【文章內(nèi)容簡介】 7℃ ， 4 ℃ 不生長 ? pH: 最適 pH為 ? 需氧性 : 需氧性很強， 厭氧條件下生長緩慢 第五十四頁，共一百三十頁。 55 培養(yǎng)特性 在液體培養(yǎng)基中，呈現(xiàn)渾濁，外表形成菌膜，R型菌發(fā)生沉淀。 在固體培養(yǎng)基上的菌落通常為隆起，圓形，稍渾濁，不透明，外表光滑濕潤，傳代之后常出現(xiàn)不圓整、粗糙型菌落，或灰白色半透明或不透明的菌落。 ：菌落中等大小， 12mm圓形，扁平，無色透明的黏性菌落，不易被接種環(huán)挑起。 氯化鈉蔗糖瓊脂：菌落 l2mm，稍隆起，渾濁、無黏性、濕潤、中心綠色的菌落，具有擴散性菌落是本菌的一個生長特點。 伊紅美蘭瓊脂：某些菌株在麥康凱上生長，生長的菌落呈圓形，平坦、半透明或渾濁，略帶紅色。 ％食鹽瓊脂平板： 37℃24h 培養(yǎng)多呈蔓延狀生長，菌落的邊緣不整齊，圓形，隆起，稍渾濁、不透明、外表光滑濕潤。 如培養(yǎng)基中含有膽酸鹽那么能對細菌的蔓延有一定的抑制作用。細菌在生長過程中形成色素。 第五十五頁，共一百三十頁。 生化特性 ? 副溶血性弧菌能分解發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、甘露醇、淀粉和阿拉伯膠糖，產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣。 ? 不能發(fā)酵乳糖、蔗糖、纖維二糖、木糖、衛(wèi)矛醇、肌醇、水楊苷。 ? 產(chǎn)生靛基質(zhì)，液化明膠，復原硝酸鹽為亞硝酸鹽。 ? 過氧化氫酶和卵磷脂酶為陽性，尿素酶為陰性， VP試驗為陰性，不產(chǎn)生硫化氫，能分解淀粉和酪蛋白，甲基紅試驗陽性，對弧菌抑制劑三氨基二異丙基喋啶敏感。 第五十六頁，共一百三十頁。 57 抵抗力 敏感： 淡水等無鹽環(huán)境 不耐熱 對酸敏感 ， 在 2％ 冰醋酸或食醋中立即死亡 ， 對氯 、 碳酸 、 來蘇水等一般化學消毒劑敏感： 對磺胺噻唑 、 氯霉素 、 合霉素敏感 。 耐受： 耐高濃度 NaCl－海水 ， 鹽漬醬菜中存活時間較長； 耐低溫的抵抗力較強 耐青霉素 、 磺胺嘧啶 。 第五十七頁，共一百三十頁。 ? 中毒原因 : 食入了含有 106cfu/g 以上的致病性活菌 和一定量溶血毒素的食品。烹調(diào)時未 燒熟、煮、透 ,或熟制品污染后未再徹 底加熱。 ? 中毒食品 : 副溶血性弧菌食物中毒多發(fā)生在海產(chǎn) 品大量上市時。中毒食品主要是海產(chǎn)品 , 其次為咸菜、熟肉類、禽肉、禽蛋類 , 約有半數(shù)為腌制品。 第五十八頁，共一百三十頁。 ? 中毒的機理：活菌進入腸道侵入黏膜引起腸黏膜的炎癥反響，同時產(chǎn)生 VpTDH，作用于小腸壁的上皮細胞，導致消化道病癥，毒素進一步由腸黏膜受損部位侵入體內(nèi)，與心肌細胞外表受體結(jié)合。該菌食物中毒是致病菌對腸道的侵入和溶血毒素協(xié)同作用所致，是一種混合型食物中毒。 ?中毒病癥：潛伏期一般 1118h。表現(xiàn)為急性胃腸炎病癥。主要病變在十二指腸、空腸和回腸上部。一般病后 35d痊愈，死亡率很低。