前列腺癌方面免疫組化基礎(chǔ)知識(編輯修改稿)
2024-10-03 16:44 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ，Nakane(1966)等成功地引入了酶代替熒光色素標記抗體，進行組織細胞內(nèi)抗原或半抗原的定位，開辟了酶標抗體技術(shù)免疫酶細胞化學(xué)之路。 ? 結(jié)合筆者經(jīng)驗，介紹 ICC染色中的主要程序：組織標本的固定、切片、染色原理及步驟、結(jié)果判定及一些進展、特殊應(yīng)用等供讀者參考。 第十五頁，共三十八頁。 第一節(jié) 固定和切片 ? 一、固定 ? 假設(shè)想得到理想的 ICC染色結(jié)果、正確地判斷抗原物質(zhì)在組織細胞內(nèi)的位置，除需有良好酶和抗體外，保持組織細胞內(nèi)抗原物質(zhì)的不動性〔 Immobility〕和免疫活性也是至關(guān)重要的。換言之，如果抗原物質(zhì)在組織細胞間彌散、喪失或失去免疫活性，無論如何努力染色都是徒勞的，所以說固定是 ICC染色中非常重要的一環(huán)。 ICC與其它組織學(xué)技術(shù)不同，除要求保存良好的結(jié)構(gòu)外，還需保存組織抗原的免疫活性。一般認為，新鮮組織能夠最大限度地保存組織抗原的免疫活性，但結(jié)構(gòu)較差，易出現(xiàn)抗原彌散喪失現(xiàn)象。 第十六頁，共三十八頁。 ? Cumming〔 1980〕報告，不固定的組織切片 ICC染色時，環(huán)鳥苷酸含量喪失 80%以上。固定的目的是使構(gòu)成組織細胞成分的蛋白等物質(zhì)不溶于水和有機溶劑，并迅速使組織細胞中各種酶降解、失活，防止組織自溶和抗原彌散，保持組織細胞的完整性和所要檢測物質(zhì)的抗原性。因此迅速充分固定是ICC染色成功的關(guān)鍵一步。用于 ICC的固定劑種類較多，選擇時應(yīng)根據(jù)所要檢測物質(zhì)的抗原性質(zhì)和切片方法以及所用抗體特征等做最佳答案篩選。制片及固定方法見第一章 ，下面介紹兩種近年報道的新方法。 第十七頁，共三十八頁。 ? 1． AMEX〔 Acetone Meth Enzoate Xylene 〕法 ? 是改進的冰凍置換法〔 freeze substitution〕的簡稱，主要用于石蠟包埋標本。 Sato(1986)報告，該法具有同新鮮〔未固定〕組織冰凍切片同樣的抗原保持性和石蠟切片的良好組織結(jié)構(gòu)保存。其機制為：組織在丙酮中固定〔脫水〕，組織細胞內(nèi)水份逐漸被丙酮取代，繼之，用苯甲酸酯取代組織內(nèi)丙酮，經(jīng)二甲苯置換后，石蠟包埋。組織在 20℃ 丙酮內(nèi)過夜亦形成冰晶，所以原方法將組織先置 4℃ 丙酮 20～ 30min，再移入 20℃ 丙酮過夜。實際上組織在 4℃ 丙酮內(nèi)過夜亦可得到同樣效果。如在該固定液內(nèi)參加少量蛋白酶活性阻斷劑，并采用低溶點石蠟包埋等，可獲得更佳染色結(jié)果。 第十八頁，共三十八頁。 微波固定〔 Microwave fixation〕 ? 為近幾年所注目的問題之一。該方法能保持良好的組織結(jié)構(gòu)和抗原性，適于各種切片的酶組化、 ICC以及免疫電鏡等材料固定。其固定機理可能與微波〔頻率1000～ 3000MHz〕具有被水分吸收的性質(zhì)〔通常所用的微波是頻率 2450MHz，波長 12cm〕；生物材料含有大量水份，照射后，溫度升高，分子運動加快，促進固定液向組織內(nèi)滲透，加速與組織成分的反響，短時間內(nèi)到達固定的效果等有關(guān)。經(jīng)微波照射固定的組織，需置相同固定液中，繼續(xù)固定 2～ 6h，室溫。 第十九頁，共三十八頁。 二、切片 ? 光鏡 ICC染色，常用的有冰凍切片和石蠟切片兩種，二者各有其優(yōu)缺點，應(yīng)根據(jù)抗原的性質(zhì)、實驗室條件，合理選擇之。對未知抗原顯示時，最好同時應(yīng)用。冰凍切片為 ICC研究所首選。 第二十頁，共三十八頁。 ? Shi〔 1991〕等報告：微波爐照射的切片，能夠激活局部核內(nèi)抗原活性。其機制不清，可能與高溫、高熱的作用，使核內(nèi) DNA雙鏈解開， DNA、 RNA解離，抗原暴露有關(guān)。其步驟為：將切片脫蠟水洗后，置染色瓶中，參加去離子水或緩沖液至瓶頸處，反復(fù)屢次照射，每次 1min，照射 5～ 10次，每次照射后，補充瓶中蒸發(fā)掉的液體，照射溫度不超過 90～ 95℃ 為宜。此處理后，細胞核染色以蘇木精為佳 第二十一頁，共三十八頁。 第二節(jié) 染色方法 ? 一、本科標抗體法 ? 酶標抗體技術(shù)是通過共價鍵將酶連結(jié)在抗體上，制成酶標抗體，再借酶對底物的特異催化作用，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，于光鏡或電鏡下進行細胞外表及細胞內(nèi)各種抗原成分的定位。 第二十二頁，共三十八頁。 ? 〔一〕酶的種類及特點 ? 從理論上講，用細胞化學(xué)方法能顯示的酶，均可用于標記抗
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