【文章內(nèi)容簡介】 obar低壓柱色譜，中壓柱色譜，分析用 HPLC，制備用 HPLC。 (二 )根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進(jìn)行別離 第七十七頁，共一百五十七頁。 3)渦流色譜 在線萃取技術(shù)，可以實(shí)現(xiàn)生物樣品的在線處理并可以直接用于分析檢驗(yàn)。 (二 )根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進(jìn)行別離 第七十八頁，共一百五十七頁。 第七十九頁，共一百五十七頁。 物理吸附 化學(xué)吸附 半化學(xué)吸附 (三 ) 根據(jù)物質(zhì)吸附能力差異進(jìn)行別離 第八十頁，共一百五十七頁。 物理吸附：也稱外表吸附 , 由分子間力的相互作 用所引起 。 特點(diǎn)：無選擇性 ， 吸附與解吸可逆 ， 可快速進(jìn)行 ，故在實(shí)際工作中用得最廣 。 如硅膠 、 氧化鋁 。 (三 ) 根據(jù)物質(zhì)吸附能力差異進(jìn)行別離 第八十一頁，共一百五十七頁。 化學(xué)吸附 ：如黃酮等酚酸性物質(zhì)被堿性氧化鋁吸附 ， 或生物堿被酸性硅膠吸附等 。 特點(diǎn)：有選擇性 ， 吸附牢固 ， 有時(shí)不可逆 ， 很少使用 。 半化學(xué)吸附 ：如聚酰胺對黃酮類 、 醌類等化合物之間的氫鍵吸附 ， 力量較弱 ， 介于上述二者之間 。 (三 ) 根據(jù)物質(zhì)吸附能力差異進(jìn)行別離 第八十二頁，共一百五十七頁。 物理吸附的根本規(guī)律 根本要素：吸附劑、被別離物質(zhì)、溶劑 物理吸附原理：吸附與解吸附的循環(huán)往復(fù) (三 ) 根據(jù)物質(zhì)吸附能力差異進(jìn)行別離 第八十三頁，共一百五十七頁。 吸附劑 : 常用的極性吸附劑：硅膠、氧化鋁。適于別離非極性化合物。硅膠顯微酸性，適于別離酸性和中性化合物，別離生物堿時(shí)需在流動相中參加適量的有機(jī)堿；氧化鋁呈堿性，適于別離生物堿等堿性成分，不宜用于別離有機(jī)酸、酚性等酸性成分。 常用的非極性吸附劑：活性炭。適于別離極性化合物。對非極性物質(zhì)具有較強(qiáng)的親和力，在水中對溶質(zhì)表現(xiàn)出強(qiáng)的吸附能力。從活性炭上洗脫被吸附的物質(zhì)時(shí)，溶劑的極性越小，洗脫能力越強(qiáng)。 (三 ) 根據(jù)物質(zhì)吸附能力差異進(jìn)行別離 第八十四頁，共一百五十七頁。 被別離物質(zhì) ?一般化合物的極性按以下官能團(tuán)的順序增強(qiáng)： ?— CH2— CH2— ， — CH2=CH2— ， — OCH3， — COOR， C=O， — CHO， — NH2， — OH， — COOH 物質(zhì)極性強(qiáng)弱的判斷： (三 ) 根據(jù)物質(zhì)吸附能力差異進(jìn)行別離 第八十五頁，共一百五十七頁。 化合物的極性由官能團(tuán)種類、數(shù)目、排列方式等因素決定 (1) 親水性基團(tuán)與極性成正比 ,親脂性基團(tuán)與極性成反比； (2) 游離型化合物極性弱、具親脂性 ,解離型化合物極性強(qiáng)、具親水性； (三 ) 根據(jù)物質(zhì)吸附能力差異進(jìn)行別離 第八十六頁，共一百五十七頁。 第八十七頁，共一百五十七頁。 溶劑的極性 — 依據(jù)介電常數(shù)來決定 介電常數(shù)越大，那么極性越大。