【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 商 瓊脂粉 大豆蛋白胨 細(xì)菌學(xué)蛋白胨 酵母浸膏 牛肉浸膏 葡萄糖 磷酸氫二鉀 鹽酸 蔗糖 氯化鈉 檸檬 酸三 銨 三水合乙酸鈉 酒精 硫酸錳 硫酸鎂 蛋白胨，魚粉 D果糖 乳糖 吐溫 80 營(yíng)養(yǎng)瓊脂 麥芽糖 鄰苯二甲酸氫鉀 月示蛋白胨 胰蛋白胨 酪氨酸 氫氧化鈉 酪蛋白胨 L谷氨酸 ,LGlutamic aicd D泛酸鈣 鹽酸硫胺維生素 B1 核黃素維生素 B2 低聚果糖 蛋氨酸 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 分析純 廣東環(huán)凱微生物科技有限公司 廣東環(huán)凱微生物科技有限公司 廣東環(huán)凱微生物科技有限公司 廣東環(huán)凱微生物科技有限公司 廣東環(huán)凱微生物科技有限公司 天津市 科密歐化學(xué)試劑有限公司 廣東汕頭市西隴化工廠 廣東汕頭市西隴化工廠 廣東汕頭市西隴化工廠 廣東汕頭市西隴化工廠 廣東臺(tái)山粵僑試劑塑料有限公司 廣東臺(tái)山 粵 僑試劑塑料有限公司 廣東臺(tái)山 粵 僑試劑塑料有限公司 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 上海試劑二廠 廣東環(huán)凱微生 物科技有限公司 廣東汕頭市西隴化工廠 上海潤(rùn)捷化學(xué)試劑有限公司 山東隆大生物工程有限公司 上海康潤(rùn)生物科技有限公司 上?？禎?rùn)生物科技有限公司 生工生物工程（上海）有限公司 廣東化學(xué)試劑工程技術(shù)研究開發(fā)中心 上海源吐生物科技有限公司 天津市博迪化工有限公司 天津市博迪化工有限公司 成都科龍化工試劑廠 成都科龍化工試劑廠 實(shí)驗(yàn)主要儀器 表 22 實(shí)驗(yàn)主要儀器、設(shè)備 設(shè)備名稱 型號(hào) 生產(chǎn)廠商 水浴恒溫箱 電子天平 電子分析天平 光柵分光光度計(jì) 雙目生物顯微鏡 實(shí)驗(yàn)室 PH 計(jì) 垂直流超凈工作臺(tái) 干燥 箱 生化培養(yǎng)箱 恒溫培養(yǎng)振蕩器 電冰箱 立式壓力蒸汽消毒器 數(shù)碼顯微鏡 ZHWY— 110X T— 200 AB104— N 722 E220LED PHS— 25 ZHJH1112C 101— 3 型 ZSP1270 ZHWH— 2112C 13C— 127TW 銀州牌 628B— 2 型 DM85 上海智城分析儀器制造有限公司 美國雙杰兄弟（集團(tuán)）有限公司 Mettier— Toledo Group 上海精密科學(xué)儀器有限公司 麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司 上海理達(dá)儀器廠 上海智城分析儀器制造有限公司 中華人民共和國上海市實(shí)驗(yàn)儀器 總廠 上海智城分析儀器制造有限公司 上海智城分析儀器制造有限公司 柳州市鴻沛電器有限公司 鐵嶺市醫(yī)療器械總廠 克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司 京君龍實(shí)驗(yàn)儀器有限公司 試管規(guī)格： 15X150 18X180 17X180 小試管 移液管 1ml、 2ml、 5ml、 10ml 移液槍 1ml、 5ml 載玻片、剪刀、鼻塞比色管、燒杯、玻璃棒、標(biāo)簽、三角瓶、培養(yǎng)皿ＰＨ試紙。 實(shí)驗(yàn)方法 發(fā)酵菌種的活化 [25] （ 1） MRS培養(yǎng)基配制： 大豆蛋白胨 10g、牛肉膏 10g、酵母浸膏 5g、葡萄糖20g、吐溫 80 1g、 磷酸氫二鉀 2g、乙酸鈉 5g、檸檬三銨 2g、硫酸鎂 、硫酸錳，加蒸餾水至 1000mL， 1N HCl調(diào) PH為 ， 121℃ 15分鐘滅菌。 （ 2）活化方法 ： 將斜面保藏菌種接種于 10 mL 10％的脫脂乳試管中進(jìn)行三次活化，然后按體積比 2％的接種量接種于 MRS液體培養(yǎng)基中，以適應(yīng)菌株在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，活化好的菌株放于 4℃冰箱中，備用。每次測(cè)定前，各菌株均在 MRS液體培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)接兩次，以便菌株活力得到恢復(fù)。 培養(yǎng)基碳、氮源的優(yōu)化 為確定嗜酸乳桿菌最高活菌數(shù)時(shí)間，以便下面實(shí)驗(yàn)進(jìn)程， 配制 普通 MRS培養(yǎng)基 1000ml， 1N HCl 調(diào) PH 為 ， 用 100ml 量筒分裝到 250ml 的三角錐形瓶當(dāng)中，包扎好 進(jìn)行高溫滅菌（ 121℃ 20 分鐘滅菌 ） ，將制備好的培養(yǎng)基置于37℃恒溫培養(yǎng) 24h，若無菌生長(zhǎng)，即為合格。取 1 瓶培養(yǎng)基出來 ，在 垂直流超凈工作臺(tái) 按 4%的接種量接種 ，分裝到 密封 小試管當(dāng)中，每管分裝 5ml，放到 37℃恒溫箱培養(yǎng)，計(jì)時(shí) 培養(yǎng) ，每隔兩小時(shí)測(cè)定一次吸光度 。 在 MRS 培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上采用各種不同的碳源和氮源分別取代 MRS 中的碳源和氮源（用量分別為 2%）配制培養(yǎng)基，接種菌種發(fā)酵，根據(jù)菌體生長(zhǎng)情況 （以菌體密度為指標(biāo)，下同）判斷碳源和氮源的優(yōu)劣。優(yōu)選的碳源或氮源之間的復(fù)合效果采用復(fù)合配比實(shí)驗(yàn)確定最佳復(fù)合氮源或氮源。 可選的碳源有： 海藻糖、蔗糖、淀粉、麥芽糖、果糖、乳糖、低聚果糖。 可選的氮源有： 培養(yǎng)基 不同 碳氮源 之間搭配 的優(yōu)化 固定鹽溶液的量，對(duì)選出的碳源及氮源進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)，確定最優(yōu)碳氮源之比。由前面優(yōu)化的碳源及氮源結(jié)果來看，碳源選出三種，分別為乳糖，葡萄糖和果糖，氮源也選出三種，分別是大豆蛋白胨代替牛肉膏，胰蛋白胨代替藥理學(xué)蛋白胨和大豆蛋白胨代替藥理學(xué)蛋白胨，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 培養(yǎng)基增 值因子的優(yōu)化 在普通培養(yǎng)基基礎(chǔ)上，添加不同的生長(zhǎng)因子 (包括多種氨基酸和維生素等 )，接種發(fā)酵，根據(jù)菌體生長(zhǎng)情況，確定微量元素及生長(zhǎng)因子的作用。 添加的生長(zhǎng)因子分別為維生素 B1，維生素 B5，谷氨酸，以及蛋氨酸。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表 26 培養(yǎng)基 靜態(tài)培養(yǎng)條件的優(yōu)化 在試管瓶中，普通培養(yǎng)基為研究基礎(chǔ)一設(shè)置不同溫度、接種量，以 OD 為指標(biāo)反映菌體增殖情況，并選出優(yōu)化條件。 培養(yǎng)溫度的篩選 將 100 ml的 MRS液體培養(yǎng)基中接人 4． 0％的菌液，分別于 3 3 39℃下恒溫培養(yǎng)， 以 OD值為指標(biāo)反映菌體增值 情況，并選出優(yōu)化條件 。 