發(fā)性物質(zhì) 乳酸克魯維酵母 (Kluyveromyces lactis) 擴(kuò)展青霉 圖表在文中一定要有引用，且圖表緊隨文字描述之后 五號(hào)宋體加粗居中 三線表 哈爾濱工業(yè)大學(xué) 工學(xué) 學(xué)士學(xué)位論文 第一章 文獻(xiàn)綜述 4 表 12 采后拮抗 菌 對(duì)果實(shí)抗性的誘導(dǎo)及對(duì)抗性相關(guān)反應(yīng)的刺激 果實(shí) 拮抗菌 備注 蘋果 出芽短梗霉 C. saitoana 刺激果實(shí)幾丁質(zhì)酶、葡聚糖酶和 POD 誘導(dǎo)抗性，并刺激果實(shí)幾丁質(zhì)酶、 ?1,3葡聚糖酶 分泌 ?1,3葡聚糖酶 柚子 柑橘 C. oleophila 誘導(dǎo)抗性，并刺激果實(shí)乙烯、 PAL, 幾丁質(zhì)酶、 ?1,3葡聚糖酶、積累植保素等 刺激果實(shí)硫還原蛋白基因表達(dá) 刺激幾丁質(zhì)酶 cDNA 的表達(dá) 刺激 ?1,3內(nèi)葡聚糖酶基因表達(dá) 草莓 出 芽短梗霉 誘導(dǎo)抗性 櫻桃 番茄 膜 醭畢赤酵母 刺激果實(shí) POD，降低 CAT 和 SOD，提高總蛋白，增強(qiáng) 33和 47kDa 蛋白 刺激果實(shí)幾丁質(zhì)酶、 ?1,3葡聚糖酶 桃 、梨、棗、蘋果 羅倫隱球酵母 誘導(dǎo)果實(shí)抗性；刺激果實(shí)幾丁質(zhì)酶、 ?1,3葡聚糖酶、 POD