一般溶劑的介電常數(shù)按以下順序增大： 環(huán)己烷〔 〕，苯〔 〕，無水乙醚〔 〕，氯仿〔 〕，乙酸乙酯〔 〕，乙醇〔 〕，甲醇〔 〕，水〔 〕 溶劑 (三 ) 根據(jù)物質(zhì)吸附能力差異進(jìn)行別離 第八十八頁，共一百五十七頁。 吸附柱色譜法用于物質(zhì)的別離： 柱層析的根本步驟： 1〕裝柱： (吸附劑的用量為試樣量的 30~60倍〕 2〕加樣 :〔盡量選用極性小的溶劑裝柱〕 3〕洗脫：極性宜逐漸增加 (三 ) 根據(jù)物質(zhì)吸附能力差異進(jìn)行別離 第八十九頁，共一百五十七頁。 第九十頁，共一百五十七頁。 聚酰胺吸附色譜法 聚酰胺的性質(zhì)及吸附原理 不含水的溶劑中，是極性吸附與硅膠原理相似。 別離有兩種原理： 在含水的溶劑中，是氫鍵吸附。 (三 ) 根據(jù)物質(zhì)吸附能力差異進(jìn)行別離 第九十一頁，共一百五十七頁。 在水溶液中，有以下規(guī)律： 1〕形成氫鍵的基團(tuán)的數(shù)目越多，那么吸附能力越強(qiáng)。 (三 ) 根據(jù)物質(zhì)吸附能力差異進(jìn)行別離 第九十二頁，共一百五十七頁。 2〕易形成分子內(nèi)氫鍵者，其在聚酰胺上的吸附相應(yīng)減弱 O H O C O H C O O H H O (三 ) 根據(jù)物質(zhì)吸附能力差異進(jìn)行別離 第九十三頁，共一百五十七頁。 3)分子芳香化程度高者，那么吸附作用增強(qiáng)，反之減弱。 (三 ) 根據(jù)物質(zhì)吸附能力差異進(jìn)行別離 第九十四頁，共一百五十七頁。 洗脫能力由弱至強(qiáng) 水 — 甲醇 — 丙酮 — 氫氧化鈉水溶液 — 甲酰胺 — 甲基甲酰胺 — 尿素水溶液 (三 ) 根據(jù)物質(zhì)吸附能力差異進(jìn)行別離 第九十五頁，共一百五十七頁。 應(yīng)用： A、特別適合于酚類、黃酮類化合物的制備和別離 B、對生物堿、萜類、甾體、糖類、氨基酸等其它極性與非極性化合物的別離也有著廣泛應(yīng)用。 C、用于提取物的脫鞣質(zhì)處理。 (三 ) 根據(jù)物質(zhì)吸附能力差異進(jìn)行別離 第九十六頁，共一百五十七頁。 (三 ) 根據(jù)物質(zhì)吸附能力差異進(jìn)行別離 從某植物中別離得到以下三個(gè)物質(zhì)， 1〕在硅膠、聚酰胺 TLC上，以氯仿 甲醇 丁酮 丙酮 (40： 20： 5：1)展開時(shí)， Rf值的大小比較。 2〕假設(shè)使用聚酰胺柱層別離時(shí)，以不同濃度的甲醇進(jìn)行洗脫，洗脫先后順序。 第九十七頁，共一百五十七頁。 (三 ) 根據(jù)物質(zhì)吸附能力差異進(jìn)行別離 〔 1〕 吸附原理：大孔吸附樹脂是吸附性和分子篩性原理相結(jié)合的別離材料 。 〔 2〕 組成： ※ 非極性型以苯乙烯為母體 ， 二乙烯苯為交聯(lián)劑； ※ 中極性型以 2甲基苯烯酸甲酯為母體 ， 二乙烯苯為交聯(lián)劑 。 大孔吸附樹脂 第九十八頁，共一百五十七頁。 〔 3〕 影響吸附的因素 A、 非極性化合物在水中易被非極性大孔樹脂吸附；極性化合物在水中易被極性大孔樹脂吸附 。 物質(zhì)在溶劑中的溶解度大 ， 樹脂對此物質(zhì)的吸附力就?。环粗痛?。 能與大孔吸附樹脂形成氫鍵的化合物易被吸附 。 (三 ) 根據(jù)物質(zhì)吸附能力差異進(jìn)行別離 第九十九頁，共一百五十七頁。 B、 洗脫劑的極性： 洗脫液 :甲醇 、 乙醇 、 丙酮 、 乙酸乙酯等 。 