接種量的確定 按 6％接種量接活化菌液， 39℃下靜置培養(yǎng)，測(cè)定 OD值。 菌液吸光值（ OD600）的測(cè)定 用 721分光光度計(jì)在 600nm條件下比色，測(cè)定菌液的吸光值。 菌液 pH值的測(cè)定 用 PHS— 25 型精密 pH 計(jì)在室溫下測(cè)定 pH 值。 操作步驟 開機(jī)前的準(zhǔn)備 a） 將電極梗旋入電極梗固定座中； b） 將電極夾插入電極梗中； c） 將 pH 復(fù)合電極安裝在電極夾上； d） 將 E201C 型 pH 復(fù)合電極下端的電極保護(hù)套套拔下，并且拉下電極上端的橡皮套使其露出上端小孔； e) 用蒸餾水清洗電極。 儀器的標(biāo)定 儀器使用前首先要標(biāo)定。一般情況下儀器在連續(xù)使用時(shí) , 每天要標(biāo)定一次。 a) 將測(cè)量電極插座處拔掉 Q9 短路插頭； b) 在測(cè)量電極插座處插入復(fù)合電極； c) 打開電源開關(guān)，儀器進(jìn)入 pH 測(cè)量狀態(tài)； d) 按“溫度”鍵，使儀器進(jìn)入溶液溫度調(diào)節(jié)狀態(tài)（此時(shí)溫度單位 ℃ 指示），按“ △ ”鍵或“ ▽ ”鍵調(diào)節(jié)溫度顯示數(shù)值上升或下降，使溫度顯示值和溶液溫度一 致，然后按“確認(rèn)”鍵，儀器確認(rèn)溶液溫度值后回到 pH 測(cè)量狀態(tài) (溫度設(shè)置鍵在 mV 測(cè)量狀態(tài)下不起作用 )； e) 按“標(biāo)定”鍵，此時(shí) 顯示 “標(biāo)定 1”“ ”及“ mV”， 把用蒸餾水或去離子水清洗過的電極插入 pH＝ 的標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液中，儀器顯示 實(shí)測(cè)的mV 值， 待 mV 讀數(shù)穩(wěn)定后按“確認(rèn)”鍵 ， 儀器顯示“標(biāo)定 2”“ ”及“ mV”，把用蒸餾水或去離子水清洗過的電極插入 pH＝ 的標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液中，儀器顯示 實(shí)測(cè)的 mV 值， 待 mV 讀數(shù)穩(wěn)定后按“確認(rèn)”鍵 ,標(biāo)定結(jié)束，儀器顯示“測(cè)量”進(jìn)入測(cè)量狀態(tài)。 注：儀器在標(biāo)定狀 態(tài)下，可通過按“ △ ”鍵選擇三種標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液中的任意二種（ pH=、 pH= 、 pH=）作為標(biāo)定液（選定的標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液會(huì)在溫度顯示位置顯示出來）標(biāo)定方法同上，第一種溶液標(biāo)定好后仍須按“ △ ”鍵選定第二種標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液。 f） 用蒸餾水及被測(cè)溶液清洗電極后即可對(duì)被測(cè)溶液進(jìn)行測(cè)量。一般情況下，在 24h 內(nèi)儀器不需再標(biāo)定。 測(cè)量 pH值 經(jīng)標(biāo)定過的儀器，即可用來測(cè)量被測(cè)溶液，根據(jù)被測(cè)溶液與標(biāo)定溶液溫度是否相同，其測(cè)量步驟也有所不同。具體操作步驟如下： ( l ) 被測(cè)溶液 與標(biāo)定溶液溫度相同時(shí)，測(cè)量步聚如下： a) 用蒸餾水清洗電極頭部，再用被測(cè)溶液清洗一次： b) 把電極浸入被測(cè)溶液中，用玻璃棒攪拌溶液，使其均勻，在顯示屏上讀出溶液