少數(shù)重癥者出現(xiàn)嚴重腹瀉脫水而虛脫，呼吸困難、血壓下降而休克，如搶救不及時可死亡。 第五十九頁，共一百三十頁。 ?污染途徑 海水、海產(chǎn)品、海鹽、帶菌者是污染源。 ?預防中毒措施 防止食品被污染 最好不食用生或半熟的海產(chǎn)品 食前徹底加熱殺菌 控制細菌繁殖 第六十頁，共一百三十頁。 61 檢驗程序： 副溶血性弧菌的檢驗多采用國標法 (GB/T ) 25g樣品 +3%氯化鈉堿性蛋白胨水 TCBS平板 36177。 1℃ 18h 鏡 檢 三糖鐵試驗 氧化酶試驗 嗜鹽試驗 報告結(jié)果 定性 檢測 36177。 1℃ 24h 36177。 1℃ 24h 36177。 1℃ 6h 科瑪嘉弧菌平板 生化實驗 API 20 E 第六十一頁，共一百三十頁。 62 培養(yǎng)基和試劑 3%氯化鈉堿性蛋白胨水： 增菌用，高鹽 TCBS瓊脂： 科瑪嘉瓊脂： 別離培養(yǎng)用 第六十二頁，共一百三十頁。 63 范圍 ? 本標準規(guī)定了副溶血性弧菌檢驗方法。 ? 本標準適用于動物性水產(chǎn)干制品、腌醉制生食動物性水 產(chǎn)品、即食藻類食品、魚糜制品等 水產(chǎn)食品 和 水產(chǎn)調(diào)味 品 以及 食物中毒樣品 中副溶血性弧菌的檢驗 。 第六十三頁，共一百三十頁。 64 TCBS上的副溶血弧菌菌 科瑪嘉上的副溶血弧菌菌落 第六十四頁，共一百三十頁。 65 初步鑒定 ?％氯化鈉三糖鐵瓊脂：底層 變黃，斜面不變色，有動力， 不產(chǎn)生硫化氫 . ?鏡檢形態(tài)：本菌為 G，可兩端 濃染 ，多形態(tài)，無芽孢。 ?氧化酶試驗： VP為氧化酶陽性。 ?嗜鹽性試驗： 0%不生長 7%旺盛生長 10%不生長 第六十五頁，共一百三十頁。 66 ONPG試驗： 甘露醇試驗： 賴氨酸試驗： MRVP試驗： 生化試驗 第六十六頁，共一百三十頁。 67 結(jié)果 樣品經(jīng)過增菌培養(yǎng) 、別離培養(yǎng)后 ， 根據(jù)形態(tài)觀察 、 生化試驗的結(jié)果判斷是否發(fā)現(xiàn)副溶血性弧菌并報告 。 第六十七頁，共一百三十頁。 IV 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌 ? 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌 (Yersinia enterocolitica)是國際上引起重視的人、畜共患病原菌之一，也是一種非常重要的。 ? 本菌在 ，如在 4℃ 下能存活 18個月。因此，冰箱內(nèi)存放的污染食品對人仍具有感染性。 ? 耶爾森氏菌屬包括 11個種，其中對人有致病性的有三種：小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌、假結(jié)核菌和鼠疫菌。 只有小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌和假結(jié)核菌已確定是食源性病原體 . ? 第六十八頁，共一百三十頁。 ? 短小、卵圓形或桿狀的革蘭氏陰性桿菌 ? 在陳舊培養(yǎng)物呈多形性，普通堿性染料易著色，美藍染色可顯示兩極濃染。 