【正文】 p1細胞在添加 15%胎牛血清和 %硫酸慶大霉素的 RPMI1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。此外， rHDL 納米粒子的ζ電位使用電位粒度分析儀檢測 。然后，脂類混合物（膽固醇 [ C ] /膽固醇油酸 [ CE ] /蛋黃卵磷脂 [PC]，摩爾比的1:5::115 ）在氮氣流中干燥。雖然 STAT3可以在許多實體瘤里激活，但是它在正常組織中表達，并且參與許多正常細胞過程。 SR B1受體主要在肝臟中的表達，也在腎上腺或正常卵巢組織也較小程度表達。關于內源性， HDL納米粒是完全可生物降解的，并且也無引起免疫反應的相關報道。這種新型技術可以作為新型癌癥治療方法的基礎?；谥鞍准{米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向 遞送方法研究 摘要 RNA干擾作為 一種 治療途徑尤其是惡性腫瘤的治療具有巨大潛力。 介紹 RNA干擾（ RNAi） 逐漸被認為是一種 潛在 ，高 效的治療途徑。此外，眾所周知， HDL納米粒可以逃避網(wǎng)狀內皮系統(tǒng)的吸收，比大多數(shù)藥物制劑或 其他脂蛋白，他們在循環(huán)中表現(xiàn)出更長的滯基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 留時間。然而，在惡性腫瘤細胞中 SR B1非常顯著表達。因此，使用小分子抑制劑或其他非特異性靶向 STAT3的手段可能會導致許多不必要的副作用，因此需要有效途徑限制毒性。 5mg 的 siRNA 用 25μ g 低聚賴氨酸（平均分子量基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 為 50020xx ）在 30℃預先孵育 30分鐘，然后加入到脂質成分中。簡單地說， 1ml 的納米粒加入 1ml 的比色皿中作 zeta 電勢檢測 。 HeyA8MDR 細胞在添加有15%的 FBS 和 300 ng / ml 紫杉醇以及 %硫酸慶大霉素的 RPMI 1640培養(yǎng)基培養(yǎng)。 ），和一個非定標性的控制序列（靶序列的 539。根據(jù)廠家的建議使用RNAiFect 轉染試劑 ,該細胞置于一式三份含 STAT3( g)或對照 siRNA( g)的 10厘米細胞培養(yǎng)板。 基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 蛋白質印跡分析 用改良放射免疫沉淀裂解緩沖液制備細胞裂解液。為了定量微血管密度，細胞增殖指數(shù) (ki 67)和 半胱氨酸蛋白酶 3清除率 ， 5個隨機區(qū)域每個腫瘤放大 100倍進行研究 。 熒光染色 取新鮮冰凍得原位卵巢癌模型（ SKOV3ip1 ）的腫瘤組織 ，置于丙酮中，用 PBS 洗滌，并用 Hoechst （ 1:10,000 ）復染。約 HeyA8模型 3周后或 SKOV3ip1和 HEYA8 MDR 5周后，解剖小鼠，收集腫瘤 。我們使用 SPSS 和GraphPadPrism 軟件對所有結果進行 處。因為樣品儲存兩周并再次透析后 siRNA 沒有從 rHDL 損失。熒光標記 (Alexa555)siRNA 被包入到 rHDL 納米粒子，并進行 IV 或 IP(圖 2)。接下來，檢測在體內沉默STAT3基因的有效劑量。我們首先用 STAT3 siRNA / rHDL 靶向STAT3(圖 2 B)。 STAT3 siRNA / rHDL 單藥療法使腫瘤生長減少了 76%(P)。對于這些實驗，我們常用細胞毒性，奧沙利鉑，偶聯(lián) STAT3 siRNA / rHDL。聯(lián)合治療顯著減少腫瘤重量 (96%， P )，腫瘤節(jié)的數(shù)量 (74%， P )。在 SKOV3ip1模型 ,STAT3 siRNA / rHDL 或多烯紫杉醇單藥治療 在 MVD(圖 3)產生 66%至 69%的降低 (P )。這兩組間有 460個基因表達差異。 STAT3沉默用免疫印跡分析證實 (圖 W3A)。為了克服這些障礙 ,選擇性生物相容性的運載系統(tǒng)是必要的。在目前研究中， rHDL 納米粒的吸收主要局限于腫瘤和肝。