手足口病的病原學(xué)及其診斷-enteroviruses(編輯修改稿)
2025-03-16 10:04 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 溫冷凍保藏，需長期保存的標(biāo)本存于－ 70℃ 冰箱。（三）血清標(biāo)本采集急性期 (發(fā)病 0～ 5天 )和恢復(fù)期 (發(fā)病 14～ 30天 )雙份配對血清用于抗體檢測。檢測 IgM時，采集 (發(fā)病 7～ 20天 )血。靜脈采集 3～ 5ml全血，置于真空無菌采血管中，自凝后，分離血清，將血清置于－ 20℃ 以下冰箱中冷凍保存。標(biāo)本采集種類、運(yùn)輸和保藏 HFMD（四）咽拭子標(biāo)本采集病人發(fā)病 3日內(nèi)的咽拭子標(biāo)本，用于病原檢測。用專用采樣棉簽，適度用力拭抹咽后壁和兩側(cè)扁桃體部位，應(yīng)避免觸及舌部；迅速將棉簽放入裝有 3～ 5ml保存液（細(xì)胞維持液）的采樣管中，在靠近頂端處折斷棉簽桿，旋緊管蓋并密封， 4℃ 暫存立即 (12h內(nèi) )送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，－ 20℃ 以下低溫冷凍保藏，需長期保存的標(biāo)本存于－ 70℃ 冰箱。（五）皰疹液可同時采集多個皰疹作為一份標(biāo)本，用消毒針將皰疹挑破用棉簽蘸取皰疹液，迅速將棉簽放入內(nèi)裝有 3～ 5ml保存液（維持液或生理鹽水）的采樣管中，在靠近頂端處折斷棉簽桿，旋緊管蓋并密封。所采集標(biāo)本 4℃ 暫存立即 (12h內(nèi) )送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，－ 20℃ 以下低溫冷凍保藏，需長期保存的標(biāo)本存于－ 70℃ 冰箱。手足口病病例標(biāo)本采集要求病人類型 標(biāo)本類型 采集時間 樣本量 保存 運(yùn)送死亡病例腦干組織肺組織等血液死亡后不低于 20克血液不低于2ml70C 冷藏重癥、輕型病例血清 急性期（ 5天內(nèi)） 1ml 70C 冷藏發(fā)病后 5～15天 1ml發(fā)病 3周后 1ml咽拭子 急性期 1ml糞便 急性期 1份皰疹液 有皰疹時 1份備注：（ 1）采集新發(fā)或新入院病人的相關(guān)標(biāo)本；（ 2）樣品采集時，如果標(biāo)本需分裝或分地檢測，注意適當(dāng)增加單份樣品采集量；（ 3）采樣時，做好樣品登記工作，詳細(xì)記錄病人姓名、性別、年齡、發(fā)病時間、出疹時間，采樣時間、主要臨床表現(xiàn)、是否用藥等信息，并注意和個案調(diào)查資料相匹配。? 用于病毒分離的標(biāo)本包括糞便、咽拭子和皰疹液? 如果患者出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，應(yīng)該采集腦脊液標(biāo)本。? 在手足口病的實(shí)驗(yàn)室診斷中，從皰疹液或腦脊液中分 離病毒具有很高的診斷價值。? 用于采集咽拭子的無菌拭子要放在適當(dāng)?shù)谋４嬉褐校? 如維持液或生理鹽水，以防干燥。? 為了保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和有效性，標(biāo)本應(yīng)在病例 發(fā)病后盡早采集，盡快檢測。? 不能立即檢測的標(biāo)本應(yīng)冷凍保存。? 對于血清學(xué)診斷，急性期血清應(yīng)該在發(fā)病后盡早采 集，恢復(fù)期血清在發(fā)病 24周后采集。標(biāo)本采集注意事項(xiàng)加強(qiáng) HFMD病原檢測和監(jiān)測的十分必要? 依據(jù)臺灣 19982023和中國大陸 20232023年的經(jīng)驗(yàn)? 掌握手足口病病原譜，特別是 EV71感染所占的比例，對分析 判斷 HFMD疫情導(dǎo)致重癥和死亡的比例有重要的科學(xué)參考價值。1. 1998年臺灣手足口病暴發(fā)疫情中，在 %輕癥病例中、 75％住院2. 病例中、 92％死亡病例中均分離到 HEV71。3. 2. 2023年山東臨沂發(fā)生了手足口病暴發(fā)，有 8例死亡病例，手足口病的病原譜構(gòu)成中， HEV71約占 84%， CVA16約占 16%； 2023年當(dāng)?shù)厥肿憧诓〔±龜?shù)仍較高，但病原譜發(fā)生較大的變化，病毒毒株是以CVA16為主（占 62％） ,并且沒有重癥死亡病例。3. 2023年阜陽 HEV71手足口病 99 ％以上有是手足口病的病原構(gòu)成比例(實(shí)驗(yàn)室 EMAIL統(tǒng)計 )n嚴(yán)重病例：216。EV71 占 實(shí)驗(yàn)室確診的嚴(yán)重病例的％ n死亡病例：216。EV71 占 實(shí)驗(yàn)室確診的死亡病例的％ 手足口病的診斷一般是通過采集適當(dāng)?shù)呐R床標(biāo)本后進(jìn)行基因檢測、抗原檢測、血清學(xué)抗體檢測、病毒分離和病毒鑒定，如果沒有采到合格的臨床標(biāo)本，或無法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測。很多血清型的腸道病毒能引起手足口病，不同細(xì)胞系對不同病毒的敏感性是有所不同的，而不同時期腸道病毒的流行株也不同。通常用于腸道病毒分離的細(xì)胞系為 RD、 HEp Vero等，聯(lián)合使用上述的兩種或更多細(xì)胞有助于分離到更多的腸道病毒。手足口病的實(shí)驗(yàn)室檢測病毒實(shí)驗(yàn)室檢測類型病毒實(shí)驗(yàn)室檢測類型 病毒實(shí)驗(yàn)室診斷方法病毒實(shí)驗(yàn)室診斷方法檢測抗體/抗原檢測病毒檢測核酸ELISA/HI/PA 蛋白印跡 免疫熒光病毒分離 ELISA 中和試驗(yàn)電鏡基因芯片中和試驗(yàn)RTPCR 實(shí)時熒光定量 PCR套式 PCR LAMP免疫熒光基因芯片每種方法每種方法各有優(yōu)勢各有優(yōu)勢 ,依據(jù)病毒依據(jù)病毒來定檢測策略來定檢測策略New molecular tools for epidemiologystudies and diagnosis待檢標(biāo)本病毒分離CPE陽性RTPCR及序列測定腸道病毒 非腸道病毒測雙份血清中和抗體滴度RTPCRReal time RTPCR檢測病毒核酸序列測定無 CPE常規(guī)實(shí)驗(yàn)補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)中和定型手足口病的實(shí)驗(yàn)室檢測流程見下圖：
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