【文章內容簡介】 送是否由受體介導。為了解決這個問題 ,，我們首先分析了用 Alexa555標記 siRNA / rHDL 納米粒處理的小鼠器官 (圖 W2)。 rHDL 納米粒在肝臟中的吸收最高，而在大腦、心臟、肺、腎、或脾中吸收很少。靜脈注射或腹腔注射 rHDL / Alexa555后，腫瘤組織對 rHDL納米粒的吸收無顯著差異。 用該方法進行長期治療實驗之前，我們下一個驗證 STAT3 siRNA 偶聯到rHDL 納米顆粒 (siRNA / rHDL)在體內基因沉默的有效性。 STAT3 siRNA 的有效性首先在體外 SKOV3細胞上測試 (圖 W3A)，與對照組 siRNA 相比， 5μ g 的STAT3 siRNA 導致 STAT3蛋白表達超過 80%的減少。接下來，檢測在體內沉默STAT3基因的有效劑量。在 SKOV3ip1小鼠模型中我們注射 STAT3 siRNA /rHDL，劑量范圍從 。第四天，單劑量注射 ，我們發(fā)現降低了 88% STAT3蛋白水平 (圖 W3B)，在第 6天，蛋白表達有些回升。根據這個實驗，我們在后續(xù)實驗中使用 。另一個關于癌癥生長和轉移的關鍵基因， FAK 也具有類似的結果 (圖 W3C)。在 SKOV3ip1小鼠模型中單劑量注射 FAK siRNA /rHDL 納米粒 4天后， FAK 水平降低了 87% 。 基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 Figure delivery of siRNA using rHDL nanoparticles. (A) Uptake of Alexa555labeled siRNA/rHDL in SKOV3ip1 tumors. A single IV or IP injection of mg/kg of Alexa555 labeled or mg/kg of IV and IP injection of untagged siRNA/rHDL was administered in mice bearing SKOV3ip1 tumors, and 48 hours later, tumors were harvested and counterstained with Hoechst (blue), and siRNA (red) uptake was assessed with fluorescence microscopy. The Hamp。E image shows tumor histologic diagnosis. The adjacent graph shows percent Alexa555positive cells. (B)In vivo efficacy of STAT3 siRNA/rHDL in chemosensitive (HeyA8 and SKOV3ip1) and chemoresistant (HeyA8MDR) mouse models of ovarian carcinoma. *P .05 pared with controls. **P .05 pared with controls as well as docetaxel alone. (C)In vivo efficacy of STAT3 siRNA/rHDL in colorectal cancer model of liver metastases (HCT116). *P .05 pared with control siRNA/rHDL, **P .05 pared with STAT3 or oxaliplatin vivoefficacy of FAK siRNA/rHDL in the SKOV3ip1 ovarian cancer model.*P .05 pared with controls. **P .05 pared with controls as well as docetaxel alone. Error bars, SEM 基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 STAT3 或 FAK 基因沉默 對 腫瘤的生長和轉移的影響 體內成功沉默 FAK 或 STAT3基因后 (圖 W3B），我們接下來測試了這種是否用多烯紫杉醇化療藥方法的治療有效性。我們首先用 STAT3 siRNA / rHDL 靶向STAT3(圖 2 B)。在三個原位卵巢癌小鼠模型中用單獨 STAT3 siRNA / rHDL 或偶聯多烯紫杉醇進行治療。在 HeyA8 模型中，單獨給 STAT3 siRNA / rHDL 或多烯紫杉醇減少了的 62%的腫瘤重量 (P ,兩者 )。與對照組比較， STAT3 siRNA / rHDL 和多烯紫杉醇的聯合治療使腫瘤重量減少的最多 (92%， P )。在SKOV3ip1模型中結果類似 (圖 2 B)。另外，當 STAT3 siRNA / rHDL 有無多烯紫杉醇處理小鼠， HeyA8 和 SKOV3ip1卵巢癌模型中證實了腫瘤結數量的劇減。 (圖W4A) 考慮到 STAT3的耐藥性，我們還進行了紫杉醇耐藥 HeyA8MDR 模型實驗 (圖2 B)。正如預期，多烯紫杉醇對腫瘤的生長無顯著影響。 STAT3 siRNA / rHDL 單藥療法使腫瘤生長減少了 76%(P)。多烯紫杉醇和 STAT3 siRNA / rHDL 聯合療法使腫瘤細胞的增長減低的更多 (比起對照組， 91%， P ；比起多烯紫杉醇， 89%， P )。腫瘤節(jié)數量也有類似的效果（圖 2）。我們在每一個治療組的動物的局部轉移頻率進行了分析。相比于對照組和多烯紫杉醇單藥療法， STAT3 siRNA / rHDL 是否偶聯多烯紫杉醇都能顯著降低上腹部和薄壁肝組織的轉移。 接下來，我們研究在轉移性結直腸癌小鼠模型（ HCT116 ）研究 STAT3沉默基因的治療效果 ，該模型使 SR B1表達（圖 2C）。腫瘤細胞注射到脾臟后，轉移擴散到肝臟。 STAT3 siRNA / rHDL 單獨治療導致在腫瘤的重量減少 79％ （ P ） 。對于這些實驗，我們常用細胞毒性，奧沙利鉑，偶聯 STAT3 siRNA / rHDL。奧沙利鉑降低 55 ％的腫瘤生長（ P ）。與對照組相比，奧沙利鉑和 STAT3 siRNA / rHDL 偶聯治療可使腫瘤重量（ 96 ％， P ）和肝臟中轉移損壞數目（ 86％ ， P ）顯著減少。為了評估 rHDL 納米粒的安全性，我們評估用 rHDL 納米粒處理小鼠的幾個參數（圖 W5 ） 。在兩個不同治療組中，動物體重或肝功能測試（ AST 和 ALT 比值）沒有顯著差異（圖 W5 ， A基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 和 B ）。與對照組相比，治療結果顯示沒有顯著變化后，多個正常器官用蘇木精和伊紅（ H ＆ E ）染色（圖 W5C ） 為了測試 rHDL 納米粒對其他靶點的效用潛力 ,我們進行了 FAK siRNA / rHDL 實驗。我們在 SKOV3ip1原位卵巢癌模型中用 FAK siRNA / rHDL 納米粒靶向 FAK(圖 2 C)。 FAK 或多烯紫杉醇單藥治療可使腫瘤重量減少 62%和 74%(兩者 P )。聯合治療顯著減少腫瘤重量 (96%， P )，腫瘤節(jié)的數量 (74%， P )?？?rHDL 納米粒和對照 siRNA / rHDL 處理的小鼠之間沒有顯著差異 。 STAT3 靶向 腫瘤微環(huán)境的 影響 為了了解 STAT3 / rHDL 的生物效應，在藥物敏感的 (SKOV3ip1)和藥物耐藥(HeyA8MDR)卵巢癌模型中進行一系列的體內體外實驗。在 SKOV3ip1卵巢癌模型中 (圖 3), STAT3基因沉默減少 26%細胞增殖 (P )，而多烯紫杉醇抑制 30%腫瘤細胞增殖 (P )。與對照組比較， STAT3 siRNA / rHDL 和多烯紫杉醇聯合治療可抑制 48%腫瘤細胞增殖 (P )(圖 3)。在 HeyA8MDR卵巢