【正文】 胞系測試證實了 SRB1的高水平表達(dá)。在 SKOV3ip1小鼠模型中單劑量注射 FAK siRNA /rHDL 納米粒 4天后， FAK 水平降低了 87% 。 接下來，我們研究在轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌小鼠模型（ HCT116 ）研究 STAT3沉默基因的治療效果 ，該模型使 SR B1表達(dá)（圖 2C）。在 HeyA8MDR卵巢癌模型中 (圖W6)，就多烯 紫杉醇處理對于細(xì)胞增殖就沒有效果， STAT3 siRNA / rHDL 單藥可減少 19%細(xì)胞增殖。這些基因可以作為響應(yīng)靶向 STAT3療法的重要組織標(biāo)記基因。例如， rHDL 核心成分的細(xì)胞攝取通過一個特定的受體 (SRB1)完成。用脂質(zhì)體或小分子抑制劑系統(tǒng)性靶向 FAK 顯示減少腫瘤生長和轉(zhuǎn)移，但是，這種方法并非腫瘤特異性并且可能產(chǎn)生毒性。在腫瘤基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 細(xì)胞中激活 STAT3與血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)的增加是相關(guān)的。到目前為止 ,一些納米粒系統(tǒng)已經(jīng)具有潛在的治療措施，然而 ,由于缺乏組織特異性和體內(nèi)廣泛分布大部分這些系統(tǒng)可能在對正常組織產(chǎn)生毒性。 基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 生物數(shù)據(jù)指出， STAT3沉默后凋亡和修復(fù)是細(xì)胞生存的主要影響，我們重點研究這些途徑的基因 (表 W1)。空 rHDL 納米粒和對照 siRNA / rHDL 處理的小鼠之間沒有顯著差異 。多烯紫杉醇和 STAT3 siRNA / rHDL 聯(lián)合療法使腫瘤細(xì)胞的增長減低的更多 (比起對照組， 91%， P ；比起多烯紫杉醇， 89%， P )。在 SKOV3ip1小鼠模型中我們注射 STAT3 siRNA /rHDL，劑量范圍從 。 基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 SRB1 表達(dá)在腫瘤細(xì)胞 在研究 rHDL 作為 siRNA 的有效遞送系統(tǒng)之前， 我們首先分析了多個細(xì)胞系和人類腫瘤存在的 SRB1受體。 基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 大腸癌轉(zhuǎn)移模型 對于大腸癌轉(zhuǎn)移模型， HCT116細(xì)胞注入雌性裸鼠脾臟（治療組 N = 10）。在人類上皮卵巢腫瘤 (n = 50)在 SBR1的表達(dá)可以用福爾馬林固定石蠟包埋標(biāo)本檢測，這 種方法 源于 德克薩斯大學(xué) MD 安德森癌癥中心 ，是經(jīng)過 機構(gòu)審查委員會批準(zhǔn) 。在微序列分析前， STAT3基因沉默利用蛋白質(zhì)印跡在蛋白質(zhì)水平得到證實。 HCT116細(xì)胞在添加 10%的 FBS 和 %硫酸慶大霉素的改良伊格爾培養(yǎng)基中培養(yǎng)。 低聚賴氨酸 / siRNA 混合物偶聯(lián)脂質(zhì)，分散在 60μ l的 DMSO 和 （ 10mM Tris， KCl， 1mM pH 為 EDTA） 。增加 HDL攝取可使腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生較高增殖率。這個概念根源于 干擾 RNA（例如，小分子干擾 RNA）基因沉默的能力， 傳統(tǒng)治療方法很難靶向這些基因 ，如抗體或小分子抑制劑。這些數(shù)據(jù)表明， rHDL納米粒是一種新型、高效的 siRNA載體，因此。 為了研究 siRNA靶向輸送途徑，一些腫瘤細(xì)胞受體已被獲知。簡單地說，載脂蛋白 AI ，是 rHDL 納米粒的主要核蛋白，在生產(chǎn)蛋白過程中用質(zhì)粒載體進(jìn)行分離和純化。本篇文章中所用到所有細(xì)胞株都是德克薩斯大學(xué) MD 安德森癌癥中心的，通過表征細(xì)胞線芯的研究得到認(rèn)證。 RNA 通過提取 (氯仿 ),沉淀 (異丙醇 )和純化 (75%乙醇 )。流式細(xì)胞儀分析之前的樣品。適合的腫瘤細(xì)胞來源于卵巢癌小鼠模型（ HeyA8， SKOV3ip1和 HeyA8 MDR ）用腹腔注射接種。 rHDL 納米粒具有強大的有效載荷承載能力（最高至 4mg siRNA /ml)。 