【正文】 此外，其他實體瘤中， FAK 在直腸癌、乳腺癌、卵巢癌、甲狀腺、前列腺癌上過度表達這一點也曾報道過。因此 , 比起其他方法，靶向性遞送系統(tǒng)克服這些障礙更理想。 STAT3基因沉默的程度與兩個模型保持一致。在 SKOV3ip1卵巢癌模型中 (圖 3), STAT3基因沉默減少 26%細胞增殖 (P )，而多烯紫杉醇抑制 30%腫瘤細胞增殖 (P )。我們在每一個治療組的動物的局部轉移頻率進行了分析。根據(jù)這個實驗，我們在后續(xù)實驗中使用 。此外，我們檢測在人類正常器官的 SRB1表達并用 RTPCR分析乳腺癌、直腸癌、胰腺癌和卵巢癌細胞系的表達 (圖 W1)。 4周后，解剖小鼠，收集腫瘤 體內沉默 STAT3或 FAK 基因的有效劑量通過在 SKOV3ip1模型小鼠注入劑量范圍為 ? 測定。 TUNEL 染色 取新鮮冷凍的實驗組 (SKOV3ip1模型 )腫瘤組織部分，通過末端脫氧核苷酸轉移酶介導的脫氧尿苷三磷酸缺口尾部標記進行末端染色，再用 1:10,000的 Hoechst進行復染。 聚合酶鏈反應 分析 反轉錄聚合酶連鎖反應 (RTPCR)可以利用 cDNA 預先形成正常人體器官和癌癥細胞系。 C， 5% CO2/95%的孵箱中。載脂蛋白 A I（ ）溶于 加入到混合物中，終體積用 PBS 調整到 2ml 。因此，考慮到SR B1在 HDL中的作用，我們認為 rHDL納米粒可以作為選擇性輸送的有效載體。雖然 一些 使用脂質體或其它納米粒子的跨膜轉運方法也已經(jīng)報道， 但是因 毒性和其他因素其治療應用受到限制。這里 ,我們證實 rHDL納米粒子促進了 siRNA體內高效遞送。該 rHDL納米粒的組成部分有磷脂酰膽堿，載脂蛋白 A 1 ，膽固醇和膽甾醇酯（圖 1A）。 原料與方法 rHDL 納米粒的制 備和 siRNA 的偶聯(lián) siRNA 偶聯(lián)到 rHDL 納米粒，并儲存在 20176。 細胞系和 培養(yǎng)條件 衍生和源于人體上皮卵巢癌細胞系的 HeyA8 ， SKOV3ip1， HeyA8 MDR細胞系在之前已有研究。分別使用 1: siRNA 和轉染試劑進行轉染，對照 siRNA 和 STAT3 siRNA 組無血清培養(yǎng)基培養(yǎng) 6 h。肌動蛋白或黏著斑蛋白證實相同的負載量 。所有的實驗都是由 MD 安德森癌癥中心機構動物護理和使用 委員會批準。反義寡賴氨酸多肽含有大約 40賴氨酸殘基，這可使 siRNA 偶聯(lián)到 rHDL。 rHDL 納米粒在肝臟中的吸收最高，而在大腦、心臟、肺、腎、或脾中吸收很少。在SKOV3ip1模型中結果類似 (圖 2 B)。在兩個不同治療組中，動物體重或肝功能測試（ AST 和 ALT 比值）沒有顯著差異（圖 W5 ， A基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 和 B ）。因此，我們在SKOV3ip1卵巢癌模型中用 TUNEL 染色法 (圖 3)，在 HeyA8MDR 模型活化型半胱天冬酶染色法 (圖 W6)研究了腫瘤細胞的凋亡效果。 Figure of STAT3 silencing on apoptosis. STAT3 was silenced using STAT3specific siRNA in (A)SKOV3ip1 and (B) HeyA8MDR cells with and without docetaxel treatment, and apoptosis was assessed using flow cytometry (annexin V). Average percent apoptosis (Annexin 基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 V/PE–positive SKOV3 cells) and average percent apoptosis pared with control (annexin V/PE–positive HeyA8MDR cells) are reported. Error bars, SEM 討論 本研究的關鍵發(fā)現(xiàn)就是在體內 rHDL 納米粒能有效地傳遞 siRNA 以沉默基因，這些基因對癌癥的增長和發(fā)育很重要。 