免疫抑制劑姜黃素逆轉(zhuǎn)胰島素抵抗(編輯修改稿)
2024-10-01 20:58 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 0?滋g,電轉(zhuǎn)移儀將蛋白轉(zhuǎn)到PVDF膜。5脫脂奶粉TBST緩沖液洗膜,加一抗,4℃孵育過(guò)夜,TBST緩沖液洗膜,加過(guò)氧化物酶標(biāo)記的IgG抗體(購(gòu)自AmershamUSA),室溫1h,TBST緩沖液洗膜,加ECL1min,暗室顯影2~3min后沖洗膠片。凝膠成像分析系統(tǒng)攝像。2結(jié)果2. 1姜黃素抑制NF?資B的量效和時(shí)效關(guān)系Fao細(xì)胞在10cm2培養(yǎng)皿用10mL在10FBS+DMEM含有高濃度葡萄糖的培養(yǎng)液中培養(yǎng)至80重疊,:劑量關(guān)系用梯度濃度如圖1所示,時(shí)效曲線用30μmol/L。預(yù)處理后接受鼠TNF10nmol/L刺激處理,于20min后用預(yù)冷的FBS終止,并收集細(xì)胞,用于制作蛋白勻漿。用免疫印跡檢測(cè)勻漿內(nèi)I?資?注?琢的水平。如圖1A所示:20μmol/L姜黃素20min預(yù)處理能夠抑制TNF刺激的I?資?注?琢的降解。從姜黃素的時(shí)效關(guān)系圖1B可見(jiàn),姜黃素有效劑量30μmol/L對(duì)NFκB的抑制作用在30~60min時(shí)最強(qiáng)。3. 2姜黃素以逆轉(zhuǎn)肥胖小鼠的胰島素抵抗經(jīng)過(guò)6周姜黃素的治療,小鼠的空腹血糖水平?jīng)]有明顯下降,但空腹胰島素的水平下降約30(圖2),口服葡萄糖耐量曲線的水平也明顯下降(圖2A),曲線下面積的比較有明顯差異(Plt。)。由空腹血糖和胰島素水平計(jì)算的HOMA指數(shù)[用FBS(mmol/L)胰島素(mmol/L)/]也呈明顯降低(Plt。,圖2C),提示小鼠對(duì)胰島素抵抗的水平得到明顯改善。4. 3姜黃素對(duì)循環(huán)細(xì)胞因子的影響Obob小鼠治療6周后的空腹血漿用LincoResearchLuminex試劑盒同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞因子IL1?茁,IL6和TNF?琢的水平。如圖3所示:盡管循環(huán)胰島素的水平明顯下降,但TNF?琢[(177。)pg/mLvs(177。)pg/mL]水平?jīng)]有明顯改變,與之對(duì)應(yīng),循環(huán)中IL1?茁[(177。)pg/mLvs(177。)pg/mL]和IL6[(177。)pg/mLvs(177。)pg/mL]水平明顯被抑制(Plt。)。5. 4姜黃素為胰島素信號(hào)的增效劑經(jīng)胰島素刺激的肝臟組織在液氮下作粉碎并以1TritonX100RAPA(含有全部蛋白酶抑制劑,和蛋白磷酸酶抑制劑)緩沖液在冰點(diǎn)勻漿。經(jīng)全速4℃離心30min取
公司管理相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1