用該方法進(jìn)行長期治療實驗之前，我們下一個驗證 STAT3 siRNA 偶聯(lián)到rHDL 納米顆粒 (siRNA / rHDL)在體內(nèi)基因沉默的有效性。 (圖W4A) 考慮到 STAT3的耐藥性，我們還進(jìn)行了紫杉醇耐藥 HeyA8MDR 模型實驗 (圖2 B)。我們在 SKOV3ip1原位卵巢癌模型中用 FAK siRNA / rHDL 納米粒靶向 FAK(圖 2 C)。與對照組 (P )相比， STAT3 siRNA / rHDL 和多烯紫杉醇的聯(lián)合治療可增加30倍的腫瘤細(xì)胞凋亡。生物效果是通過降低腫瘤細(xì)胞增殖，減少降低血管生成，降低細(xì)胞生存率來評估。即使 STAT3被廣泛認(rèn)為是一個重要的癌癥啟動子，傳統(tǒng)治療方法因其 靶向性受到的限制。這個遞送方法不僅高效的，而且具有選擇性和生物相容性。在目前研究中， rHDL 納米粒的吸收主要局限于腫瘤和肝。 STAT3沉默用免疫印跡分析證實 (圖 W3A)。在 SKOV3ip1模型 ,STAT3 siRNA / rHDL 或多烯紫杉醇單藥治療 在 MVD(圖 3)產(chǎn)生 66%至 69%的降低 (P )。對于這些實驗，我們常用細(xì)胞毒性，奧沙利鉑，偶聯(lián) STAT3 siRNA / rHDL。我們首先用 STAT3 siRNA / rHDL 靶向STAT3(圖 2 B)。熒光標(biāo)記 (Alexa555)siRNA 被包入到 rHDL 納米粒子，并進(jìn)行 IV 或 IP(圖 2)。我們使用 SPSS 和GraphPadPrism 軟件對所有結(jié)果進(jìn)行 處。 熒光染色 取新鮮冰凍得原位卵巢癌模型（ SKOV3ip1 ）的腫瘤組織 ，置于丙酮中，用 PBS 洗滌，并用 Hoechst （ 1:10,000 ）復(fù)染。 基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 蛋白質(zhì)印跡分析 用改良放射免疫沉淀裂解緩沖液制備細(xì)胞裂解液。 ），和一個非定標(biāo)性的控制序列（靶序列的 539。簡單地說， 1ml 的納米粒加入 1ml 的比色皿中作 zeta 電勢檢測 。因此，使用小分子抑制劑或其他非特異性靶向 STAT3的手段可能會導(dǎo)致許多不必要的副作用，因此需要有效途徑限制毒性。此外，眾所周知， HDL納米?？梢蕴颖芫W(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吸收，比大多數(shù)藥物制劑或 其他脂蛋白，他們在循環(huán)中表現(xiàn)出更長的滯基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 留時間?；谥鞍准{米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向 遞送方法研究 摘要 RNA干擾作為 一種 治療途徑尤其是惡性腫瘤的治療具有巨大潛力。關(guān)于內(nèi)源性， HDL納米粒是完全可生物降解的，并且也無引起免疫反應(yīng)的相關(guān)報道。雖然 STAT3可以在許多實體瘤里激活，但是它在正常組織中表達(dá)，并且參與許多正常細(xì)胞過程。此外， rHDL 納米粒子的ζ電位使用電位粒度分析儀檢測 。CCACCUGGGCCAGUAUUAU 339。平均改變倍數(shù)已經(jīng)報道。 48小時后，處死小鼠，收集腫瘤和器官（腦，心臟，肺，肝，腎，脾）并冷凍。 rHDL 體內(nèi)研究將治療組每 10只小鼠被隨機分配。 Figure of rHDL nanoparticles. (A) Illustrations of rHDL nanoparticle position. (B) Electron micrograph of rHDLnanoparticles containing control siRNA. (C) 基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 Expression of SRB1 in human epithelial ovarian cancer (IHC). (D) mRNA expression of SRB1 in ovarian and colorectal cancer cell lines. 在體內(nèi) rHDL 納米粒的選擇性輸送 比起正常組織，考慮到 SRB1受體在腫瘤細(xì)胞中的高度表達(dá)，我們接下來檢測用 rHDL 納米粒遞送 siRNA 在體內(nèi)的有效性。E image shows tumor histologic diagnosis. The adjacent graph shows percent Alexa55