【正文】 總之，用 rHDL 納米粒系統(tǒng)性遞送 siRNA 為治療人類惡性腫瘤開拓了新的視野。因此，所說的 siRNA 遞送系統(tǒng)對于靶向 STAT3和惡性腫瘤增長促進(jìn)劑是很重要的途徑。這些表達(dá)差異可能有助于避免副作用。 盡管干擾 RNA 是一個高度特定基因沉默的模式 ,源于在體內(nèi)全身輸送的障礙，目前其治 療應(yīng)用受到限制。 Figure of STAT3 silencing on gene expression profile of ovarian cancer cells. (A) STAT3 silencing modulates gene expression of apoptosis related genes. After STAT3 silencing with siRNA (in vitro), microarray analysis was performed. Heat map (A) represents the over all gene expression changes. Analysis of apoptosisrelated (B) genes are shown. (C) Validation of microarray. Apoptosisrelated genes that were differentially expressed between control siRNA and 基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 STAT3 siRNA treatment groups were validated with quantitative realtime RTPCR. Average fold change is presented. Error bars, SEM. 體外 STAT3 沉默對細(xì)胞凋亡的影響 為了確定 STAT3基因沉默是否直接影響腫瘤細(xì)胞的凋亡，在卵巢癌細(xì)胞(SKOV3ip1和 HeyA8MDR)的模型中，我們檢測 STAT3 siRNA 是否含有多烯紫杉醇對細(xì)胞存活的影響 (圖 5)。除此之外，在 HeyA8MDR 模型中，就多烯紫杉醇處理不影響細(xì)胞凋亡，對照組 siRNA / rHDL相比， STAT3 siRNA / rHDL 或 STAT3 siRNA / rHDL 與多烯紫杉醇聯(lián)合治療可大幅增加 (分別為 61%和 76%，兩者 P )凋亡細(xì)胞 (陽性活化型半胱天冬酶 3 )(圖 W6) Figure of rHDLincorporated STAT3 siRNA on tumor microenvironment. Tissues harvested after STAT3 siRNA/rHDL therapy were subjected to immunohistochemistry for markers of proliferation (Ki67), angiogenesis (CD 31), and apoptosis (TUNEL). For the TUNEL stain, five random fields per slide were examined with fluorescence microscopy, and the number of apoptotic bodies and nuclei is reported as average percent apoptotic cells (200 ). Error bars, SEM. 卵巢癌細(xì)胞的 STAT3沉默的組織標(biāo)記 為了識別潛在組織標(biāo)記對 STAT3基因沉默的響應(yīng) ,我們在卵巢癌細(xì)胞對對照和 STAT3 siRNA 進(jìn)行基因組分析 (圖 4， A 和 B)。 為了 確定 STAT3沉默 對 腫瘤相關(guān)血管生成的影響 ,我們從所有四個 實(shí)驗(yàn) 組 取新鮮冷凍腫瘤 組織的 樣品進(jìn)行 CD31染色 實(shí)驗(yàn) (圖 3和 W5)和 檢測 MVD。 FAK 或多烯紫杉醇單藥治療可使腫瘤重量減少 62%和 74%(兩者 P )。 STAT3 siRNA / rHDL 單獨(dú)治療導(dǎo)致在腫瘤的重量減少 79％ （ P ） 。正如預(yù)期，多烯紫杉醇對腫瘤的生長無顯著影響。E image shows tumor histologic diagnosis. The adjacent graph shows percent Alexa555positive cells. (B)In vivo efficacy of STAT3 siRNA/rHDL in chemosensitive (HeyA8 and SKOV3ip1) and chemoresistant (HeyA8MDR) mouse models of ovarian carcinoma. *P .05 pared with controls. **P .05 pared with controls as well as docetaxel alone. (C)In vivo efficacy of STAT3 siRNA/rHDL in colorectal cancer model of liver metastases (HCT116). *P .05 pared with control siRNA/rHDL, **P .05 pared with STAT3 or oxaliplatin vivoefficacy of FAK siRNA/rHDL in the SKOV3ip1 ovarian cancer model.*P .05 pared with controls. **P .05 pared with controls as well as docetaxel alone. Error bars, SEM 基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 STAT3 或 FAK 基因沉默 對 腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移的影響 體內(nèi)成功沉默 FAK 或 STAT3基因后 (圖 W3B），我們接下來測試了這種是否用多烯紫杉醇化療藥方法的治療有效性。 STAT3 siRNA 的有效性首先在體外 SKOV3細(xì)胞上測試 (圖 W3A)，與對照組 siRNA 相比， 5μ g 的STAT3 siRNA 導(dǎo)致 STAT3蛋白表達(dá)超過 80%的減少。 Figure of rHDL nanoparticles. (A) Illustrations of rHDL nanoparticle position. (B) Electron micrograph of rHDLnanoparticles containing control siRNA. (C) 基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 Expression of SRB1 in human epithelial ovarian cancer (IHC). (D) mRNA expression of SRB1 in ovarian and colorectal cancer cell lines. 在體內(nèi) rHDL 納米粒的選擇性輸送 比起正常組織，考慮到 SRB1受體在腫瘤細(xì)胞中的高度表達(dá)，我們接下來檢測用 rHDL 納米粒遞送 siRNA 在體內(nèi)的有效性。此外，含有 siRNA 納米粒是非常穩(wěn)定的。 rHDL 體內(nèi)研究將治療組每 10只小鼠被隨機(jī)分配。小鼠隨機(jī)飼養(yǎng)并在第7天后開始處理。 48小時(shí)后，處死小鼠，收集腫瘤和器官（腦，心臟，肺，肝，腎，脾）并冷凍。 免疫組織化學(xué) 新鮮冷凍部分由 CD31染色 (1:800稀釋）， ki 67染色是在 5μ m厚的福爾馬林固定石蠟包埋標(biāo)本上。平均改變倍數(shù)已經(jīng)報(bào)道。cDNA 通過使用 SuperScriptII 逆轉(zhuǎn)錄酶得到 g 高質(zhì)量的 RNA 微 序列 分析 在 SKOV3細(xì)胞使用 Illumina 平臺得到 cDNA 微序列。CCACCUGGGCCAGUAUUAU 339。簡單地說 ,HeyA8和 SKOV3i