形態(tài)及染色特性 第六十九頁，共一百三十頁。 ? 本菌為需氧和兼性厭氧菌，最適生長溫度 25～ 30℃ 。最適生長 pH為 ～ 。在普通培養(yǎng)基上均能生長，對膽鹽、煌綠、結(jié)晶紫、孔雀綠及氯化鈉均有一定耐受性。 ? 普通瓊脂 ：菌落呈圓形，光滑，稍隆起，透明或半透明 ? 普通肉湯 ：呈均勻渾濁，偶有薄膜或少量沉淀物 ? 麥康凱瓊脂 ：菌落呈圓形，光滑，透明或半透明，略扁平，淡粉色， ? ：菌落呈圓形，光滑，稍突起，略呈淺橘紅色，或淡粉色 生長要求與培養(yǎng)特性 第七十頁，共一百三十頁。 ? 生化特性不穩(wěn)定，培養(yǎng)在 25℃ 和 37℃ 的反響結(jié)果有差異，能發(fā)酵葡萄糖、甘露醇、蔗糖、山梨醇。尿素酶陽性，鳥氨酸脫羧酶陽性， β半乳糖苷酶陽性、 MR試驗陽性，VP試驗 (22℃ )陽性， VP試驗 (37℃ )陰性，不分解乳糖、鼠李糖。苯丙氨酸脫氫酶、細胞色素氧化酶、 H2S陰性，不利用檸檬酸鹽。 生化特性 第七十一頁，共一百三十頁。 ? 本菌對熱敏感， 60℃ 30min， 65℃ 1min即可殺死。牛乳中的耶氏菌通過巴氏滅菌不能完全被殺死。 ? 對低溫有較強的耐受性，在 4℃ 下可活存 18個月，在 20～ 18℃ 冷藏肉的保藏過程中，菌數(shù)明顯減少。 ? 本菌對抗生素的敏感性不定，但對青霉素、紅霉素、先鋒霉素、氨芐青霉素不敏感。 ? 輻射對本菌有一定的殺滅作用。 抵抗力 第七十二頁，共一百三十頁。 該菌可寄生于所有恒溫動物，引起出血性敗血癥 ；該菌有侵犯中胚層性細胞的傾向，一般表現(xiàn)為淋巴腺鼠疫和肺鼠疫的發(fā)生。 ? ：該菌能產(chǎn)生耐熱性腸毒素，但腸毒素的產(chǎn)生僅限于22～ 25℃ ； ? ： Hela細胞感染陽性株多是人類致病常見血清型； ? ：菌接種于 10％小牛血清的組織培養(yǎng)液內(nèi)， 22℃ 培養(yǎng)，菌液渾濁，而 37℃ 培養(yǎng)，細菌凝結(jié)，上層液體透明，即為有毒力的菌株，稱為自凝陽性。 ? ：在 25℃ 生長時不需要鈣的菌株即含 VW抗原。 ? ：耶氏菌病和小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌帶有 41～ 48Mu的質(zhì)粒有關(guān)。 致病因素 第七十三頁，共一百三十頁。 ? 主要原因是食入了具有侵襲力的活菌及其腸毒素食品，尤其是冷藏食品食用前未徹底加熱殺菌，引起中毒。潛伏期 3～ 5d ? 主要病癥是胃腸炎，以小腸、結(jié)腸炎為多見，腹痛，腹瀉多為黏液或水樣便，頭痛，體溫 38～ ℃ 。此外，引起腹膜炎、結(jié)節(jié)性紅斑、反響性關(guān)節(jié)炎、腸系膜淋巴結(jié)炎和敗血癥等。 中毒的原因與病癥 ? 主要通過污染食物 (豬肉、牛肉、牛奶等 )和水源引起感染。 ? 主要存在于乳與乳制品、蛋制品、肉與肉制品、豆腐及其制品、海產(chǎn)品和蔬菜等。據(jù)檢測，豬比其他動物，如牛、羊、雞、鴨、鵝等帶菌率高，豬是此菌的主要宿主。 ?引起中毒的食品及傳播途徑 第七十四頁，共一百三十頁。 ? 防止食品被污染 ? 食前加熱殺菌。 ? 加強衛(wèi)生宣傳。 ? 檢驗方法 ?