【文章內(nèi)容簡介】 ATPl ATP—— 三磷酸腺苷【adenosine triphosphate， C10H16N5P3O13】存在于所有生物體中，在細胞內(nèi)主要作用是提供能量l 通過檢測 ATP ，可以間接地證明生物體的存在ATP檢測技術(shù)應(yīng)用（國外）l 20世紀 80年代，英國首先研制出便攜式ATP檢測儀l 隨后在歐洲、美國、日本展開應(yīng)用l 應(yīng)用范圍涉及食品加工、超市和飲食行業(yè)l 檢測內(nèi)容包括微生物和食品殘渣檢測技術(shù)應(yīng)用（國內(nèi)）l 20世紀末， ATP檢測技術(shù)被引進我國l 當時，除個別省級衛(wèi)生監(jiān)督單位裝備，主要在一些外資、合資企業(yè)用于自檢l 2023年我國衛(wèi)生部頒發(fā)了食品加工企業(yè)的 HACCP實施指南，鼓勵食品加工企業(yè)引入 ATP檢測技術(shù)l 2023年 3月衛(wèi)生部新出臺《衛(wèi)生監(jiān)督機構(gòu)建設(shè)指導(dǎo)意見》，要求省、市、地配置ATP檢測反應(yīng)原理光（ RLU）氧化熒光素PPi+AMP熒光光度計測量細胞數(shù)量D蟲熒光素 熒光素酶 O2+Mg2+ATP微生物植物動物+l 靈敏度高 —— 10 15～ 1018 mol/Ll 速度快 —— 常規(guī)培養(yǎng)法 1824h以上，而 ATP只需要幾分鐘l 可行性 —— 微生物數(shù)量與微生物體內(nèi)所含 ATP有明確的相關(guān)性。 通過檢測 ATP含量，可間接得出反應(yīng)中微生物數(shù)量l 可操作性 —— 傳統(tǒng)培養(yǎng)方法需要在實驗室由經(jīng)過培訓(xùn)的技術(shù)人員進 行操作；而 ATP快速潔凈度檢測操作非常簡便，只需簡單的培訓(xùn)即可由一般工作人員進行現(xiàn)場操作。ATP檢測反應(yīng)特征使用方法 拭抹表面以獲取標本 ,如需獲得清洗水溶液標本，則將棉拭子浸入水中 3到 4秒鐘。1球管吸閥棉拭棒棉拭子檢測管第一步 —— 涂抹【 SWAB】 將拭子插入檢測管，用拇指和中指捏住球管，從吸閥處折斷；輕擠球管兩次，擠出球管內(nèi)液體。2使用方法[]第二步 —— 折斷和擠壓【 SNAP AND SQUEEZE 】 將檢測管放入 ATP熒光檢測儀中，蓋上蓋子，倒計時開始并檢測。使用方法[]第三步 —— 插入和檢測【 INSERT AND DETECT 】ATP熒光檢測與常規(guī)培養(yǎng)法的關(guān)系l 檢測結(jié)果 RLU讀數(shù)與常規(guī)培養(yǎng)法結(jié)果 CFU，不能直接對比，但有 80%90% 的相關(guān)性，兩者結(jié)果沒有統(tǒng)計學(xué)顯著差異。l 與常規(guī)培養(yǎng)檢測法配合使用，可用 ATP檢測法檢測污染，而用培養(yǎng)檢測法鑒定污染物種類，污染源。重點檢測對象 — 與食品直接接觸表面n 餐具n 刀具n 量具n 食品架（熟食）n 熟食品加工器械（不銹鋼等）n 不銹鋼食品容器（碗、濾網(wǎng)等）n 不銹鋼器具（勺子、攪拌器等）n 砧板（塑料）n 手（直接接觸食品，認真清洗后）n 其他即食食品直接接觸表面（砧板）檢測結(jié)果判斷和 推薦使用的限定值通過?不合格x警告！30RUL 30～ 100RUL 100RUL結(jié)果判斷顯示措施 不需采取行動 檢查清潔步驟是否被正確執(zhí)行 保證清潔步驟的正確執(zhí)行重新審查清潔步驟更換設(shè)施（比如砧板、塑料碗）農(nóng)藥殘留檢測儀 超聲波清洗器（二）農(nóng)藥殘留的快速檢測 —農(nóng)藥速測卡速測卡法原理 膽堿酯酶可催化靛酚乙酸酯（紅色）水解為乙酸與靛酚（藍色），有機磷或氨基甲酸脂類農(nóng)藥對膽堿酯酶有抑制作用，使催化、水解、變色的過程發(fā)生改變，由此可判斷出樣品中是否含有有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。速測卡法 —— 表面測定法和整體測定法操作步驟 表面測定法（粗篩法） 擦去蔬菜表面泥土，滴 2～ 3滴緩沖溶液在蔬菜表面， 用另一片蔬菜在滴液處輕輕摩擦。 