〔 乙醇 /水 〕 最常用 。 對于非極性大孔吸附樹脂 ， 洗脫液極性越小 ， 洗脫能力越強(qiáng)； 對于中極性的大孔吸附樹脂和極性較強(qiáng)的化合物 ， 洗脫液應(yīng)選用極性較大的溶劑 。 C、 pH的影響 D、 溫度 、 流速等 (三 ) 根據(jù)物質(zhì)吸附能力差異進(jìn)行別離 第一百頁，共一百五十七頁。 〔 4〕應(yīng)用范圍 A、苷類與糖類的別離； B、生物堿的精制； C、多糖、黃酮類、三萜類化合物的別離等。 ※ 本卷須知： A、大孔吸附樹脂使用前需要用乙醇預(yù)處理； B、水溶液上柱，醇梯度洗脫。 (三 ) 根據(jù)物質(zhì)吸附能力差異進(jìn)行別離 第一百零一頁，共一百五十七頁。 (四 ) 根據(jù)物質(zhì)分子大小差異進(jìn)行別離 ? 常用方法 ? 透析法 (dialysis) ? 凝膠濾過法 (gel filtration) ? 超濾法 (ultrafiltration) ? 超速離心法 (ultracentrifugation) ? 膜別離法 (membrane separation) 第一百零二頁，共一百五十七頁。 凝膠濾過法 (gel filtration) 凝膠色譜簡單原理圖 1. 待別離的混合物在色譜床外表 2. 試樣進(jìn)入色譜床，小分子進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，大分子隨溶液流動 3. 大分子物質(zhì)行程短，流出色譜床，小分子物質(zhì)仍在緩慢移動 第一百零三頁，共一百五十七頁。 凝膠濾過法 (gel filtration) 常用凝膠的種類及性質(zhì) 葡聚糖凝膠〔 Sephadex G)系列 :G10, 15, 20, 25, 50, 75, 100, 200…Sephadex G 系列只適于在水中應(yīng)用 羥丙基葡聚糖凝膠〔 Sephadex LH20):Sephadex LH20即能在水中也能在有機(jī)溶劑中以及水組成的混合溶劑中應(yīng)用。 第一百零四頁，共一百五十七頁。 凝膠濾過法 (gel filtration) 常用凝膠的種類及性質(zhì) 羧甲基交聯(lián)葡聚糖凝膠〔 CMSephadex) 二乙氨乙基交聯(lián)葡聚糖凝膠〔 DEAESephadex) 磺丙基交聯(lián)葡聚糖凝膠〔 SPSephadex) 苯胺乙基交聯(lián)葡聚糖凝膠〔 QAESephadex) 丙烯酰胺凝膠〔 BioGel P〕 瓊脂糖凝膠〔 Sepharose BioGel A〕 第一百零五頁，共一百五十七頁。 膜別離技術(shù) (membrane separatione) 根本原理：膜提取別離技術(shù)的應(yīng)用原理近似機(jī)械篩，是以壓力為推動力，實(shí)現(xiàn)溶質(zhì)與溶劑的別離。 類型：按照別離功能分為微濾、超濾、納濾、反滲透 特點(diǎn)：常溫操作，無相變，能耗低。 第一百零六頁，共一百五十七頁。 (五 ) 根據(jù)物質(zhì)解離度差異進(jìn)行別離 ) 天然有機(jī)化合物中，具有酸性、堿性及兩性基團(tuán)分子在水中多呈解離狀態(tài)，據(jù)此可用以下進(jìn)行別離 常用方法 電泳技術(shù) (electrophoretic method) 離子交換法 (ionexchange chromatography) 第一百零七頁，共一百五十七頁。 (五 ) 根據(jù)物質(zhì)解離度差異進(jìn)行別離 ) 1