減少血管生成的生物效應， 繼發(fā)于腫瘤細胞的 STAT3沉默，這點已經得到支持，是通過 STAT3激活劑來調節(jié)血管內皮生長因子的表達。這個遞送方法不僅高效的，而且具有選擇性和生物相容性。 FAK siRNA / rHDL 治療方法具有高度腫瘤特異性，可以顯著抑制腫瘤的生長和轉移并且對其他器官無明顯副作用。即使 STAT3被廣泛認為是一個重要的癌癥啟動子，傳統(tǒng)治療方法因其 靶向性受到的限制。我們的數(shù)據(jù)表明，與正常組織相比，SRB1受體在腫瘤細胞中的表達增加 。生物效果是通過降低腫瘤細胞增殖，減少降低血管生成，降低細胞生存率來評估。在 HeyA8MDR 模型中也有類似的結果 (數(shù)據(jù)未顯示 )。與對照組 (P )相比， STAT3 siRNA / rHDL 和多烯紫杉醇的聯(lián)合治療可增加30倍的腫瘤細胞凋亡。對照組 比較， STAT3 siRNA / rHDL 和多烯紫杉醇偶聯(lián)治療可顯著降低細胞增殖 (39%， P ）。我們在 SKOV3ip1原位卵巢癌模型中用 FAK siRNA / rHDL 納米粒靶向 FAK(圖 2 C)。腫瘤細胞注射到脾臟后，轉移擴散到肝臟。 (圖W4A) 考慮到 STAT3的耐藥性，我們還進行了紫杉醇耐藥 HeyA8MDR 模型實驗 (圖2 B)。 基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 Figure delivery of siRNA using rHDL nanoparticles. (A) Uptake of Alexa555labeled siRNA/rHDL in SKOV3ip1 tumors. A single IV or IP injection of mg/kg of Alexa555 labeled or mg/kg of IV and IP injection of untagged siRNA/rHDL was administered in mice bearing SKOV3ip1 tumors, and 48 hours later, tumors were harvested and counterstained with Hoechst (blue), and siRNA (red) uptake was assessed with fluorescence microscopy. The Hamp。 用該方法進行長期治療實驗之前，我們下一個驗證 STAT3 siRNA 偶聯(lián)到rHDL 納米顆粒 (siRNA / rHDL)在體內基因沉默的有效性。在正常 的組織里，只有肝臟 SRB1高度表達，而其他組織很少表達。 rHDL 納米粒具有強大的有效載荷承載能力（最高至 4mg siRNA /ml)。在非參數(shù)值中 ,連續(xù)變量使用曼 懷氏等級和檢驗或秩和檢驗 (所有組 )進行比較。適合的腫瘤細胞來源于卵巢癌小鼠模型（ HeyA8， SKOV3ip1和 HeyA8 MDR ）用腹腔注射接種。 基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 siRNA 選擇性 遞送 SKOV3ip1雌性裸鼠用 （每組 n = 3時）靜脈注射或腹腔注射 。流式細胞儀分析之前的樣品。肌動蛋白作為一個內源性對照。 RNA 通過提取 (氯仿 ),沉淀 (異丙醇 )和純化 (75%乙醇 )。 ） ，粘著斑激酶（靶序列 539。本篇文章中所用到所有細胞株都是德克薩斯大學 MD 安德森癌癥中心的，通過表征細胞線芯的研究得到認證。 rHDL/靶向 siRNA 溶液用 ％的生理鹽水稀釋到為。簡單地說，載脂蛋白 AI ，是 rHDL 納米粒的主要核蛋白，在生產蛋白過程中用質粒載體進行分離和純化。激活 STAT3是惡性腫瘤轉化和發(fā)展（例 如，細胞增殖，分化和存活）的關鍵過程。 為了研究 siRNA靶向輸送途徑，一些腫瘤細胞受體已被獲知。 HDL在膽固醇逆轉中起著舉足輕重的作用，通過促進外周細胞多余膽固醇返回到肝臟進行消除（膽汁排泄或在肝腸循環(huán)使用）。這些數(shù)據(jù)表明， rHDL納米粒是一種新型、高效的 siRNA載體，因此。然而，