取一片速測卡，將蔬菜上的液滴滴在白色藥片上。 關(guān)閉上蓋， 38℃ 恒溫 3min，使紅色藥片與白色藥片疊合反應(yīng)。 將藥片放在農(nóng)殘檢測儀上， 38℃ 恒溫反應(yīng)10min，預(yù)反應(yīng)后的藥片表面必須保持濕潤。 每批測定應(yīng)設(shè)一個緩沖液的空白對照卡。操作步驟 整體測定法 選取有代表性的蔬菜樣品，擦去表面泥土，剪成1cm左右見方碎片，取 5g放入帶蓋瓶中，加入 10mL緩沖溶液，震搖 50次，靜置 2min以上 取一片速測卡，用白色藥片沾取提取液，放置 10min以上進行預(yù)反應(yīng)，有條件時在 37℃ 恒溫裝置中放置10min。預(yù)反應(yīng)后的藥片表面必須保持濕潤 關(guān)閉上蓋， 38℃ 恒溫 3min，使紅色藥片與白色藥片疊合反應(yīng)。 將藥片放在農(nóng)殘檢測儀上， 38℃ 恒溫反應(yīng) 10min，預(yù)反應(yīng)后的藥片表面必須保持濕潤。 每批測定應(yīng)設(shè)一個緩沖液的空白對照卡。l 白色藥片不變色或略有淺藍色均為陽性結(jié)果。l 白色藥片變?yōu)樘焖{色或與空白對照卡相同，為陰性結(jié)果。 l 對陽性結(jié)果的樣品，可用其它分析方法進一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。 結(jié)果判定（與空白對照卡比較）結(jié)果判定陰性 弱陽性 強陽性速測卡中間的虛線應(yīng)與測試儀壓條對齊，不要歪斜。每批測定應(yīng)設(shè)一個萃取液的空白對照卡，對照卡上不含農(nóng)藥，所顯示的藍色可作為同批樣品的參照。為了避免交叉污染 ,每剪完一個樣品要用清水將剪刀洗凈，攪拌棒和滴管不能在不同樣品間混用，測完一批樣品應(yīng)用紙巾將儀器清潔干凈。注意事項對于韭菜、菠菜等葉綠素含量較高的蔬菜品種，樣品前處理時不要太碎，切勿用力攪拌，防止葉綠素擠出，影響顏色的判斷。速測卡的保存和使用 :常溫下保存 ,保質(zhì)期 6個月 ,避免陽光直射和潮濕。開始檢測工作前，應(yīng)先檢查實驗場所是否打過殺蟲劑或配置過農(nóng)藥樣品，因為散布在空氣中的殺蟲劑會使檢測結(jié)果呈陽性。注意事項（三）瘦肉精的快速檢測（免疫膠體金法）l “ 瘦肉精 ” 學(xué)名為鹽酸克倫特羅，醫(yī)學(xué)上又稱克喘素，常用于治療哮喘。l 由于鹽酸克倫特羅添加于飼料飼喂動物后可明顯促進動物生長 ,提高瘦肉率 , 所以養(yǎng)殖戶稱其為 “ 瘦肉精 ” 。l 生豬食用瘦肉精后皮毛光亮，呼吸急促，個別會出現(xiàn)腿抽搐，站不 穩(wěn)，爬坡困難；宰后豬的肌肉特別鮮紅，后臀肌肉飽滿，肥肉非常薄。瘦肉精介紹l“ 瘦肉精 ” 化學(xué)性質(zhì)特別穩(wěn)定，加熱到 170℃時才能被分解，故一般家庭廚房加熱不能將其分解破壞。l食用后在胃腸道吸收快，作用維持時間持久。中毒后主要癥狀表現(xiàn)為頭疼、頭暈、心悸、心慌、面色潮紅、四肢發(fā)抖等癥狀。瘦肉精介紹l 瘦肉精檢測是否有？l 肉品品質(zhì)檢驗是否合格？l 是否來自非疫區(qū)養(yǎng)殖場？l 是否來自定點屠宰場？ ……免疫膠體金快速檢測板的外觀圖 免疫膠體金快速檢測板 (試劑 )的結(jié)構(gòu)圖產(chǎn)品包裝及產(chǎn)品組成操作步驟 于 5ml離心管中加入 5g左右剪碎或是高速勻漿過的豬肉組織樣，蓋緊管蓋 1 將 裝有樣品的離心管在 90℃ 以上水浴鍋中加熱 10 分鐘 加熱完成后取出冷卻至室溫；可以明顯看到底部有溶液滲出32 吸取 3滴（約 100ul）煮出的樣品滲出液到4操作步驟 吸取 3滴（約 100ul）鹽酸克倫特羅組織樣專用稀釋液到 。充分混合均勻 從包裝鋁箔袋中取出檢測卡平放。吸取 3滴（約 100ul）混勻溶液加入到試劑板加樣孔中5 67樣液滴入加樣孔后開始計時， 5～ 10分鐘左右判定結(jié)果l 從原包裝袋中取出的試劑板，打開后務(wù)必在 1小時內(nèi)使用完l 盡量不要觸摸試劑板中央的白色膜面l 盡量采集瘦肉l 待檢測的樣品切勿反復(fù)冷凍l 試管中水浴加熱樣品時一定要旋緊管帽，防止水蒸氣進入l 純凈水不能作為陰性對照