STAT3是一個良好的轉錄因子，涉及到腫瘤增殖和轉移的許多關鍵過程。 基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 Figure of SRB1 mRNA in different human ans and tumors using RTPCR. Actin is used as a loading control. 基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 Figure of systemic delivery of fluorescentlabeled siRNA/ control siRNA/rHDL or untagged siRNA/rHDL was injected (IV or IP), and 48 hours later, ans were harvested. Freshfrozen tissues were counterstained with Hoechst, and the level of fluorescentlabeled siRNA (red) was assessed with fluorescent microscopy. Average fluorescence uptake is represented by the graphs. *P .05 pared with untagged siRNA/rHDL. Hamp。此外 ,我們的安全研究表明，對照組 siRNA 相比， STAT3 / rHDL 在小鼠肝臟中吸收沒有任何不良反應。與多烯紫杉醇治療相比， STAT3 siRNA 可增高 41%的細胞凋亡 (P )，這表明在體內凋亡效應的確實受到直接影響 (圖 5A)。同樣 ,在 HeyA8MDR 模型 中，就 多烯紫杉醇 處理對 MVD 的降低沒有影響， 但多烯紫杉醇 和 STAT3 siRNA / rHDL 偶聯(lián)治療可顯著降低 (圖W6)。與對照組相比，奧沙利鉑和 STAT3 siRNA / rHDL 偶聯(lián)治療可使腫瘤重量（ 96 ％， P ）和肝臟中轉移損壞數(shù)目（ 86％ ， P ）顯著減少。在 HeyA8 模型中，單獨給 STAT3 siRNA / rHDL 或多烯紫杉醇減少了的 62%的腫瘤重量 (P ,兩者 )。我們進一步驗證 rHDL納米粒的遞 送是否由受體介導。本研究中所有的數(shù)據(jù)使用雙側分析。每張幻燈片有十個高倍區(qū)域，取平均值。 C 孵育過夜。 ）均購自 SigmaAldrich 公司 ，RNAiFect 轉染試劑按照廠家建議 使用。顆粒明顯可見（放大 50000倍），通過使用 Zeiss 910透射型電子顯微鏡。在卵巢癌患者中， FAK過度表達與侵襲性腫瘤的特征相關，這有助于弱勢細胞生存?；隗w積小，屏蔽疏水核心，受體介導的攝取能力等這些有效特征， HDL納米粒是一種理想的藥物載體。腫瘤細胞通過過度表達清道夫B型 1受體類 (SRB1)受體以清除 HDL(HDL)粒子來維持其高生長水平。 脂蛋白，尤其是 HDL ，是脂質運輸系統(tǒng)的必要成分。信號傳感器和轉錄激活因子 3 [ STAT3 ]都可以介導正常細胞對多種細胞因子和生長因子的反應 。制劑的穩(wěn)定性凝膠排阻色譜中用的 RiboGreen 檢測 。 GCCUCUCUGCA GAAUUCAA 339。 RTPCR 在應用生物系統(tǒng)公司 9500系列中完成，使用條件為之前已作介紹。 Tunel陽性細胞在 10個 200區(qū)域，每組分為 5個部分進行計數(shù)，得到平均值 。收集腫瘤組織，采用蛋白質印跡分析蛋白表達 統(tǒng)計分析 如果呈正態(tài)分布連續(xù)變量可以使用 t 檢驗 (在兩個組 )或方差分析 (所有組 )進行比較。所有的癌癥細