國標法參看： 食品衛(wèi)生微生物學檢驗小腸結(jié)腸炎 耶爾森氏菌檢驗 (GB/T )。 ?檢驗方法 ?預防中毒措施 第七十五頁，共一百三十頁。 V 志賀氏菌 ?志賀氏菌屬 (Shigella)是人類及靈長類動物細菌性痢疾 (簡稱菌痢 )最為常見的病原菌，俗稱痢疾桿菌 (dysentery bacterium)。 ? 形態(tài)及染色特征： 革蘭氏陰性短小桿菌，無芽孢，無莢膜，有菌毛 第七十六頁，共一百三十頁。 志賀氏菌 生長要求及培養(yǎng)特性 需氧或兼性厭氧菌，對營養(yǎng)要求不高 ? ：菌落呈圓形、微凸、光滑濕潤、無色半透明、邊緣整齊；宋內(nèi)志賀氏菌菌落一般較大，不很透明。 ? ：菌落形態(tài)和沙門氏菌相似，為無色、半透明、中等大或較小的菌落，邊緣整齊、光滑、稍隆起。由于志賀氏菌不產(chǎn)生硫化氫，故在 心不形成黑色。 ? ：呈均勻渾濁生長，無菌膜 第七十七頁，共一百三十頁。 志賀氏菌 生化特性 ? 本菌屬都能分解葡萄糖，產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣，均不分解乳糖 ? 宋內(nèi)志賀氏菌個別菌株緩慢發(fā)酵乳糖 ? 甲基紅試驗陽性， VP試驗陰性，不分解尿素，不產(chǎn)生 H2S，對甘露醇的分解和產(chǎn)生靛基質(zhì)的能力因菌種而異 第七十八頁，共一百三十頁。 ?志賀氏菌 抵抗力 ? 志賀氏菌屬對外界環(huán)境中的各種因素抵抗力不完全一樣。以宋內(nèi)志賀氏菌最強，福氏志賀氏菌次之，痢疾志賀氏菌最弱； ? 志賀氏菌屬對理化因素抵抗力較弱，志賀氏菌屬對酸敏感 ； ? 引起水源型或食物型的爆發(fā)流行； ? 志賀氏菌對各種消毒劑敏感； ? 一般 50℃ 、 15min， 60℃ 、 10min及陽光照射 30min均能殺死志賀氏菌。 第七十九頁，共一百三十頁。 志賀氏菌 致病因素 ? 菌毛的作用使菌黏附于回腸末端和大腸黏膜的上皮細胞，繼而在侵襲蛋白作用下穿人上皮細胞內(nèi)； ? 內(nèi)毒素：志賀氏菌屬中各菌株都有強烈的內(nèi)毒素。內(nèi)毒素作用于腸壁 ? 外毒素：該毒素具有 3種生物活性：①神經(jīng)毒性，②細胞毒性，③腸毒性。 第八十頁，共一百三十頁。 ? ? ? 第八十一頁，共一百三十頁。 ? 引起中毒的食品和傳播途徑 ： 主要是水果、蔬菜、沙拉、涼拌菜、肉類、乳類及其熟食品。 ? 預防中毒措施： 與小腸結(jié)腸炎耶森氏菌食物中毒相同。主要措施包括加強食品衛(wèi)生管理，嚴格執(zhí)行衛(wèi)生制度，加強食品從業(yè)人員的腸道帶菌檢查。 第八十二頁，共一百三十頁。 志賀氏菌 檢驗方法 ? 目前志賀氏菌檢驗 ? 多采用國標法 (GB/T )。 第八十三頁，共一百三十頁。 ? 根據(jù) ?伯杰氏鑒定細菌學手冊 ?，按葡萄球菌的生理化學組成，將葡萄球菌分為金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌 (S. epidermidis)和腐生葡萄球菌 (S. saprophyticus)，其中金葡多為致病性菌，表葡偶爾致病。 ? 金黃色葡萄球菌是人類化膿性感染中最常見的病原菌。可引起局部化膿性感染，如癤、